５０ ｒ—— 后泌乳素水平变化［Ｊ Ｊ．长江大学学报（自然科学版），２００８，５（２）： １０．１１． 妇产科学分册，２００２，２９（２）：８５４￣７． ［１９ｊ中华医学会内分泌学分会《中国甲状腺疾病诊治指南＞编写组． ［１６］梅爱红，梅爱东．杨篷，等．原发性甲状腺功能减退患者治疗前 后血清泌乳素变化［Ｊ］．湖南医学，２００５，１６（１２）：５４转１３． 中国甲状腺疾病诊治指南一一甲状腺疾病的实验室及辅助检查［Ｊ］． 中华内科杂志，２００７，４６（８）：６９７－７０２． ［１７］胡绍文．甲状腺功能减退症与乳溢［Ｊ］．中国实用内科杂志， １９９４－，１４（１１）：６４５ ７． ［２ｏ］陈立芳，牛喜英，叶山东．原发性甲减继发垂体腺瘤和高泌乳素 血症二例［Ｊ］．中国厂矿医学，２００３，１６（１）：７８－７９． ［１８］顾一村，高永利．隐匿性高催乳素血症与不孕症［Ｊ］．国外医学 （２０１０—０６—３０收稿） ・讲座・ 定性检测用体外诊断试剂的企业内部参考品的设置 国家食品药品监督管理局医疗器械技术审评中心（１０００５０） 用于定性检测的体外诊断试剂在临床实验室中已经被 广泛应用，其检测的也多为临床风险较高的项Ｅｔ，如病原微 生物抗原或抗体等，因此对此类产品安全性和有效性的要求 相对较高。但是在技术审评的过程中发现，许多产品的企业 内部参考品的设置不慎合理，无法客观评价产品的各种性 能，因此也给产品带来了许多缺陷以及不足之处。企业内部 参考品对于生产企业来说是非常重要的，其是产品原材料选 择、制备、鉴定以及确定原材料质量标准，产品生产工艺确 董劲春 阴性样本，精密度参考品只选择中等阳性的样本，根本无法 体现产品的任何检测性能，对于产品检测灰区样本的能力没 有评价，产品的检测性能也无法明确确定。 所以下文将对企业内部参考品应如何设置进行论述，以 下内容只是对定性检测产品如何设置企业内部参考品进行 概述，有些特殊产品还应进行特殊的考虑。 参考品的基质应与临床被检样本使用相同的基质，如完 全相同基质的样本不易获得，应采用尽可能与临床被检样本 基质接近的样本，并对样本的基质效应进行详细的研究。 定，反应体系组成、反应条件等的最重要的确定标准和依据。 对于此类产品而言，首先原材料对于产品的质量是非常 企业内部参考品至少应包括阳性参考品、阴性参考品、 精密度参考品、最低检出限参考品等。 重要的，无论原材料是生产企业外购的还是自己生产的，生 产企业都应该严把原材料的质量关。对于原材料如何进行 评价、如何确定质量标准，每个企业都有自己的方法，但是通 过技术审评发现，多数企业均是使用企业内部参考品作为评 价标准。抗原、抗体等主要原材料除了进行蛋白含量、纯度、 活性等方面的检测外，最重要的是进行功能性试验，功能性 １阳性参考品 阳性参考品主要可反映产品检测的灵敏度以及对不同 型别被测物的检出能力。 １．１阳性参考品应包括强阳性参考品、中等阳性参考品、弱 阳性参考品，其中主要应以中等阳性参考品、弱阳性参考品 为主，弱阳性参考品的数量应最多，以更好的反映产品的灵 敏度，建议阳性参考品数量至少应包括２ｏ个不同阳性程度 试验就是将原材料组装成试剂盒小样，使用企业内部参考品 进行检测，看是否能达到参考品设置的要求或者哪种来源的 原材料其检测性能更好，来确定选择哪种来源的原材料。 对于生产工艺和反应体系的确定也主要依赖于企业内 部参考品，主要生产工艺包括抗原、抗体的包被浓度、包被时 的参考品，如被测物包括不同的型别及亚型，阳性参考品数 量还应相应的增加。 