醛糖还原酶抑制剂对实验性糖尿病大鼠周围神经病变的影响

山东医药２００８年第４８鲞　醛糖还原酶抑制剂对实验性糖尿病大鼠　周围神经病变的影响　郑冬梅　，陈青　，郭军　。陈丽　（１山东大学附属山东省立医院，山东济南２５００２１；２山东大学齐鲁医院）　［摘要］从６０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠中随机取４５只用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型，共成模３５只，随机分为糖尿　病对照组（ＤＣ组）１８只和糖尿病水飞蓟素治疗组（町组）１７只，余１５只作为正常对照组（Ｎｃ）。实验结束前测定　大鼠运动神经传导速度、红细胞山梨醇含量及血小板聚集率，并进行坐骨神经形态学检查。结果有醛糖还原酶抑　制活性的中药提取物水飞蓟素明显降低了ＤＴ组大鼠红细胞山梨醇含量，部分显著改善了运动或感觉神经传导速　度和血小板聚集率，并改善了神经结构异常。认为水飞蓟素对糖尿病神经病变有防治作用。　［关键词］　醛糖还原酶抑制剂；水飞蓟素；糖尿病神经病变；血小板聚集；大鼠　［中图分类号］　１１５８７．１　［文献标识码］　Ｂ　［文章编号］　１００２－２６６Ｘ（２００８）０７－００３７－０３　醛糖还原酶抑制剂（ＡＲＩｓ）可以有效纠正糖尿病　灌胃。所有大鼠饲养３个月，实验期间每４周复查　多元醇代谢紊乱，提高Ｎａ　一Ｋ　一ＡＴＰ酶活性，并改善　体质量及血糖。满３个月实验结束前测定大鼠运动　神经组织的部分结构和功能异常。新近研究发现，　神经传导速度（ＭＮＣＶ）和感觉神经传导速度　ＡＲＩｓ尚能提高坐骨神经血液供应，减少氧化应激，降　（ＳＮＣＶ），然后处死大鼠，取血测定红细胞山梨醇含　低血小板聚集。有研究发现，部分中药有抑制醛糖　量及血小板聚集率，并行坐骨神经形态学检查。　还原酶的作用，黄芩甙在糖尿病并发症中的作用已　１．３统计学处理数据以ｘ±ｓ表示，组问比较用单　得到初步证实　Ｊ。水飞蓟素是从中药水飞蓟中提取　因素方差分析及Ｐｏｓｔ　Ｈｏｅ　Ｓｃｈｅｆｆｅ检验（采用ＳＰＳＳ　的有效成分，经体内外研究发现有较强的醛糖还原　１１．Ｏ统计分析软件）。Ｐ≤Ｏ．０５为有统计学差异。　酶抑制作用，但有关其对糖尿病神经病变的研究尚　２结果　未见报道。本研究拟通过观察水飞蓟素对糖尿病大　２．１　三组大鼠实验前后体质量、血糖变化实验前　鼠红细胞山梨醇含量、坐骨神经形态和功能异常及　三组大鼠体质量无显著差异（Ｐ＞０．０５）。实验后　血小板聚集的影响，探讨代谢和缺血缺氧等因素在　ＤＣ、ＤＴ组体质量明显低于ＮＣ组（Ｐ＜０．０１），ＤＣ、ＤＴ　糖尿病神经病变发病机制中的作用及关系。　组问体质量无显著差异（Ｐ＞０．０５）。ＤＣ、ＤＴ组大鼠　１材料与方法　血糖显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），ＤＣ、ＤＴ组问　１．１　材料实验大鼠由山东大学医学院实验动物　血糖无显著差异（Ｐ＞０．０５）。　中心提供，链脲佐菌素、山梨醇脱氢酶购自美国Ｓｉｇ—　２．２三组大鼠红细胞山梨醇含量、血小板聚集率变　ｍａ公司，其余为国产分析纯。水飞蓟素（ＡＲＩｓ，每片　化ＤＣ组红细胞山梨醇含量较ＮＣ组、ＤＴ组显著升　３８．５　ｍｇ）由上海朝辉制药厂提供。　高（Ｐ＜０．０１），ＤＴ组与ＮＣ组相比无显著差异（Ｐ＞　１．