维普资讯 http://www.cqvip.com 中国神经免疫学和神经病学杂志２００７年９月第１４卷第５期 』 ！ ！ ｉ 坠 ！ ！ ！ ！！ ！： ！ ： ・２９３・ 体外星形胶质细胞损伤后炎症模型的建立及应用 吴炳义 ，孙树梅 （１．南方医院ｌ临床医学实验研究中心，南方医科大学，广东广州５ｌ０５１５； ２．南方医院儿科，南方医科大学，广东广州５１０５１５） 摘要：目的建立胶质细胞损伤后体外炎症模型，探讨轻度低温、槲皮素及清蛋白对白细胞黏附及胶质细胞损 伤的影响。方法利用原代培养的成熟星型胶质细胞采用体外划伤方式造成细胞损伤，然后与白细胞共培养建 立星形胶质细胞损伤后体外炎症模型。将共培养的细胞放入ＣＯ 孵箱中，将温度控制在３２℃的亚低温状态， 探讨轻度低温、槲皮素及清蛋白对白细胞黏附及胶质细胞损伤的影响。结果 白细胞主要黏附于损伤边缘的胶 质细胞，并对其有损伤作用。３２。Ｃ亚低温可明显降低白细胞对胶质细胞的黏附和损伤，但无白细胞存在时其作 用不明显。槲皮素和清蛋白对白细胞的黏附无显著影响，对胶质细胞无保护作用。结论低温主要通过降低白 细胞黏附达到保护胶质细胞作用，对单纯的细胞机械损伤无明显保护作用，提示胶质细胞损伤后的反应性增生 不是介导白细胞黏附的关键因素。 关键词：・胶质细胞；损伤；低温；炎症；白细胞 中图分类号：Ｑ１８９；Ｒ３９２ 文献标识码：Ａ文章编号：１００６—２９６３（２００７）０５—０２９３—０４ Ｉｎｉｔｉａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｎｅｒｕｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｍｏｄｅｌ ｉｎ Ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｗｉｔｈ Ｐｏｓｔ—ｔｒａｕｍａｔｉｃ Ｉｎｊ ｕｒｙ ＷＵ Ｂｉｎｇ—ｙｉ ，ＳＵＮ Ｓｈｕ—ｍｅｉ （１．Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｆａｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｇｕａｎｇｚｏｕ ５１０５１５ ２，＂Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，Ｎａｎｆａｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０５１５，Ｃｈｉｎａ） ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｎｅｗ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｐｏｓｔ—ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ，ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ａｎｄ ａｌｂｕｍｉｎ ｏ１３．１ｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ａｄｈｅｒｅｎｃｅ ａｎｄ ａｓｔｒｏｃｙｔｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｗｉｔｈ ｐｏｓｔ—ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｉｎｊｕｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｐｏｓｔ ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｍｏｄｅｌ ｗａｓ ｃｒｅａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｃｏｃｕｈｕｒｅ ｏｆ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｆｒｅｓｈｌｙ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｒａｔ ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ，ａｎｄ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ，ｗｈｉｃｈ ｈａｄ ｂｅｅｎ ｔｒａｕｍａｔｉｚｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｓｃｒａｔｃｈ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｓｃｒａｔｃｈ ｉｎｊ ｕｒｙ ｔｏ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｗａｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｓｃｒａｔｃｈｉｎｇ ａ ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ ｃｕｌｔｕｒｅ ｗｉｔｈ ａ ２００ Ｌ ｓｔｅｒｉｌｅ ｐｌａｓｔｉｃ ｐｉｐｅｔｔｅ ｔｉｐ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ａ ｇｒｉｄ．