广西医学 ２０１３年１月第３５卷第１期 １３ 人参皂甙Ｒｇ３对肺癌荷瘤小鼠免疫功能影响的研究▲ 王家晓张玉梅 ５３００２３；Ｅ—ｍａｉｌ：ｇｚｙｗｊｘ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ） （广西中医药大学第一附属医院肿瘤血液科，南宁市【摘要】 目的探讨人参皂甙Ｒｇ３对肺癌荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法将４８只Ｃ５７ＢＬ／６肺癌荷瘤小 鼠随机分为４组：人参皂甙ＲＳ３高剂量组（１５ ｍｇ／ｋｇ）、人参皂甙Ｒｇ３低剂量组（５ ｍｇ／ｋｇ）、顺铂（ＤＤＰ）组（ＤＤＰ Ｏ．５ ｍｇ／ｋｇ）和生理盐水组，检测各组给药后荷瘤小鼠的脾自然杀伤细胞（ＮＫ）、淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ）、 细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）活性及血清肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）水平。以正常小鼠１２只作为对照组。结果Ｒｇ３低剂量 组、Ｒｇ３高剂量组、ＤＤＰ组生存素阳性率明显低于生理盐水组（ＪＰ＜０．０５）；Ｒｇ３低剂量组、Ｒｇ３高剂量组瘤体质量小 于生理盐水组（Ｐ＜０．０５），但大于ＤＤＰ组（Ｐ＜０．０１）；生理盐水组ＮＫ、ＩＡＫ和ＣＴＬ活性及血清ＴＮＦ水平均较正常 对照组显著下降（Ｐ＜０．０５）；ＤＤＰ组ＮＫ、ＬＡＫ和ＣＴＬ活性及血清ＴＮＦ水平较生理盐水组低（Ｐ＜０．０５）；Ｒ 低剂 量组和Ｒｇ３高剂量组ＮＫ、ＬＡＫ和ＣＴＬ活性及血清ＴＮＦ水平较生理盐水组、ＤＤＰ组明显提高（Ｐ＜０．０５），但仍低于 正常小鼠组（Ｐ＜Ｏ．０５）；Ｒｇ３低剂量组ＮＫ、ＬＡＫ和ＣＴＬ活性及血清 ＩＮＦ水平与Ｒｇ３高剂量组比较，差异无统计学 意义（Ｐ＞０．０５）。结论人参皂甙Ｒｇ３可明显诱导提高荷瘤小鼠特异性抗肿瘤免疫反应。 【关键词】 肺癌；人参皂甙Ｒｇ３；免疫功能；小鼠 【中图分类号】Ｒ ７３４．２ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】０２５３．４３０４（２０１３）０１—００１３—０３ ＤＯＩ：１０．１１６７５／ｊ．ｉｓｓｎ．０２５３—４３０４．２０１３．０１．０４ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ ｏｎ Ｉｎｌｎｌｎｎｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｎｎｌｏｒ－Ｂｅａｒｉｎｇ Ｍｉｃｅ ＷＡＮＧ Ｊｉａ—ｘｉａｏ，ＺＨＡＮＧ Ｙｕ—ｍｅｉ （Ｄ甲 ｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆ￣ｉａｔｅａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｑ加 Ｕｎｉｖｅｓｒｉｔｙ ｆＴｏｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄ／ｃ／ｎｅ，Ｎａｎｎ／ｎｇ ５３００２３，Ｏａｎａ） 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ ｏｎ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ—ｂｅ Ｉｌｇ ｍｉｃｅ ｔｈ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｏｒｔｙ—ｅｉｇｈｔ ｔｕｍｏｒ－ｂｅａｒｉｎｇ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ Ｃ５７ＢＬ／６ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｆｏｕｒ ｇｒｏｕｐｓ，ｈｉｈ—ｇｄｏｓｅ Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ ｇｒｏｕｐ（Ｒｇ３，１５ ｍｇ／ｋｇ），ｌｏｗ－ｄｏｓｅ Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ ｎｇ３ ｇｒｏｕｐ（Ｒｇ３，５ ｍｇ／ｋｇ），ｃｉｓｐｌａｔｉｎ （ＤＤＰ）ｇｒｏｕｐ（ＤＤＰ，０．