２方法周龄为７周的雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠６Ｏ只，　０．０５）。ＤＣ组血小板聚集率较ＮＣ组、ＤＴ组明显升　体质量１９０—２５０　ｇ，随机取４５只，隔夜禁食后经左　高（Ｐ＜０．０１），ＤＴ组与ＤＣ组相比有下降（Ｐ＜　下腹腔单次注射链脲佐菌素６０　ｍｇ／ｋｇ；７２　ｈ后尾静　０．０５），但仍高于ＮＣ组（Ｐ＜０．０５）。见表１。　脉取血测非空腹血糖超过１６．７　ｍｍｏｌ／Ｌ者纳入实　表１　三组红细胞山梨醇含量、血小板聚集率｝匕较（ｉ－４－Ｓ）　验，共成模３５只。将成模鼠随机分为糖尿病对照组　（ＤＣ组）１８只和糖尿病水飞蓟素治疗组（ＤＴ组）１７　只，余１５只仅注射等体积的缓冲液作为正常对照组　（ＮＣ组）。ＤＴ组于糖尿病成模１周后给予水飞蓟素　注：与ＮＣ组、ＤＴ组比较，‘Ｐ＜０．０１；与ＤＣ、ＮＣ组组比较　１００　ｍｇ／ｋｇ灌胃，１次／ｄ，其余２组给予等量蒸馏水　Ｐ＜０．０５　３７　维普资讯 http://www.cqvip.com

医药２００８年第４８卷第７期　２．３神经传导速度０．０５）。见表２。　表２三组神经传导速度比较（ｍ／ｓ，　±　）　ＤＴ组大鼠ＭＮＣＶ、ＳＮＣＶ较　ＮＣ组明显减慢（Ｐ＜０．０１），ＭＮＣＶ较ＤＣ组快（Ｐ＜　等用水飞蓟素治疗糖尿病大鼠２周，尽管红细胞内　山梨醇含量接近正常，但坐骨神经内山梨醇的含量　仍较对照组高ｌ０倍，而在Ｇｒｅｅｎｅ等　的研究中，　ＡＲＩｓ改善了糖尿病神经病变患者的ＭＮＣＶ，减少了　小直径有髓纤维的丢失，但需要将神经组织中的山　梨醇含量降低８０％以上。由此推测，本研究中坐骨　神经山梨醇含量可能也未降至正常。这样本研究中　水飞蓟素对糖尿病大鼠神经代谢和功能的影响程度　可能具有一致性，进一步证实了其抑制醛糖还原酶　注：与ＮＣ组比较，　Ｐ＜０．０１；与ＤＣ组比较，　Ｐ＜０．０５　２．４相关性分析直线相关分析结果显示红细胞　山梨醇含量与同时期血糖水平呈正相关（ｒ＝０．５８３，　Ｐ＜０．０１），与坐骨神经ＭＮＣＶ呈负相关（ｒ＝一　０．８２１，Ｐ＜０．０１）。　２．５光镜、电镜下大鼠坐骨神经形态学变化光镜　观察，大鼠坐骨神经横截面半薄切片甲苯胺兰染色　显示，ＤＣ组呈现有髓纤维数目减少，轴突变性深染，　髓鞘崩解，不规则内折，部分纤维出现神经内膜下水　肿。ＤＴ组大鼠有相似改变，但程度明显减轻，ＮＣ组　无明显改变。电镜观察，ＤＣ大鼠坐骨神经超微结构　呈现有髓纤维髓鞘板层状分离，变性融合，雪旺氏细　胞线粒体肿胀，部分嵴消失，轴突内神经丝排列紊　乱，无髓纤维未见明显变化。ＤＴ组病变明显减轻，　ＮＣ组有轻度异常，可能由实验伪差造成。　３讨论　糖尿病时，多元醇旁路激活，造成山梨醇在细胞　内堆积，肌醇减少，Ｎａ　－Ｋ　－ＡＴＰ酶活性降低，神经　细胞跨膜静息电位降低，轴突内Ｎａ　积聚和Ｎａ　通　道失活，使有髓神经纤维选择性的发生传导阻滞，神　经传导速度减慢，随着病情逐渐发展，轴突一胶质　细胞分离，形态学出现特征性的结旁脱髓鞘、节段性　脱髓鞘和轴突萎缩变性等改变，神经传导速度进一　步下降。研究显示，使用ＡＲＩｓ可以有效地改善神经　结构和功能上异常　】。水飞蓟素是从植物水飞蓟中　提取的有效成分，经体内外研究发现有较强的醛糖　还原酶抑制作用。　红细胞山梨醇含量不仅与同一时间的血糖水平　有显著正相关，而且也同坐骨神经等组织中的山梨　醇水平呈正相关，且测定方法简便。因此本研究中　将红细胞内山梨醇含量作为评价水飞蓟素疗效的指　标。