Ｃｏ—ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｗｅｒｅ ｐｌａｃｅｄ ｏｎ ａ ｓｌｏｗ ｓｐｅｅｄ ｓｈａｋｅｒ ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｇｅｎｔｌｙ ｗａｓｈｅｄ ｔｏ ｒｅｍｏｖｅ ｆｌｏａｔｉｎｇ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｗａｓ ｄｏｎｅ ｂｙ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｗｉｔｈ Ｃａｌｃｉｎ—ＡＭ ａｔ ３７℃ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｄｈｅｒｅｎｔ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｅｓｔｉｍａｔｅｄ ｆｒｏｍ １０ ｆｉｅｌｄｓ ａｌｏｎｇ ｖｅｒｓｕｓ ａｗａｙ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅｄｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｊｕｒｙ ｕｓｉｎｇ ａｎ ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｗａｓ ｅｓｔｉｍａｔｅｄ ｂｙ Ｌａｃｔｉｃ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ）ｒｅｌｅａｓｅ ａｎｄ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ ａｓｓａｙ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ａｄｈｅｒｅｄ ｔｏ ｉｎｊｕｒｅｄ［（１８７．３＋３１．５）ｃｅｌｌｓ／１０ ｈｐｆ］ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｕｎｉｎｊｕｒｅｄ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ［（１８．３＋１１．４）ｃｅｌｌｓ／１０ ｈｐｆ］． Ｏｐｔｉｍａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｌｏｎｇ ｓｃｒａｔｃｈ ｗｏｕｎｄ ｅｄｇｅ ｏｃｃｕｒｒｅｄ １２ ａｎｄ ２４ ｈｏｕｒｓ ｐｏｓｔ—ｉｎｊｕｒｙ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎｊｕｒｙ ｔｏ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｉｆ ｃｏ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｉｍｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ２ ｄａｙｓ．Ｕｎｄｅｒ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ａｔ ３２℃，ＬＤＨ ｒｅｌｅａｓｅ ａｎｄ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｗｅｒｅ ｒｅｄｕｃｅｄ ｂｖ ５４ ａｎｄ ３７ ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｎｏ ａｎｙ ｓｉｍｉｌａｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ａｎｄ ａｌｂｕｍｉｎ ａｌｔｈｏｕｇｈ ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｃｅｌｌ ｐｒｏｃｅｓｓ ａｆｔｅｒ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｉｎｊｕｒｙ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｉｎ ｏｕｒ ｎｅｗ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｍｏｄｅｌ，ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ａｄｈｅｒｅｄ ｔｏ ｉｎｊｕｒｅｄ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ，ｅｎｈａｎｃｅｄ ｉｎｊ ｕｒｙ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ．Ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ａｔ ３２。Ｃ ｒｅｄｕｃｅｄ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｄｈｅｒｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｉｎｊｕｒｙ ｔｏ ｉｎｊｕｒｅｄ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ．Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ａｎｄ ａｌｂｕｍｉｎ ｈａｄ ｎｏ ａｎｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ａｄｈｅｒｅｎｃｅ ａｎｄ 收稿日期：２００６—０９—０４；修订日期：２００７—０６—０５ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０３０００４７） 作者简介：吴炳义（１９６６一）男，山东省人，博士，副教授，主要从事神经再生与损伤的分子机制研究。通讯地址：南方医院ｌ临床医学实验研究 中心，南方医科大学，广州５１０５１５。联系电话：（０２０）６１６４１０５２。 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国神经免疫学和神经病学杂志２００７年９月第１４卷第５期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ＆Ｎｅｕｒｏｌ ２００７，Ｖｏ１．１４，Ｎｏ．５ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｓｕｒｖｉｖａｌ，Ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｗｉｔｈ ｏｕｒ ｐｒｅｖｉｏｕｓ ｆｉｎｄｉｎｇ ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｃｅｌｌ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｋｅｙ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ａｄｈｅｒｅｎｃｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ；ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｉ￣ｕｒｙ；ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ；ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ；ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ 颅脑损伤是临床常见疾病之一。研究发现，颅 脑损伤的严重程度除原发性损伤外，由炎症细胞侵 入引起的二次损伤对疾病的治疗和预后亦起关键 作用ｌ１］。二次损伤主要表现为，炎症细胞引起新的 行细胞计数．然后加入１ Ｉ Ｃａｌｃｅｉｎ—ＡＭ置３７℃ 避光保存２０ ｍｉｎ，对白细胞进行荧光标记。 １．２．３胶质细胞一白细胞的联合培养模型：将标记 好的白细胞悬液（含１×１０。个白细胞）与１ｍＬ无 细胞损伤及坏死，导致损伤区域扩大，特别是幼儿 期颅脑损伤诱发的炎症反应损伤尤为严重口］。由 于在体情况复杂，目前对炎症细胞引起的损伤机制 尚不十分清楚。 胶质细胞是脑内主要细胞之一，约占脑内细胞 总量的９０ ，除具营养、支持作用外，目前发现其 在颅脑损伤和神经元再生方面亦具有重要作用Ｌ３ 。 该研究采用原代培养的胶质细胞损伤模型 与分 离后的大鼠外周血白细胞共培养建立颅脑胶质细 胞炎症损伤模型，并利用该模型探讨轻度低温、槲 皮素和清蛋白对细胞损伤和白细胞黏附的影响。 １材料和方法 １．１ 材料 １．１．１ 动物：雄性ＳＤ大鼠，体重２００ ｇ左右，用于 分离白细胞。新出生２４ ｈ的ＳＤ大鼠用于胶质细 胞的原代培养。 １．１．２试剂及仪器：ＤＭＥＭ细胞培养基及胎牛血 清为Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ公司产品，细胞培养皿及滤膜为 Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ公司产品，白细胞分离试剂盒为 Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ公司产品，白细胞标记试剂Ｃａｌｃｅ— ｉｎ—ＡＭ及ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ检测试剂盒为Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ公司产品ｌ４］，乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）检测试剂 盒为Ｃｅｄａｒｌａｎｅ公司产品（Ｎｏ：ＣＬ５０４１），槲皮素为 Ｓｉｇｍａ公司产品（Ｎｏ：６１５１２５３）。 １．２方法 １．２．１原代培养的胶质细胞损伤模型的建立：胶 质细胞的原代培养按作者方法 操作，培养４周后 备用。损伤模型按作者方法ｌ６ 操作：于３５ ｍｍ培 养皿的盖上划出纵横交错的格，将盖置于胶质细胞 培养皿下面，用２００ Ｌ加样器头沿盖上的格将 培养的胶质细胞划伤，并换液除去脱落细胞。为保 持细胞损伤程度的一致性，均用同一带格的盖进行 细胞划伤操作。 １．２．２大鼠外周血白细胞的分离及标记：大鼠外 周血白细胞的分离按试剂盒说明操作。分离后进 血清培养液混匀，然后均匀加入至损伤的胶质细胞 表面，放在摇床上使白细胞自由移动，减少非特异 结合，然后置３７℃或３２℃ＣＯ 孵箱培养３０ ｍｉｎ，用ＰＢＳ清洗４次，除去未黏附的白细胞后换 新鲜的培养液，置３７ Ｃ或３２。Ｃ共培养。 １．２．４黏附白细胞计数：用ＰＢＳ清洗细胞后，用 普通光镜在２０ｘ ｌ０放大视野下，沿划伤边缘选定 视野，然后转换荧光镜头进行荧光计数黏附的白细 胞（呈绿色），每个培养皿计数１０个视野。 １．２．５胶质细胞的ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色：取２０“Ｌ ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ混合标记液进行避光染色１５ ｍｉｎ 后，于荧光显微镜下观察死亡细胞（呈红色）。 １．２．６ ＬＤＨ测定：取２００ Ｌ细胞培养液，测定释 放至培养液中的ＬＤＨ，按试剂盒说明操作；培养的 胶质细胞用ＰＢＳ洗涤后，用细胞刮板刮下并收集 至１．５ ｍＩ 的离心管中，匀浆后离心取上清，按试 剂盒说明测定总ＬＤＨ。Ｉ ＤＨ释放率＝培养液 ＬＤＨ／细胞总ＬＤＨ。 １．２．７槲皮素及清蛋白的处理：将槲皮素溶解于 二甲亚砜（ＤＭＳＯ）配成５０ ｍｍｏｌ／Ｌ的储存液，取２ Ｉ 储存液加入至２ ｍＩ 培养液中，其工作浓度为 ５０ ｍｍｏｌ／Ｉ 。取清蛋白溶解于１×ＰＢＳ配制成２５、 ５０ ｍｍｏｌ／Ｌ浓度，取２ Ｌ储存液加入至２ ｍＬ培 养液中，其工作浓度分别为２５、５０ ｍｍｏｌ／Ｌ。 １．２．８统计学处理：数据以均数±标准差表示，采 用ＳＰＳＳ１１．５统计软件行方差齐性检验及单因素 方差分析（ＳＮＫ检验）。 ２ 结果 ２．１胶质细胞与白细胞共培养 胶质细胞划伤 后ｌ２ ｈ，损伤边缘整齐，细胞突起不明显（图ｌＡ）， 白细胞黏附在损伤边缘的胶质细胞上（图１Ｂ），最 大黏附发生于损伤后１２～２４ ｈ。显微镜下计数１０ 个视野平均黏附的白细胞数为（１８７．３±３１．５）个； 在未受损伤的区域内白细胞很少黏附，１０个视野 平均黏附的白细胞数为（１８．３±１１．４）个。白细胞 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国神经免疫学和神经病学杂志２００７年９月第１４卷第５期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ＆Ｎｅｕｒｏｌ ２００７，Ｖｏ１．１４，Ｎｏ．５ 黏附２ ｄ后，对与之结合的胶质细胞有明显杀伤作 用，经ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色后发现死亡细胞主要集 中于白细胞黏附的损伤边缘。 图１胶质细胞划伤后与白细胞共培养１２ ｈ后的白细胞黏附 ×２００ Ａ：相差照片，与Ｂ为同一视野：Ｂ：白细胞主要黏附于划 伤边缘的胶质细胞，在非划伤区仅有少量白细胞黏附 Ｆｉｇ １ Ａｄｈｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｔｏ ｔｒａｕｍａｔｉｃ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ：Ｔｒａｕ— ｍａｔｉｃ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ＣＯ—ｃｕｌｔｕｒｅ ｗｉｔｈ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｆｏｒ １ ２ ｈ （Ａ），ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｍｏｓｔｌｙ ａｄｈｅｒｅｄ ｔｏ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｎｅａｒ ｓｃｒａｔｃｈ ｅｄｇｅ ｂｕｔ ｌｉｔｔｌｅ ｉｎ ｎｏｎ—ｔｒａｕｍａｔｉｃ ａｒｅａ（Ｂ） ×２ＯＯ ２．２低温对白细胞黏附及胶质细胞损伤的影响 胶质细胞划伤后与白细胞继续培养２４ ｈ（ｒ／一６） 结果显示，白细胞加入前、后完全置３７。Ｃ（３７。Ｃ／ ３７ Ｃ）条件下时ＬＤＨ释放率为（７０±４） ，白细胞 黏附率为１．Ｏ¨Ｏ±０．０７；白细胞加入前、后温度为３７ ℃／３２。Ｃ条件时ＬＤＨ释放率降至（５５±３） ，白细 胞黏附率降至０．７３±０．０６，与３７℃／３７℃条件比较 差异有统计学意义（均Ｐ＜０．０５）；白细胞加入前、 后完全置于３２℃（３２。Ｃ／３２。Ｃ）条件时Ｉ ＤＨ释放率 则降至（３２±２） ，白细胞黏附率降至０．６３± ０．０６，同３７℃／３７ Ｃ组相比分别降低了５４．３ 和 ３７．０ Ａ（均Ｐ＜０．０１）。说明３２。ｏＣ亚低温能够降低 白细胞黏附，减少胶质细胞ＬＤＨ的释放。但在无 白细胞存在而仅有胶质细胞划伤的情况下，３７℃／ ３２℃、３２℃／３２℃条件培养对白细胞黏附和ＬＤＨ 释放率无显著影响，说明３２Ｃ亚低温通过减少白 细胞的黏附达到保护细胞的作用。 ２．３槲皮素和清蛋白对白细胞黏附及胶质细胞损 伤的影响 共培养时加入槲皮素（浓度分别为５Ｏ 和１００ ｍｍｏｌ／Ｉ ）和清蛋白（浓度分别２５和５Ｏ ｅｒｔｏｏｌ／Ｌ）对白细胞黏附和ＬＤＨ释放亦无显著影 响。 ３ 讨论 体外星形胶质细胞损伤后炎症模型可以模拟 在体情况下炎症细胞的黏附和杀伤过程，从一个侧 面反映出原发性损伤后脑内炎症反应的过程。该 研究发现，同未划伤的胶质细胞相比，损伤后的胶 质细胞能够优先结合白细胞。这种结合发生于损 伤后１ ｈ内，最大结合发生于损伤后的１２～２４ ｈ 内。由于与白细胞的结合需黏附因子参与，因此受 损伤的胶质细胞是否高表达了能结合白细胞的黏 附分子尚待证实。 该研究结果发现，３２℃亚低温可显著减少白细 胞的黏附及降低胶质细胞的损伤，对胶质细胞有保 护作用。临床采用颅脑低温的治疗温度一般控制 在３３～３５ Ｃ范围内，考虑到脑内外温度传导的差 异，该条件下颅内细胞的温度可能也在３２～３３℃ 左右，该结果同临床经验治疗温度相近＿７］。该模型 可将温度控制在以“度（℃）”为单位的条件下，解决 了在体情况下无法将温度变化范围精确控制在 １℃以内的缺点。 