５ ｍｇ／ｋｇ）ａｎｄ ｓａｌｉｎｅ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｓｐｌｅｎｉｃ ｎａｔｒａｕｌ ｋｉｌｌｅｒ（ＮＫ）ｃｅＨｓ，ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｉｋｌｌｅｒ（ＬＡＫ）ｃｅｌｌｓ，ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ（ＣＴＬ），ａｎｄ ｓｅｒｕｎｌ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ（ＴＮＦ）ｌｅｖｅｌ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｍｏｒ－ｂｕｅａｒｉｎｇ ｍｉｃｅ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ．Ｔｗｅｌｖｅ ｎｏｒｍａｌ ｍｉｃｅ ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｏｔｒｅｓ ｏｆ Ｓｕｒｖｉｉｎ ｏｆｖ ｌｏｗ－ｄｏｓｅ Ｓｇ３ ｇｒｏｕｐ，ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ Ｓｇ３ ｇｒｏｕｐ，ＤＤＰ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｓａｌｉｎｅ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０５）；Ｔｕｍｏｒ ｍａｓｓ ｏｆ ｌｏｗ—ｄｏｓｅ Ｓｇ３ ｇｒｏｕｐ，ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ Ｓｇ３ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｓａｌｉｎｅ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５），ｂｕｔ ｇｒｅａｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ＤＤＰ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０１）；Ｔｈｅ ａｃｔｉｉｖｔｉｅｓ ｏｆ ＮＫ，Ｉ ａｎｄ ＣＴＬ，ａｎｄ ｓｅＦｕｌｎ ｒＩＴ ｌｅｖｅｌ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎ ｓａｌｉｎｅ ｇｒｏｕｐ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｏｌｒｓ（Ｐ＜０．０５）；ｈｅ ａｃｔＴｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＮＫ，ＬＡＫ ａｎｄ ＣＴＬ，ａｎｄ ｓｅｒｕｉｎ ｒＩＮＦ ｌｅｖｅｌ ｆ ｏＤＤＰ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｓａｌｉｎｅ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５），ｗｈｉｃｈ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎ ｌｏｗ—ｄｏｓｅ Ｒｇ３ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ Ｒｇ３ ｇｒｏｕｐ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｓａｌｉｎｅ ｇｒｏｕｐ，ＤＤＰ ｇｒｏｕｐ（尸＜０．