医技与临床 ≯０ 叠 ∥ ≯ ∥∥ 毒 ≯ 中外医学研究 ２０１２年３月 第１０卷第７期（总第１５９期） 零零 ≯ ∥曩≯ 季≯ ０簦０＿≮∥｜。０＿０■ ０００ ３种不同实验条件的ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ的比较研究 刘婷 重庆市秀山县人民医院（重庆４０９９００） 【摘要】 目的：探讨３种不同实验条件下，采用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ的效果。方法：将在笔者所在血库进行健康体检的４８例ＨＢ— ｓＡｇ检测阳性血清标本，分别３种不同实验条件用ＨＢｓＡｇ检测试剂盒检测，探讨实验条件对于检测ＨＢｓＡｇ的影响。结果：三组不同条 件下检出率基本一致，３７℃孵育３０ ｍｉｎ与４℃孵育２４ ｈ检出率略优于其他实验条件，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。３７℃孵育３０ ｍｉｎ ＯＤ值高于其他组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论：在试剂条件、实验仪器、实验操作、离心时间及离心转速、洗板、显色时间及温 度一致的情况下，３７℃孵育３０ ｍｉｎ ＯＤ值高于其他反应条件，检出率１００％，值得临床推广应用。 【关键词】 实验条件；ＥＬＩＳＡ；检测；ＨＢｓＡｇ ＨＢｓＡｇ即乙肝表面抗原，为乙肝病毒的外壳蛋白，常伴随乙 ９５．８％；２０ ｒａｉｎ阳性４７例，检出率９７．９％；３０ ｍｉｎ阳性４８例，检 出率１００．０％。２组孵育１０ ｍｉｎ阳性４６例，检出率９５．８％； ２０ ｍｉｎ阳性４７例，检出率９７．９％；３０ ｍｉｎ阳性４７例，检出率 ９７．９％。３组阳性４８例，检出率１００．０％。三组不同条件下检测 肝病毒存在，是已感染乙肝病毒的标志之一＿ｌ Ｊ。可广泛分布于患 者血液、唾液、精液、阴道分泌物、乳汁、汗液、泪液、鼻咽分泌物 中。临床检测ＨＢｓＡｇ常用ＥＬＩＳＡ等免疫学方法及ＰＣＲ等分子生 物学方法，ＥＬＩＳＡ法检测简便、快速，特异性强，灵敏度高，可重复 结果基本一致，３７℃孵育３０ ａｉｒｎ与４℃孵育２４ ｈ检出率略优于 其他实验条件，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。 ２．２三组实验条件下ＯＤ值均值比较１组孵育１０ ｍｉｎ ＯＤ均 值为１．８４，２０ ｍｉｎ ＯＤ均值为２．１８，３０ ｍｉｎ ＯＤ均值为２．４３。２组 性好，且对实验室仪器要求不高，无放射性污染，广泛在临床应 用 。ＥＬＩＳＡ法检测受实验条件影响较明显，常见的有离心机转 速及离心时间、孵育温度、反应时间、洗板、振荡等 Ｊ。本研究比 较３种不同实验条件下，采用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ的效果，为临 孵育１０ ｍｉｎ ＯＤ均值为１．６７，２０ ｍｉｎ ＯＤ均值为１．９８，３０ ｍｉｎ ＯＤ 均值为２．１６。３组ＯＤ均值为２．２１。３７℃孵育３０ ｍｉｎ ＯＤ值高 于其他组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。 ３讨论 床选择合适的实验条件提供指导。 １资料与方法 １．１一般资料选择２０１０年１月一２０１０年１２月于笔者所在医 院血库进行健康体检的献血者，ＨＢｓＡｇ检测阳性的４８份标本，分 离血清后置一２０℃冰箱保存备用。 １．２实验仪器及试剂ＨＢｓＡｇ ＥＬＩＳＡ试剂盒购自北京万泰生物 工程实业有限公司，批号为Ｂ２０１００７１０。ＨＢｓＡｇ标准品由卫生部 ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ具有操作简单，灵敏度高，特异性好等 优点，广泛应用于临床。