目前认为低温可降低颅脑损伤的机制为：（１） 低温可降低脑细胞的代谢率，减少其对氧的需求； （２）保护脑细胞膜的完整性，减轻炎症反应等＿８］。 目前在整体动物的研究中很难区分上述机制中哪 些占主要地位及哪些占次要地位。例如在体情况 下的颅脑损伤无法排除白细胞的参与，不能区分亚 低温通过何种机制保护细胞，主要是保护单纯的机 械损伤？还是降低炎症细胞介导的损伤？在建立 的体外模型中，３２℃亚低温可减少白细胞的黏附及 降低胶质细胞的损伤，但在无白细胞存在时这种保 护作用不明显，说明３２。Ｃ亚低温保护胶质细胞的 机制是通过减少白细胞黏附实现的，推测整体动物 水平也可能有类似机制，即亚低温主要通过降低炎 症细胞介导的损伤，从而达到减轻颅脑损伤后的二 次炎症反应的目的。 ３２｜Ｃ亚低温能够减少白细胞与胶质细胞的黏 附的机制主要是影响了白细胞还是胶质细胞？抑 或两者同时在亚低温条件下发生了改变？该研究 维普资讯 http://www.cqvip.com ・２９６・ 中国神经免疫学和神经病学杂志２００７年９月第１４卷第５期 ｉ ｅｕｒｏｉｍｍｕ”９ 坠 ！ ！ ！， ： ！ ： 将建立的胶质细胞体外损伤炎症模型经３７℃、 ３２℃两种条件处理和白细胞亦经３７。Ｃ、３２℃两种 温度处理后发现，当两种细胞均经３２℃处理时白 细胞黏附最少而且胶质细胞损伤亦最小，提示 ３２。Ｃ亚低温同时影响了两种细胞的表达变化。 ［３］Ｓｏｆｒｏｎｉｅｗ ＭＶ．Ｒｅａｃｔｉｖｅ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｎｅｕｒａｌ ｒｅｐａｉｒ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，２００５，１ １（５）：４００— ４Ｏ７． ［４］Ｗｕ ＢＹ，Ｙｕ ＡＣ．Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｃ－ｆｏｓ，ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ，ａｎｄ ｇｌｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ａｃｉｄｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ 槲皮素是中药的有效成分，有研究显示它通过 降低白细胞炎症因子的释放达到抗炎症作用ｌ＿ｇ』，作 者既往研究也发现槲皮素可以抑制胶质细胞损伤 后的胶质纤维增生和胶质瘢痕形成ｌ＿４ｊ。该研究结 果显示，尽管槲皮素可以抑制划伤后的胶质纤维增 生，却不能抑制白细胞的黏附。说明胶质细胞损伤 后的胶质纤维增生不是诱导白细胞黏附的关键因 素。清蛋白是近年来在颅脑损伤治疗中经常使用 的药物ｕ ，具有促进白细胞的转运和黏附作用ｌ＿１¨， ｉｎｊｕｒｅｄ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ，２０００，６２（５）： ７３Ｏ一７３６． ［５］Ｗｕ ＢＹ，Ｌｉｕ ＲＹ，Ｓｏ ＫＬ，ｅｔ ａ１．Ｍｕｌｔｉ—ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｏｎ ｅｆｆｉ— ｃｉｅｎｔｌｙ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎｔｏ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０００，１０２（２）：１３３— １４１． ［６］Ｓｃｈｍｉｄｔ ＯＩ，Ｈｅｙｄｅ ＣＥ，Ｅｒｔｅｌ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｏｓｅｄ ｈｅａｄ ｉｎｊｕｒｙ－一ａｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｒｅｖ， ２００５，４８（２）：３８８—３９９． ［７］Ｗｒｉｇｈｔ ＪＥ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｉｎ ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｂｒａｉｎ ｉ￣ｕｒｙ［Ｊ］．Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｎｕｒｓ Ｑ，２００５，２８（２）：１５０— １６１． 但该研究结果未发现此种作用，提示清蛋白改善颅 脑损伤的作用可能并非通过降低白细胞黏附引起。 ［８］Ｓａｈｕｑｕｉｌｌｏ Ｊ，Ｍｅｎａ ＭＰ，Ｖｉｌａｌｔａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｄｅｒａｔｅ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅｖｅｒｅ ｔｒａｕｍａｔｉｃ 当然是否由于清蛋白只影响白细胞与神经元而不 是胶质细胞的黏附，尚可利用该模型的设计思路， 采用原代培养的神经元替代胶质细胞进一步证实。 参考文献 ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙ：ａ ｇｏｏｄ ｉｄｅａ ｐｒｏｖｅｄ ｉｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ，２００４，１０（１８）：２１９３—２２０４． ［９］Ｌｉｕ ＪＪ，Ｓｏｎｇ ＣＷ，Ｙｕｅ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｅｌａｙ ｉｎ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ａｃｔｉ— ［１］Ｍｏｒｇａｎｔｉ—Ｋｏｓｓｍａｎｎ ＭＣ，Ｒａｎｃａｎ Ｍ，Ｓｔａｈｅｌ ＰＦ， ｅｔ ａ１．