０５），ｂｕｔ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｏｒｌｓ （Ｐ＜０．０５）；Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＮＫ，ＬＡＫ ａｎｄ ＣＴＬ，ａｎｄ￣ｅｌａｌｍ ＴＮＦ ｌｅｖｅｌ ｂｅｔｗｅｅｎ ｌｏｗ—ｄｏｓｅ Ｐ￣３ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ Ｒｇ３ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ ｃａｎ ｉｍｐｒｏｖｅ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ａｎｔｉ．ｔｕｌｎｏｒ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ｔｕｍｏｒ—ｂｅａｒｉｎｇ ｍｉｃｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ；Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３；Ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ；Ｍｉｃｅ 肺癌的发生发展是多基因参与的、多阶段的复杂 过程，是细胞中多种基因表达改变累积的结果，在此 １材料与方法 １．１ 主要仪器及试剂 超净工作台（ＡＩＲＴＥＣＨ ＳＷ－ＣＪ一１ ＦＤ，苏州净化设备厂生产），倒置相差显微镜 （ＫＸ４１型，美国奥林巴斯公司生产），ＣＯ 细胞培养 箱（日本ＡＳＴＥＣ公司生产，ＴＥ—ＪＥＲ型），水平离心机 （Ａｎｋｅｔａｄ－４０ｂ，北京医用离心机厂生产），全自动酶标 仪（ＭＲ－３００型，美国雷杜公司生产）。ＲＰＭＩ１６４０培 养基（美国ＧＩＢＣＯ公司生产），胎牛血清（美国 ＨｙＣｌｏｎｅ公司生产）。人参皂甙Ｒｇ３粉剂由吉林亚泰 过程中既有原癌基因的激活，抑癌基因的失活，也有 细胞周期的和凋亡基因的改变以及细胞内调节 环节的紊乱…。人参皂甙Ｒｇ３是从人参根的浸出液 中分离得到的一种有效抗肿瘤成分，有研究表明人参 皂甙Ｒｇ３具有抑制肿瘤细胞增殖和转移的作用 ］。 本研究通过人参皂甙Ｓｇ３对Ｌｅｗｉｓ肺癌模型小鼠免 疫功能影响，以探讨人参皂甙Ｒｇ３抗癌机制。 ▲基金项目：广西自然科学基金项目（２０１０ＧＸＮＳＦＡ０１３２１３）；广西青年基金项目（２０１１ＧＸＮＳＦＢ０１８１０４）；广西中医药大学重点课 题（２Ｄ２００９００３） ｌ４ 制药有限公司提供，系我国东北红参提取物，纯度为 ９９．５％，生产批号：２００９０３２２４５Ｇ。顺铂（ＤＤＰ）冻干 粉针１０ ｍｇ／支，由山东齐鲁制药有限公司生产，批 号：７０５０１７２ＤＣ。纯系Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，雌雄各半，体重 １８～２２ ｇ，购于广西中医药大学实验动物部（合格证 号：ＳＣＸＫ一桂２００８￣００６）。高转移Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞由 广西中医药大学免疫学实验室惠赠，培养于含１０％ 新生牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养液中。