维普资讯 http://www.cqvip.com 中国药事２００２年第ｌ６卷第ｌ０期 表２黄柏胶囊样品测定结果 批 号 含量（ｍｅｇ粒） ３．１０ ３．２４ ２．９２ ・６３３・ 动相测定本样品时，色谱图中主峰与相邻峰难以完 全分离。加入阴离子型表面活性剂十二烷基磺酸钠 （０．０２５ｍｏｌ・Ｌ ）调整以后的流动相，峰形及分离 度得到很大改善。 参考文献 ２０（】０Ｄ６２ｌ ２０ｏ０ｌ２Ｏ６ ２００１０１０２ ４讨论 １ 卫生部药品标准．中药成方制剂．第５册，１９９２：１５５ ２ 孔少仪．黄柏胶囊中小檗碱的含量测定．中医药研究，２ＯＯＯ， １６（３）：４８ 根据文献报道，用ＨＰＬＣ法测定盐酸小檗碱含 量所用的流动相有多种，最为常见的是乙腈一 ３ 周晓英．薄层扫描法测定黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量．成都 中医药大学学报．２ＯＯＯ．２３（３）：４６ ０．１ｍｏｌ・Ｌ 磷酸二氢钾溶液，经试验发现，用此流 麻芩止咳颗粒检测方法的研究 金 斌（安徽省药品检验所合肥２３００６１） 中图分类号：Ｒ２８４．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２—７７７７（２００２）１０—０６３３—０３ 麻芩止咳颗粒由麻黄，黄芩，浙贝母，金银 花，甘草等药味经提取制成的颗粒。具有清肺化 痰，止咳平喘之功效，临床上用于治疗痰热所致之 咳嗽，慢性支气管炎急性发作，喘息性支气管炎。 本文选择麻黄，浙贝母，金银花，甘草进行薄层定 性鉴别，以君药黄芩中主要成分黄芩苷为含量测定 指标，采用高效液相色谱法对其进行含量测定，方 法简便灵敏可靠。 １仪器与试药 ０．５％茚三酮乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试 品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜 色的斑点，而阴性对照则无相应斑点（见图１）。 ２．２贝母素甲定性鉴别 取本品１０ｇ，研细，加氯仿５０ｍｌ和浓氨试液 ２ｍｌ，置水浴中加热回流３０分钟，放冷，分取氯仿 层，置水浴上蒸干，残渣加氯仿ｌｍｌ使溶解，作为 供试品溶液。另取贝母素甲对照品，加氯仿制成每 高效液相色谱仪（岛津ＬＣ—ｌ０ＡＴ）；硅胶Ｇ （烟台化工研究所）；麻黄碱、贝母素甲、绿原酸、 甘草次酸、黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定 ｌｍｌ含ｌｍｇ的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱 法试验，吸取供试品溶液ｌ０ ｌ、对照品溶液２ｔ．ｄ， 分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以醋酸乙酯一甲 醇一浓氨试液（１７：２：１）为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而 阴性对照则无相应斑点（见图２）。 所）；麻芩止咳颗粒（安徽省天康药业有限公司）； 试剂均为ＡＲ级。 ２薄层定性鉴别 ２．１盐酸麻黄碱定性鉴别 取本品２ｇ，置具塞锥形瓶中，加氯仿５０ｍｌ， 浓氨试液ｌｍｌ，密塞，强力振摇ｌ０分钟，超声处理 ４０分钟，室温放置过夜，吸取氯仿液２５ｍｌ，置水 浴上挥干，残渣加甲醇２ｍｌ使溶解，作为供试品溶 液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每ｌｍｌ含 ｌｍｇ的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试 验，吸取对照品溶液和供试品溶液各５ｔＡ，分别点 于同一硅胶Ｇ薄层板上，以氯仿一甲醇一浓氨试 液（２０：５：０．５）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 图ｌ盐酸麻黄碱薄层色谱图 图２贝母素甲薄层色谱图 Ｓ。盐酸麻黄碱对照品；Ｓ２贝母素甲对照品； Ｘ：供试品；Ｙ：阴性对照 维普资讯 http://www.cqvip.com ・６３４・ ２．