水飞蓟素降低了红细胞内山梨醇含量，而未影　响大鼠的体质量和血糖，说明其作用是抑制了醛糖　还原酶。ｌ２周末血糖与红细胞山梨醇水平呈正相　关，山梨醇水平还与ＭＮＣＶ呈负相关，与以前报道一　致。本研究仅部分改善了坐骨神经ＭＮＣＶ，毛晓明　３８　的作用。　糖尿病患者和实验动物中存在血小板聚集率增　加，神经内膜微血管含闭塞的血小板血栓是糖尿病　神经病变的病理特征之一ｌ－４＇５】。Ｈａｒａ等的研究中，　ＡＲＩｓ明显改善了糖尿病大鼠ＡＤＰ诱导的血小板聚　集率的增高，并与其改善血小板内山梨醇和果糖积　聚、肌醇耗竭的效应一致，这些发现提示多元醇旁路　活性增加在血小板聚集方面起重要作用，ＡＲＩｓ还同　时改善了减慢的ＭＮＣＶ和减少的坐骨神经血流。本　研究中糖尿病大鼠ＡＤＰ诱导的血小板聚集率较正　常对照组显著增加，给予水飞蓟素治疗后能部分降　低糖尿病大鼠的血小板聚集率，但与正常对照组仍　有显著差异。　以往研究证实ＡＲＩｓ可以有效地改善神经组织　结构异常，并且形态计量学分析显示，坐骨神经传导　速度的改善与其结构的改善相关。本研究中，水飞　蓟素减轻了糖尿病大鼠坐骨神经的结构异常，与以　前研究一致。如能进行定量分析，则可以从形态学　方面进一步阐述水飞蓟素对醛糖还原酶的抑制作　用。　综上所述，多元醇旁路在改变血小板的聚集性　方面起重要作用，糖尿病神经病变发病机制中的代　谢和血管因素通过多元醇旁路密切联系起来，ＡＲＩｓ　可以通过纠正神经组织内山梨醇积聚和改善血液流　变学，减轻神经内膜缺血而对神经病变起防治作用。　本研究还为验证中药在糖尿病并发症治疗中的作用　提供了理论依据。　［参考文献】　［１］董砚虎，逢力男，王秀军，等．黄芩甙治疗糖尿病肾病疗效观察　［Ｊ］．山东医药，１９９８，３８（１２）：７—８．　［２］ＳｉｍａＡＡ，ＰｒａｓｈａｒＡ，ＮａｔｈａｎｉｅｌＶ，ｅｔ　ａ１．Ｏｖｅｒｔ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ：　ｒｅｐａｉｒ　ｏｆ　ｏｇｌｉａｌ　ｄｙｓｊｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｘｏｎａｌ　ａｔｒｏｐｈｙ　ｂｙ　ａｌｄｏｓｅ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｏｒｒｅ／ａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　ｉｎ　ｎｅｒｖｅ　ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｉｒｅ—　ｌｏｃｉ￣［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔ　Ｍｅｄ，１９９３，１０（２）：１１５—１２１．　［３］Ｇｒｅｅｎｅ　ＤＡ，Ａｒｅｚｚ０　ＪＣ，Ｂｒｏｗｎ　ＭＢ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ａｌｄｏｓｅ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｎ　ｎｅｒｖｅ　ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｙ　ｉｎ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｎｅｕｒｏｐａ—　维普资讯 http://www.cqvip.com 山东医药２００８年第４８卷箍　ｔｈｙ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１９９９，５３（３）：５８０－５９１．　ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２００４，ｌ８（６）：３３６－３４２．　［４］Ａｓａｎｏ　Ｔ，Ｓａｉｔｏ　Ｙ，Ｋａｗａｋａｍｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｉｃ　ｓｏｒｂｉｔｏｌ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　［５］Ｋｕｚｕｍｏｔｏ　Ｙ，Ｋｕｓｕｎｏｋｉ　Ｓ，Ｋａｔｏ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｔｈｅ　ｌａｄｏｓｅ　ｒｅｄｕｃ　ｉｎ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅ　ｗｉｔｈ　ｂｌｏｏｄ　ｊｌｌｄｏｓｅ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎ　ｔａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｉｆｄａｒｅｓｔａｔ　ｏｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌａ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ　ｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｐｌａｓｍａ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｌｅｖｅｌｓ，ａｎｄ　ａｌｅ　ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｐｏｔｅｎｔ　ａｌ—　［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，２００６，４９（１２）：３０８５－３０９３．　ｄｏｓｅ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｉｆｄａｒｅｓｔａｔ（ＳＮＫ－８６０）［Ｊ］．Ｊ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ｃｏｍ—　（收稿日期：２００７—１１－１７）　・经验交流・　小剂量药物腰麻在经尿道前列腺电气化手术中的应用　俞蓉莉　（兖州矿业集团中心医院，山东邹城２７３５００）　前列腺增生经尿道前列腺电气化术（ＴＶＰ）患者均为老　在３－４分；ＢＦ组Ｂ２　６例，Ｂ３　１７例，Ｂ４　５例，评分集中在２～３　年男性，选择连续硬膜外麻醉，麻醉用药量大，患者术中血液　分；两组Ｂｒｏｍａｇｅ运动阻滞评分比较差异有统计学意义（Ｐ＜　动力学波动大，术后下肢运动恢复时间显著延长。本研究采　０．０５）。两组患者术中麻醉镇痛完善，尿道膀胱松弛，无需麻　用小剂量药物腰麻取得了良好效果。现报告如下。　醉辅助药。　