采用免疫组织 化学ｓＰ法检测生存素蛋白的表达。兔抗小鼠多克隆 抗体生存素试剂盒（批号：２００９０７２３３２）及ｓＰ试剂盒 （批号：２００８１２３００８）购自北京博奥森生物技术有限 公司，一抗工作液浓度为１：２００，用磷酸盐缓冲液 （ｐｈｏｓｐｈａｔｉｃ ｂａｌａｎｃｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ＰＢＳ）代替一抗作为阴性 对照。乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）４ ｈ释放法杀伤活性测定 试剂盒（Ｐｒｏｍｅｇａ公司，批号：Ａ８７２７７２Ａ）。 １．２荷瘤小鼠的建立 于６周龄Ｃ５７ＢＬ／６小鼠右 侧腋窝皮下接种Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞０．１ ｍｌ（含５×１０ 个 Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞），１２ ｄ左右肿瘤直径达０．５ ｃｍ大小 时即成荷瘤小鼠。 １．３观察人参皂甙Ｒｇ３对荷瘤小鼠的保护作用 将 ４８只Ｃ５７ＢＩＭ６荷瘤小鼠按随机数字表法分为４组， 人参皂甙Ｒｇ３高剂量组，人参皂甙Ｒｇ３低剂量组， ＤＤＰ组和生理盐水组，每组１２只。接种Ｌｅｗｉｓ肺癌 细胞后第二天开始灌胃，连续灌胃给药１０ ｄ，Ｒｇ３高 剂量治疗组每天１次灌注０．４ ｍｌ Ｒｇ３高浓度稀释液 （相当于Ｒｇ３ １５ ｍｇ／ｋｇ），Ｒｇ３低剂量治疗组每天１次 灌注０．４ ｍｌ Ｒｇ３低浓度稀释液（相当于Ｒｇ ３ ５ ｍｇ／ｋｇ）， ＤＤＰ组每天１次灌注０．４ ｍｌ顺铂稀释液（相当于顺 铂０．５ ｍｇ／ｋｇ），生理盐水组每天１次灌注０．４ ｍｌ生 理盐水。连续喂养３周。另外以１２只正常小鼠每天 １次灌注０．４ ｍｌ生理盐水作为对照组。 １．４ Ｌｅｗｉｓ肺癌Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾淋巴细胞免疫功能测定 测定各组小鼠脾自然杀伤细胞（ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ，ＮＫ ｃｅｌ１）、淋巴因子激活的杀伤细胞（１ｙｒｎｐｈｏｋｉｎｅ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｉｋｌｅｒ ｃｅｌｌ，ＬＡＫ ｃｅｌ１）、细胞毒性Ｔ细胞（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ．１ｙｍｐｈｏｃｙｔｅ，ＣＴＬ）活性，血清血清肿瘤坏死因子 （ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ，ＴＮＦ）活性，抑瘤率及瘤体生存 素表达情况。 １．４．１各组Ｌｅｗｉｓ肺癌Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾ＮＫ、ＬＡＫ、 ＣＴＬ活性检测：连续喂养３周后无菌取出Ｃ５７ＢＬ／６ 小鼠脾脏，体外制成脾淋巴细胞悬液，培养液中加入 ５０ Ｕ／ｍｌ ｒｈｌＬ－２进行培养。参照文献［３］采用ＬＤＨ ４ ｈ释放法进行测定（按试剂盒说明书操作）。 １．４．２各组Ｌｅｗｉｓ肺癌Ｃ５７ＢＬ／６小鼠血清ＴＮＦ活性检 测：上述各组小鼠在连续喂养３周后处死，在处死前先 以拔眼球法分别提取各小鼠的全血２ ｍｌ，室温放置４ ｈ， 离心２ ０００ ｒ／ｍｉｎ，２５ ｍｉｎ后分离出血清。以血清作为待 测样品，置于一２０℃冰箱中贮存备用。参照文献［４］采 用ＬＤＨ ４ ｈ释放法进行测定（按试剂盒说明书操作）。 １．４．３各组Ｌｅｗｉｓ肺癌Ｃ５７ＢＬ／６荷瘤小鼠抑瘤率及 ｘｉ Ｍｅｄｉｃａｆ Ｊｏｕｒｎａｆ，Ｊａｎ．２０１３．ＶｏＺ．３５．Ｎｏ．１ 瘤体生存素表达情况：上述各组荷瘤小鼠在连续喂养 ３周后分别称重，然后处死小鼠，无菌取出胸腺、脾 脏、瘤体并分别称重，计算抑瘤率、胸腺系数、脾系数。 