间、显色系统浓度和用量的确定等，反应体系的优化主要包 括被测样本用量、试剂用量、反应的温度、湿度、时间等的确 阳性参考品的制备可将强阳性参考品使用健康人的阴 性血清进行系列稀释得到不同稀释度的阳性样本，该稀释用 定，以上条件的确定均是采用不同生产工艺生产的产品和不 同的反应体系检测企业内部参考品，已确定最佳的生产工艺 和反应体系。 阴性血清不能对产品检测产生不利的影响。同时还应在临 床样本中选择不同阳性强度的样本直接作为参考品。 弱阳性参考品是反映产品检测灰区样本能力的重要指 企业内部参考品设置的是否合理就显得非常重要，如果 参考品的设置不合理或者存在缺陷，那就会造成整个产品的 原材料选择、生产工艺的确定和反应体系的组成均存在较大 的问题，导致产品的质量不能达到临床使用的安全性和有效 性，容易在临床检测过程中出现错误结果而影响临床的诊断 和治疗。 因此，企业内部参考品的设置必须客观合理，能够充分 评价产品的质量，有些企业对于参考品的设置欠考虑，如阳 性参考品只选择强阳性的样本，阴性参考品只选择健康人的 标，其滴度应在产品检测限的附近或稍高于产品的最低检出 限，必须精确确定弱阳性参考品中被测物的浓度。 １。２阳性参考品应包括被检测物质的各种型别，被检测物 质可能存在各种基因型，包括不同的型别和亚型，在阳性参 考品的设置中应尽可能包括临床样本中所有可能检测到的 型别及亚型。并且不同型别也应该设置不同的阳性稀释度 样本，特别是低滴度的阳性样本，每个型别的低滴度阳性样 本至少应包括三个样本。 １．３阳性参考品应使用适当的方法或金标准方法进行确 认，首先应确认被检测物的存在以及存在的形式，其次应对 被检测物的滴度进行确认。需对不同阳性参考品进行定性 或定量的确认。 参考品中的被测物应与临床检测样本中的被测物尽可 检测的重复性进行评价。 重复性检测结果的ＣＶ值一般情况下应＜１０％，有些特 殊方法的检测试剂由于方法学的原因可以适当放宽重复性 要求。 能的一致，特殊情况下可以采用基因重组或合成的物质。但 是该类物质的性质应进行充分的验证，确保其与临床样本中 的被测物性质基本一致。 ３．５埘于一些可能产生ＨＯＯＫ效应的检测方法，如酶联免 疫分析法、胶体金法，应制备强阳性精密度参考品进行精密 度的检测，以验证产品避免产生ＨＯＯＫ效应的能力。ＨＯＯＫ 效应是一些免疫检测方法无法避免的方法缺陷，企业在研发 ２阴性参考品 阴性参考品的主要用途是反映产品检测的特异性，特异 和生产产品时应对产品的ＨＯＯＫ效应进行详细的研究，并给 出产品检测不会产生ＨＯＯＫ效应的被测物最大浓度，企业应 性的好坏对产品性能的影响是十分重要的。 ２．１阴性参考品应至少包括高值（高滴度）阴性参考品、阴 性参考品、干扰样本等。 ２．２高值（高滴度）阴性参考品，此设置可以验证产品检测 的稳定性。高值阴性样本可进一步验证产品Ｃｕｔ—ｏｆ值的设 定是否合理及该产品正确检测灰区样本的能力，此种样本的 数量应至少为３个。 ２．３阴性参考品为不含被测物的阴性样本，阴性样本可采 集确定没有被测物的健康人血样本。 ２．４干扰样本为设置一定数量的含有可能会产生交叉反应 物质的样本，此项设置对反映产品检测的特异性十分重要。 该类参考品应尽可能包括如具有可能与被测物同源性 的病原微生物、抗体等，对于微生物检测还应具有采样部位 正常可能寄生的微生物，以及引起相似临床症状的病原微生 物。此外，以上参考品还应包括不同稀释度的样本，主要应 为强阳性样本和弱阳性样本，特别是人体可能出现的病理浓 度样本。 