临床资料：选择２００７年１月～２００７年７月收治前列腺　表１　两组血液动力学变化（ｉ　４－￥）　Ⅱ～Ⅲ度增生行前列腺切除患者５６例，ＡＳＡⅡ～Ⅲ级，年龄　６２～７８（７１．１　４－８．５）岁。既往原发高血压８例（其中含２型　糖尿病３例），心室肥大合并冠状动脉供血不足７例，慢支合　并肺气肿３例，单纯糖尿病２例。５６例随机分为硬膜外麻醉　组（ｓＢ组）２８例和小剂量药物腰麻组（ＢＦ组）２８例。　方法：术前做肝、肾、心功能、凝血酶原时间和血常规检　注：与麻醉前比较，‘Ｐ＜０．０５；与ＢＦ组麻醉后比较，　Ｐ＜０．０５　查。如有糖尿病、呼吸系统疾病和心血管系统疾病等其他基　讨论：前列腺增生的患者均为老年男性，麻醉前用药应　础疾病，手术前要进行积极的药物治疗和手术前的充分准　为成人１／２～１／３量，麻醉前免用大量吗啡类药物，防止呼吸　备，以提高患者手术期的安全性。～术前３０　ｒａｉｎ肌注苯巴比妥　循环抑制；冠心病患者慎用阿托品以免导致心功能失常，加　钠０．１　ｇ。ＳＢ组行Ｌ３　椎间隙穿刺导管向头侧置入２～３　ｃｍ，　重心肌缺血。老年人心、脑、肺、肾各系统器官均呈退行性　平卧后由导管注入１％利多卡因和０．２５％布卡比因４　ｍｌ，观　变，多合并高血压、糖尿病、心脏疾患等，心肺功能均有一定　察麻醉平面，酌情追加利布合剂６～１０　ｍｌ，直至获得满意的　程度的降低。退变的植物神经系统对麻醉药物敏感性极高，　麻醉效果。ＢＦ组选　一　椎间隙行单次腰麻穿刺成功后，注　任何使儿茶酚胺浓度降低及交感神经阻滞的因素均可导致　入０．５％布卡比因１　ｍｌ加注射用水４　ｍｌ的低密度液。连续　严重低血压发生。老年人椎间孔闭缩，局麻药向椎旁间隙扩　无创监测心率（ＨＲ）、ＳＢＰ、平均动脉压（ＭＡＰ）、ＥＣＧ和ＳｐＯ，，　散减少，并且由于脊髓及周边神经退行性变，脑脊液分泌减　鼻导管给予吸氧使ＳｐＯ：达到９８％以上。给药后血压显著降　少，压力降低及容量减少，行硬膜外麻醉易使阻滞平面增宽，　低者（低于基础血压８０％），给予盐酸麻黄碱５～１０　ｍｇ静滴。　而老年人循环系统的代偿调节能力较差，从而增加血液动力　待麻醉平面固定后用乙醇擦拭法测定其感觉阻滞平面。ｓＢ　学的不稳定。小剂量低密度腰麻较硬膜外麻醉有以下优点：　组平面５例在麻醉Ｔ６圳，ＢＦ组除一例平面Ｔ　。以上，其余２７　操作简单，镇痛确切、完善；术中易于维持稳定的血液动力　例均在Ｔ　。以下。手术结束后行改良Ｂｒｏｍａｇｅ运动阻滞评分，　学；患者恢复快；阻滞范围局限，对肌体影响小。本研究表　足和膝关节运动自如为１分（Ｂ．），足易动而膝关节运动困难　明，单用硬膜外麻醉，其阻滞平面较高，血压下降明显，有６　为２分（Ｂ：），足能动而膝关节运动障碍为３分（Ｂ　），足和膝　例需用麻黄素处理。而小剂量低密度腰麻由于药量少、浓度　关节都不能运动为４分（Ｂ　）。计量资料数据以ｘ４－ｓ表示，行　低，ＴＪ。平面以下的阻滞对循环影响较轻，用药后ＭＡＰ下降幅　ｔ检验；计数资料行　检验。Ｐ≤ｏ．０５为有统计学差异。　度较小。两组患者ＨＲ变化无显著性差异。Ｂｒｏｍａｇｅ运动阻　结果：硬膜外给药后，ｓＢ组ＭＡＰ下降明显，有６例需用　滞评分显示小剂量轻比重腰麻对运动神经阻滞作用相对较　麻黄碱升压。ＢＦ组ＭＡＰ下降不明显，仅１例用麻黄碱处理。　弱，且运动恢复也更快。　两组患者ＨＲ变化无显著性差异，见表１。手术结束后ｓＢ组　（收稿日期：２００７．１１．１２）　Ｂｒｏｍａｇｅ运动阻滞评分Ｂ２　１例，Ｂ３　１５例，Ｂ　１２例，评分集中　３９