在水、异丙醇和吡啶（V/V/V=8：3：2）的反应体系中使用100μL的氯甲酸丙酯（PCF）进行一步衍生化，正己烷两步萃取。
1、取1000μL的标准品（含0.005MNaOH)，加人50μL的1mg/mLDL-2-甲基丁酸(溶于0.005MNaOH)作为内标，振荡混匀2min，4°C静置2h，再次振荡混匀2min，4°C，13000r/min离心20min；取500μL上清，加人300μL纯水，300μL异丙醇，200μL吡啶，100μLPCF溶液进行衍生化反应，振荡至充分混匀，25C超声1min；加入300μL正己烷，振荡混匀1min，4°C，3000r/min离心5min，取上清至新的2mL离心管中，再加入200μL正己烷进行第二次提取，合并上清液，加无水硫酸钠去水，振荡混匀，3000r/min离心5min，取上清样品待GC/MS检测。
2、将已确定短链脂肪酸（SCFAs）含量的小鼠肠道内容物样品分别进行其SCFAs含量的80%和120%浓度加标回收测定，加标后的样品经氯甲酸丙酯衍生化，正己烷萃取，上机操作，计算回收率。