但ＥＬＩＳＡ实验中各个环节均可影响检测 结果，未严格按照操作规范实验，可能出现假阳性或假阴性结果。 主要影响因素有：血液标本发生溶血、脂血及细菌污染；离心时间 及离心转速；标本及实验试剂加样不准；反应温度；洗板；显色时 间及温度等 Ｊ。本次实验从反应时问及温度两方面探讨不同实 验条件对检测结果的影响。 研究结果表明，三组不同实验条件对ＨＢｓＡｇ检出率差异无统 计学意义（Ｐ＞０．０５）。在同一孵育温度下，反应时问在ｌ０—３０ ｍｉｎ 临检中心提供，批号为１０１１。实验中所用仪器有：Ｍｕｈｉｓｋａｎ Ｍｋ３ 酶标仪，ＢｉｏＴｅｋ—ＥＬＸＳ０洗板机，ＨＨ一４型数显恒温水浴锅。 １．３实验方法调节室温至２５℃左右，采用３种不同条件进行 实验，分别为１组３７℃孵育１０ ｒａｉｎ，２０ ｍｉｎ，３０ ｍｉｎ；２组２５℃反 应１０ ｍｉｎ，２０ ｍｉｎ，３０ ｍｉｎ；３组４℃冰箱孵育２４ ｈ。严格按照试剂 盒操作步骤进行，每个血清样本均检测４次，每次设置５孔平行 检测。每次实验设空白对照孔１孔，阴性对照、阳性对照各２孔。 以３７℃反应３０ ｍｉｎ为例，基本步骤如下：（１）平衡。从冰箱中取 内，ＯＤ值与反应时间呈线性关系，时间越长，ＯＤ值越大。在同一 反应时间内，３７ ｏＣ ＯＤ值高于其他反应温度。以上结果表明，在试 剂条件、实验仪器、实验操作、离心时间及离心转速、洗板、显色时 间及温度一致的情况下，３７ ｏＣ孵育３０ ｍｉｎ ＯＤ值高于其他反应条 出室内质控血清及检测试剂盒，室温平衡３０ ｍｉｎ待用。（２）配 液。蒸馏水或去离子水２０倍稀释浓缩液。（３）加样。于各孔中 加入待检样品，阴性对照，阳性对照及室内质控品各５０ ｌ。（４） 加酶。各孔分别加入酶标试剂５０ ｔｘｌ。（５）温育。封板膜封板后 置于（３７±１）ｏＣ孵育３０ ｍｉｎ。（６）洗涤。揭开封板膜，然后用洗 板机洗涤酶标板５次，最后一次尽可能扣干。（７）显色。各孔分 件，检出率１００％，值得临床推广应用。４℃孵育２４ ｈ，检出率也可 为１００％，但反应时间较长，不适宜临床推广应用。 参考文献 ［１］韩文明，黄燕．ＥＬＩＳＡ检测ＨＢｓＡｇ影响因素的分析［Ｊ］．中国 医药指南，２０１１，９（４）：４７—４８． 别加入显色剂Ａ、Ｂ各５Ｏ ｌ，（３７±１）℃避光显色１５ ｍｉｎ。（８）测 定。每孔各加终止液５０ ｌ，酶标仪于４５０ ａｍ处测定ＯＤ值。其 他组实验步骤参考此步骤进行，将反应时间及温度作相应改动。 ［２］郭种，张真铭．ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ实验条件的优化［Ｊ］．国 际检验医学杂志，２０１１，３２（６）：６５６—６５７． ［３］马小燕，张弘．ＥＬＩＳＡ不同孵育条件ＨＢｓＡｇ检测结果的比较 ［Ｊ］．广西医科大学学报，２０１０，２７（３）：４４０—４４１． １．４结果判定１．５统计学处理－ 测定孔ＯＤ值／阴性对照孔ＯＤ值（Ｓ／Ｎ）大于 采用ＳＰＳＳ １８．０统计软件进行，计数资料采 ●２．１判为阳性。比较３种不同检测条件下，检测结果的一致性。 用 检验，计量资料采用ｔ检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ２结果 ［４］冯晓明．影响ＥＬＩＳＡ法检测乙肝病毒表明抗原的主要原因 ［Ｊ］．基层医学论坛，２０１０，１４（５）：４４３—４４４． ２．１三组检测结果比较——１组孵育１０ ｍｉｎ阳性４６例，检出率 （收稿Ｅｔ期：２０１２—０１—０３）（编辑：徐睿瑞） ４８——Ｃｈｉｎｅｓｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．７ Ｍａｒ，２０１２