３绿原酸定性鉴别 取本品５ｇ，研细，加乙醇２０ｍｌ，置水浴中加热 回流３０分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。 另取绿原酸对照品，加乙醇制成每ｌｍｌ含ｌｍｇ的溶 液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供 试品溶液５ ，对照品溶液２ｂｄ，分别点于同一硅胶 Ｇ薄层板上，以醋酸乙酯一丙酮一甲酸一水（５：１： １：１）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 （３６５ｎｍ）下检视。供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性 对照则无相应斑点（见图３）。 ２．４甘草次酸定性鉴别 取本品２ｇ，研细，加水２０ｍｌ，超声处理１０分 钟，用乙醚提取二次，每次２０Ｉｎｌ，弃去乙醚液， 水层用水饱和的正丁醇提取二次，每次２０ｍｌ，合 并提取液，用正丁醇饱和的水２０ｍｌ洗涤，弃去水 洗液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加盐酸ｌｍｌ与 氯仿１５ｍｌ，加热回流１小时，放冷，滤过，滤液蒸 干，残渣加乙醇２ｍｌ使溶解，作为供试品溶液。另 取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每ｌｍｌ含 ０．５ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试 验，吸取上述两种溶液各５ ，分别点于同一硅胶 Ｇ 薄层板上，以环己烷一醋酸乙酯一冰醋酸（５： ３：０．１）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光 灯（２５４ｎｍ）下检视。供试品色谱中，在与对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴 性对照则无相应斑点（见图４）。 图３绿原酸薄层色谱图 图４甘草次酸薄层色谱图 Ｓ３绿原酸对照品；ｓ４甘草次酸对照品；Ｘ－供试品；Ｙ：阴性对照 ３含量测定 ３．１检测波长的选择 参考药典［１］，并对黄芩苷的５０％甲醇溶液在 ２００—３５０ｎｍ波长进行扫描，黄芩苷在２７７ｎｍ波长 处有最大吸收且灵敏度最高，故选定检测波长为 ２７７ｎｍ。 ３．２色谱条件 色谱柱：Ｓｈｉｍ—Ｐａｃｋ ＶＰ—ＯＤＳ 中国药事２００２年第１６卷第１０期 （４．６ｍｍ×１５０ｍｍ）；流动相：甲醇一水一冰醋酸 （４５：５５：１）；流速：ｌｍｌ・ｍｉｎ～；检测波长：２７７ｎｍ； 柱温：室温；进样量：２０ ；理论板数Ｎ：６６ＯＯ。 ３．３对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥器中减压干燥２４ｈ 的黄芩苷对照品４．５５ｍｇ，置５０ｍｌ量瓶中，加５０％ 甲醇适量超声使溶解，冷却后加５０％甲醇稀释至 刻度，摇匀即得。 ３．４线性关系的考察 精密量取对照品溶液１．０、２．０、３。０、４．０和 ５．０ｍｌ，分别置２５ｍｌ量瓶中，加５０％甲醇稀释至刻 度，摇匀，配成浓度分别为３．６４，７．２８，１０．９２， １４．５６，１８．２０ｔ￣ｇ・ｍｌ 的黄芩苷对照品溶液。分别精 密吸取２０ ，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测 定，以黄芩苷进样量为横坐标，相应的峰面积为纵 坐标绘制标准曲线，其回归方程为：Ａ＝２９２４１．６Ｃ 一３６１２１，ｒ＝０．９９９９。结果表明，黄芩苷进样量在 ０．０７８８—０．３９４０ｔ￣ｇ范围内与吸收度峰面积值呈良好 的线性关系。 ３．５样品分离条件的选择 精密称取本品１ｇ，置５０ｍｌ量瓶中，加５０％甲 醇４０ｒｎｌ超声提取２０分钟，放冷，加５０％甲醇稀释 至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液５ｍｌ，置 ５０ｍｌ量瓶中，加５０％甲醇稀释至刻度，摇匀，以 微孔滤膜（０．