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｂｒａｉｎ ｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ［Ｊ］．Ｉｎｆｌａｍｍ Ｒｅｓ，２００５，５４ （１２）：５００—５０７． ｉｎｊｕｒｙ：ａ ｄｏｕｂｌ￣ｅｄｇｅｄ ｓｗｏｒｄ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ，２００２，８（２）：１０１－１０５． ［１０３ Ｃｏｏｐｅｒ ＤＪ．Ｓａｌｉｎｅｓ，ｏｓｍｏｌｅｓ ａｎｄ ａｌｂｕｍｉｎ［Ｊ］．Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｒｅｓｕｓｃ，２００５，７（３）：１７７－１８０． ｒ ２］Ｐｏｔｔｓ ＭＢ，Ｋｏｈ ＳＥ，Ｗｈｅｔｓｔｏｎｅ ＷＤ，ｅｔ ａ１．Ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｉｎｊｕｒｙ ｔｏ ｔｈｅ ｉｍｍａｔｕｒｅ ｂｒａｉｎ：ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｉｎｊｕｒｙ，ａｎｄ ｉｒｏｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄａｍａｇｅ ａｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈｅｒａ ［１１１ Ｋｌｏｐｐ Ｒ，Ｓｃｈｍｉｄｔ Ｗ，Ｎｉｅｍｅｒ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ ｍｉｓｔｌｅｔｏｅ ｅｘｔｒａｃｔ［Ｊ］．Ｉｎ Ｖｉｖｏ，２００１，１５（６）：４４７—４５７． ｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ［Ｊ］．ＮｅｕｒｏＲｘ，２００６，３（２）：１４３—１５３． （上接第２９２页） ｒ ７］Ｖｅｚｚａｎｉ Ａ，Ｍｏｎｅｔａ Ｄ，Ｒｉｃｈｉｃｈｉ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｔｅｍｐｏｒａｌ ｌｏｂｅ ｅｐｉｌｅｐｓｙ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１９８５，１４：３７５ ４Ｏ３． ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｎ ｓｅｉｚｕｒｅｓ ａｎｄ ｅｐｉｌｅｐｔｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｅｐｉｌｅｐ— ｓｉａ，２００２，４３（Ｓｕｐｐ１．５）：３０—３５． ｒ ５］Ｄｅ Ｓｉｍｏｎｉ ＭＧ，Ｐｅｒｅｇｏ Ｃ，Ｒａｖｉｚｚａ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｆｌａｍ— ｍａｔｏｒｙ ｅｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ａｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ［８］Ｓｈａｎｄｒａ ＡＡ，Ｇｏｄｌｅｖｓｋｙ ＬＳ，Ｖａｓｔｙａｎｏｖ ＲＳ，ｅｔ ａ１． Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＴＮＦ－ａｌｐｈａ ｉｎ ａｍｙｇｄａｌｅ ｋｉｎｄｌｅｄ ｒａｔｓ［Ｊ］． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ，２００２，４２：１４７—１５３． ｒａｔ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｂｙ ｌｉｍｂｉｃ ｓｔａｔｕｓ ｅｐｉｌｅｐｔｉｃｕｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２０００，１２（７）：２６２３—３３． ［６］王珍，刘庆莹，朱长庚，等．戊四氮致痫大鼠脑和 ｒ ９］Ｔｕｒｒｉｎ ＮＰ，Ｒｉｖｅｓｔ Ｓ．Ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅ— ｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｓｅｉｚｕｒｅｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏ— 脑脊液ＩＩ，１ｔ３、ＴＮＦ－ａ含量的变化及大脑皮质和海马 内ＧＦＡＰ和ｃｙｅｌｉｎ Ｄ１表达［Ｊ］．华中科技大学学报， ２００５，２：１２９—１３７． ｇＹ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｅｐｉｌｅｐｓｙ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｂｉｏ Ｄｉｓ，２００４， 】６（２）：３２１－３３４．