对于其它被测物如病原体ＩｇＭ抗体的检测，需包括含有 该被测物ＩｇＧ抗体，其它同源病原体ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ抗体的样 本，并应包括不同的滴度。 ２．５干扰样本还应包括治疗药物干扰的样本，包括对于该 检测项目可能的治疗药物及含有常规治疗药物浓度的样本。 ２．６阴性参考品和干扰样本应使用适当的方法或金标准方 法进行确认，确认被检测物为阴性。 ３精密度参考品 精密度参考品可反映产品检测的重复性以及重复检测 的稳定性。一般精密度参考品应包括至少两种样本。 ３．１精密度参考品应是包括被测物的主要型别的不同样 本，且不同型别样本应是低滴度阳性样本。 ３．２精密度参考品应包括高值阴性样本，该样本可反映产 品检测的稳定性。 ３．３精密度参考品的检测次数应在１０次左右，检测次数过 多或过少均无法客观反映产品检测的重复性。 ３．４精密度的计算：在定性检测的体外诊断试剂产品中，如 可通过阅读仪或其它读取设备读取光强度或其它信号来判 断实验结果的，例如以酶联免疫法原理检测的试剂，应采用 检测的ＯＤ值计算重复检测的标准差、均值、变异系数（ＣＶ 值）来表示产品检测的重复性，不能只以目测颜色深浅来对 该根据此浓度设置强阳性参考品，以验证同一批产品或不同 批次产品之间是否存在差异，是否会产生ＨＯＯＫ效应。 ４最低检出限参考品 最低检出限参考品是评价产品检测能力的重要工具，对 于定性产品其是评价产品检测下限的依据，因此其设计的合 理性非常重要。 ４．１如被测物包括多个型别和亚型，最低检出限参考品至 少选择三个主要型别或亚型进行设置。 ４．２选择不同型别的强阳性样本作为基础样本，使用健康 人的阴性血清对强阳性样本进行倍比稀释得到一系列稀释 度的样本，该稀释过程必须保证样本的基质保持不变。使用 待评价产品对不同稀释度的参考品进行检测，每个稀释度参 考品至少检测三次，直至检测为阴性结果为止。检测为阳性 的最高稀释度参考品为最低检出限参考品。 ４．３最低检出限参考品的批问一致性是评价产品是否能保 持批间一致性的重要指标。因此，必须对最低检出限参考品 进行被测物的定量或半定量。 在技术审评过程中经常发现有些申报企业在设置该参 考品时只是选择一个临床的强阳性样本，然后进行倍比稀 释，对系列稀释的参考品进行检测，直至检测到结果为阴性 的参考品，并将上一个稀释度参考品设置为最低检出限的评 价标准，或将该参考品的稀释度设定为评价标准。但是其并 不能清楚的确定参考品中的被测物的具体浓度。因此，这种 设置并不能有效的评价产品的最低检出限，也不能使不同批 次的参考品保持一致性。所以应采用可能的方法对该参考 品进行被测物的定量或半定量，以期给出最低检出限参考品 中的被测物的具体量值。 ４．４最低检出限参考品可以采用国家药监局已经批准上市 的产品、质量较好的同类定量试剂对参考品进行定值，如该 检测项目存在国家或国际的定量标准品，则应对该参考品进 行量值的溯源。如该检测项目没有定量检测试剂可以进行 参考，则可以采用其它方法或金标准的方法对参考品进行定 量或半定量。 如果检测项目已经有国家参考品或者国际参考品，企业 内部参考品的设置应尽可能的溯源至国家参考品或国际参考 品，除了设置国家参考品或国际参考品设定的项目外，企业应 主动设置更多的参考品以充分评价产品的性能，保证生产的 产品可以满足临床使用的安全性和有效性。 （２０１１—０１—２２收稿）