抑瘤率 量舌 嚣毒 矗章葛著 蕞量 一ｘ １００％ 各组Ｌｅｗｉｓ肺癌Ｃ５７ＢＬ／６荷瘤小鼠抑瘤率的计 算参照文献［５］进行。胸腺系数＝（胸腺质量／小鼠 质量）×１００％。脾系数＝（脾质量／小鼠质量）×１１１）％。 将所取瘤体组织的石蜡切片采用免疫组织化学ｓＰ法 进行染色。生存素结果判定标准参照Ｂａｍｅｓ等 提出 的基于３个参数的半定量计数方法判定。染色强度： 无色记０分，淡黄色记１分，棕黄色记２分，棕褐色记３ 分；阳性细胞百分比：阴性记０分，阳性细胞≤１０％记１ 分，１１％～５０％记２分，５１％一７５％记３分，＞７５％记４ 分；以染色强度与阳性细胞百分比的乘积作为判断生 存素阳性表达标准：＜３分为（一），３～４分为（＋）， ５～６分为（＋＋），＞６分为（＋＋＋），（＋）～（＋＋＋） 均视为生存素阳性表达。 １．５统计学分析采用ＳＰＳＳ １３．０软件进行统计分析， 计量资料以 ±ｓ表示，多组均数的比较采用方差分析； 等级资料比较采用秩和检验；计数资料的比较采用ｘ 检验，两两比较采用Ｎｅｍｅｎｙｉ法。以Ｐ＜０．０５为差异有 统计学意义。 ２ 结果 ２．１ 人参皂甙Ｒ 对荷瘤小鼠的保护作用 人参皂 甙Ｒｇ３低剂量组和Ｒｇ３高剂量组可抑制Ｌｅｗｉｓ肺癌 的生长，抑瘤率分别为２０．４％和２０．７％，均低于ＤＤＰ 组的８９．４％。４组瘤体质量、胸腺系数、脾系数比较， 差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。Ｒｇ３低剂量组、 Ｒｇ３高剂量组瘤体质量小于生理盐水组（Ｐ＜０．０５）， 但大于ＤＤＰ组（Ｐ＜０．０１）。Ｒｇ３低剂量组、Ｒｇ３高剂 量组胸腺系数、脾系数分别与生理盐水组比较，差异均 无统计学意义（Ｐ＞０．０５），提示人参皂甙Ｒｇ３对Ｌｅｗｉｓ 肺癌有一定的抑制作用，同时可防止胸腺和脾萎缩。 ＤＤＰ组胸腺系数、脾系数均低于生理盐水组（Ｐ＜０．５０）， 提示ＤＤＰ组胸腺和脾萎缩明显。见表１。 表１人参皂甙Ｒｇ３对Ｌｅｗｉｓ肺癌 Ｃ５７ＢＩＭ６荷瘤小鼠的抑瘤作用（ ± ） 注：（１）与生理盐水组比较： Ｐ＜０．０５，ＡＰ＜０．０１，▲Ｐ＞０．０５， ＯＰ＞０．０５；（２） 与 比较，▲与▲比较，●与●比较，Ｐ＞０．０５。 ２．２各组生存素的表达情况各组生存素的表达情况 比较，差异有统计学意义（ｘ ＝７．８６３，Ｐ＝０．０４５）。各组 生存素的阳性率比较，差异有统计学意义（ｘ ＝１６．３７０， Ｐ＝Ｏ．００１）。ＤＤＰ组、ｅ￣３低剂量组、ａｇ３高剂量组生存 广西医学 ２０１３年１月第３５卷箍 素阳性率均低于生理盐水组（Ｐ＜０．０５），但ＤＤＰ组、 Ｒｇ３低剂量组和Ｒ 高剂量组荷瘤小鼠瘤体生存素 阳性率比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。见表２。 表２各组荷瘤小鼠瘤体生存素的表达情况（ｎ） 塑 ＝ ± ±± ±±± 空！ ！ 生理盐水组 １２ １ ３ ４ ４ １１（９１．７） ＤＤＰ组 １２ ６ ４ １ １ ６（５０．０） Ｒｇ３低剂量组１２ ５ ３ ３ １ ７（５８．３） 壹型量塑 （ ： ２ ２．３各组小鼠ＮＫ、ＬＡＫ、ＣＴＬ和ＴＮＦ活性比较各组 ＮＫ、 、ＣＴＬ和ＴＮＦ活性比较，差异有统计学意义 （Ｐ＜Ｏ．０５）。生理盐水组ＮＫ、ＬＡＫ、ＣＴＬ活性和血清 ＴＮＦ水平均较正常小鼠低（Ｐ＜０．０５），ＤＤＰ组ＮＫ、ＬＡＫ、 ＣＴＬ活性和血清ＴＮＦ水平均较生理盐水组荷瘤小鼠明 显降低（Ｐ＜Ｏ．５０）。Ｒｇ３低剂量组和Ｒｇ３高剂量组ＮＫ、 ＬＡＫ、ＣＴＬ涪陛和血清ＴＮＦ水平均较生理盐水组、ＤＤＰ 组高（Ｐ＜０．０５），但仍低于正常小鼠的水平（Ｐ＜０．０５）， 提示ａｇ３可明显改善荷瘤小鼠的免疫功能状态。Ｕｇ３ 低剂量组ＮＫ、ＬＡＫ、ＣＴＬ、活ＪＩ生和血清ＴＮＦ水平与ＲＳ３高 剂量组比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。