４５ｔａｎ）滤过，进样测定。供试品中 黄芩苷峰与杂质峰分离度未达到药典要求，且杂质 较多。试验过程中分析柱的柱效也下降得比较快。 经过试验、筛选，根据黄芩苷的性质，采用过聚酰 胺柱纯化样品，分别收集洗脱液，用ＨＰＬＣ进行检 测的方法。并对聚酰胺用量、洗涤水用量及解吸附 洗脱乙醇浓度和用量分别进行了选择，试验结果 为：用聚酰胺２ｇ（柱径１．５ｅｍ，湿法装柱），水 １００ｍｌ可将水溶性杂质基本洗净（且未检出黄芩 苷），在３０％、５０％、７０％三种不同浓度的乙醇中， 以５０％的乙醇解吸附作用最强，１５０ｍｌ可将黄芩苷 从柱上全部洗下。 ３．６供试品溶液的制备 精密称取本品１ｇ，置５０ｍｌ量瓶中，加５０％甲 醇４０ｒｎｌ超声提取２０分钟，放冷，加５０％甲醇稀释 至刻度，摇匀，滤过，精密量取本品５ｍｌ，加于已 处理好的聚酰胺柱（柱径１．５ｅｒａ，２ｇ，过５０目筛， 湿法装柱）上，用水１００ｍｌ洗涤，弃去水洗液，再 用５０％乙醇１５０ｍｌ洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸 干，残渣加５０％甲醇适量使溶解，定量转移至 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国药事２００２年第１６卷第１０期 ５０ｍｌ量瓶中，加５０％甲醇稀释至刻度，摇匀，以 微孔滤膜（０．４５／＿ｔｒｎ）滤过，即得供试品溶液。 ３．７空白试验 取不含黄芩的阴性制剂，按供试品溶液的制备 及测定项下的方法进行处理及测定。结果，阴性制 剂试液在与黄芩苷对照品相同保留时间处无干扰峰 出现，表明处方中其他药味对测定结果无影响。 ＨＰＬＣ图谱见图５。 ０ ５ １０ｔ／ｒａｉｎ ０ ５ １０帅ｎｉ ０ ５ １０ｔ／ｎｉｎ Ａ Ｂ Ｃ 图５麻芩止咳颗粒ＨＰＬＣ色谱图 Ａ．黄芩苷对照品；Ｂ．供试品；Ｃ．阴性对照；ａ．黄芩苷峰 ３．８精密度试验 精密吸取上述浓度为１０．９２ｔ￣ｇ・ｍｌ 的对照品溶 液２０ ，重复进样５次，测定黄芩苷峰面积，结果 ＲＳＤ为０．９９％，表明仪器的精密度良好。 ３．９稳定性试验 精密吸取供试品溶液，于配制后立即注入色谱 仪，并每隔一定时间，测定一次峰面积积分值，共 测定６次。结果ＲＳＤ为１．３５％，表明供试品溶液 在２４ｈ内基本稳定。 ３．１０重复Ｉ生试验 取同一批号（９９０１０６）样品６份，按上述供试 品溶液制备方法制得供试液并测定黄芩苷含量，结 果平均含量为７．３２ｍｇ・ｇ～，ＲＳＤ为０．８９％。 ３．１ｌ加样回收率试验 精密称取已知黄芩苷含量的样品（批号 ９９０１０６）５份，分别加入一定量的黄芩苷对照品， 按上述供试品溶液制备方法制得供试液并测定黄芩 苷的含量，计算回收率，结果平均回收率为 ９８．４％，ＲＳＤ为１．２％。见表１。 ３．１２供试品的测定 分别吸取上述浓度为１０．９２ｔ￣ｇ・ｍｌ 的对照品溶 液及供试品溶液，按上述色谱条件，注入液相色谱 ・６３５・ 仪测定，计算黄芩苷含量。测定结果见表２，ＨＰＬＣ 图谱见图５。 表１回收率试验结果 ９９０ｌＯ６ ７．３２ ０．８９ 钙０６０６ ７．２ｏ １．１３ ９９ｌ２Ｏ６ ７．２５ ０．９６ ４讨论 ４．１样品处理 该制剂由１０味中药组成，成分极为复杂，干 扰成分众多，稀释后直接进行色谱测定，不仅分离 不够理想，且对色谱柱污染较大，必须对样品进行 净化处理。采用聚酰胺柱，先用水洗涤，再收集 ５０％乙醇洗脱液进行ＨＰＬＣ测定，在该净化条件 下，可除去干扰黄芩苷测定的大量杂质，黄芩苷洗 脱完全，并能达到基线分离，无杂质峰干扰，提高 了测定的精密度，同时对分析柱也起到了良好的保 护作用，可为大复方中成药制剂的质量分析提供借 鉴。 ４．２流动相选择 高效液相色谱法测定黄芩中黄芩苷含量的报道 较多，方法较为成熟。参考药典…我们对流动相中 甲醇一水一冰醋酸的比例进行了比较，以４５：５５：１ 的条件下，黄芩苷色谱峰分离效果好，保留时间适 中，准确度高。 ４．３结论 方法学研究结果表明，用高效液相色谱法测定 麻芩止咳颗粒中黄芩苷的含量，操作简单，结果准 确，重复性好，能够有效地控制产品的质量，可作 为麻芩止咳颗粒质量标准含量测定的方法。 参考文献 １ 中国药典．一部，２０００：４１８