见表３。 表３各组小鼠ＮＫ、Ｌ 、ＣＴＬ和ＴＮＦ活性变化（ ±ｓ） 组别 Ⅱ ＮＫ（％）ＬＡＫ（％） ＣＴＬ（％）ＴＮＦ（Ｕ／ｍ１） 生理盐水组 １２ １３．５０±０．９７ １４．３０±１．９ｏ １３．９０±１．７０ １８．３８±１．４２ ＤＤＰ组 １２ ９．７９±２．３０ ８．７３±１．３５ １１．９７士１．４３ １５．６６±１．４２ ｒｉｇ３低剂量组ｌ２ １９．３５±１．５５ ２１．８０±１．３５ ２９．４０±１．２０ ３０．１７±１．３３ Ｒｇ３高剂量组ｌ２ １９．０７ ４－１．３２ ２０．２０ －４１．４０ ２８．５０ －４１．００ ２９．３８±１．１５ 正常小鼠 ｌ２ ２７．０７±１．３２ ２９．６０±０．６５ ３２．５０ ４－１．２３ ３６．３４±１．４７ Ｆ值 ５３．８４１ ４８．５３６ ４７．２８７ ４３．６３７ 笪 ： ： ： ： ３讨论 调节肿瘤癌基因与抑癌基因的表达是许多抗癌 中药的作用机理之一。人参是我国传统的名贵药材， 早在十九世纪六十年代人们就已经认识到人参对某 些恶性肿瘤具有一定的抑制作用，随后大量的研究证 明，人参抗肿瘤作用的活性成分是人参皂甙 Ｒｇ３ Ｊ。有学者研究发现人参皂甙Ｒｇ３具有抗肿 瘤新生血管形成的作用，能使肿瘤血管明显减少，并 且具有抗肿瘤浸润、转移的作用 。。。 生存素在胚胎时期广泛分布于不同组织，在人类 分化成熟的组织中一般不表达或低表达。生存素表 达则凋亡过程受阻导致细胞异常增殖，细胞凋亡受 抑、细胞死亡不足是肺癌发病的重要途径。细胞凋亡 受抑导致病变组织内肿瘤细胞存活时问延长，破坏细 胞群体内存活与死亡的平衡，存活细胞数大于死亡细 胞数，则肿瘤细胞数量净增多ｌ】 。本文结果显示， Ｒｇ３低剂量组、Ｒｇ３高剂量组生存素阳性表达率明显 降低，肿瘤稍缩小，肿瘤大小与其他各组相比差异均 有统计学意义（Ｐ＜０．０５），这表明人参皂甙Ｒｇ３过继 免疫后不仅有助于小鼠机体免疫功能的恢复，同时激 活机体免疫系统对肿瘤产生特异性的抗瘤作用。 ＮＫ、ＬＡＫ和ＣＴＬ细胞和ＴＮＦ都具有一定非特异性 杀伤肿瘤细胞的作用，是人体抗肿瘤的重要防线，对抑 １５ 制肿瘤的生长、发展、转移都具有重要意义 。本文结 果显示，生理盐水组ＮＫ、ＬＡＫ和ＣＴＬ活性及血清ＴＮＦ 水平均较正常对照组显著下降（Ｐ＜０．０５），提示小鼠在 肿瘤发展过程中存在免疫抑制。ＤＤＦ组ＮＫ、 和 ＣＴＬ活性及血清ＴＮＦ水平较生理盐水组低（Ｐ＜０．０５）， 表明化疗药物可抑制小鼠免疫功能；Ｒｇ３低剂量组和 Ｒ 高剂量组ＮＫ、ＬＡＫ和ＣＴＬ活性及血清ＴＮＦ水平 较生理盐水组、ＤＤＰ组明显提高（Ｐ＜０．０５），但仍低 于正常小鼠组（Ｐ＜０．０５），这说明人参皂甙Ｒｇ３可以 有效增强免疫功能受损小鼠的细胞免疫功能。Ｒ 低剂量组的免疫功能与Ｒｇ３高剂量组比较，差异无 统计学意义（Ｐ＞０．０５），其原因可能与人参皂甙Ｒｇ３ 对免疫功能的恢复到达一定程度后即使再增加人参 皂甙Ｒｇ３剂量亦不能再进一步提高免疫功能有关， 这需要进一步研究验证。 综上所述，人参皂甙Ｒｇ３可以增强荷瘤小鼠的 免疫功能，研究开发人参皂甙Ｒｇ３免疫增强剂具有 实际意义和广阔的应用前景。 参考文献 ［１］Ｄｈｉｌｌｏｎ ＳＳ，Ｄｈｉｌｌｏｎ ＪＫ，Ｙｅｎｄａｍｕｒｉ Ｓ．Ｍｅｄｉａｓｔｉｎａｌ ｓｔａｇｉｎｇ ｏｆ ｎｏｎ—ｓｍａｌ１．ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ＪＪ １．Ｅｘｐｅ￣Ｒｅｖ Ｒｅｓｐｉｒ Ｍｅｄ， ２０１ｌ，５（６）：８３５—８５０． ［２］Ｍｏｃｈｉｚｕｋｉ Ｍ，Ｙｏｏ ＹＣ，Ｍａｔｓｕｚａｗａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｍｉｃｅ ｂｙ ｓａｐｏｎｉｎｓ，ｉｇｎｓｅｎｏｓｉｄｅ—Ｒｂ２， ２０（Ｒ）一ａｎｄ 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