实验五大黄中游离蒽醌的提取

实验五 ⼤黄中游离蒽醌的提取、分离与检识

⼤黄为寥科植物掌叶⼤黄（Rheum Palmatum L.），药⽤⼤黄（R. offIcinale Beill ）和唐古特⼤黄（R.tanguticum Maxim.exBalf ）的根及根茎。是泻下、健胃、清热、解毒的常⽤中药。

⼤黄中含有多种羟基蒽醌类化合物，它们在植物中主要以甙的形式存在，总含量为 2 ~5%，⼤黄中主要的羟基蒽醌类化合物有⼤黄酚(1)、⼤黄素(2)、⼤黄酸(3)、⼤黄素甲醚(4)、芦荟⼤黄素(5)及其甙类。 OH O OH R 2R 1R 1 R 2H CH 3OH CH 3H COOHOCH 3 CH 3H CH 2OH ′⼤黄酚

⼤黄素⼤黄酸⼤黄素甲醚芦荟⼤黄素

⼤黄酚（Chrysophanol ）为⾦黄⾊⽚状结晶（⼄醇或苯），mp.196-197 ℃，能升华，可溶于丙酮、⼄醚、氯仿、甲醇、⼄醇、热苯和氢氧化钠⽔溶液，微溶于⽯油醚、⼄醚，不溶于⽔、碳酸钠和碳酸氢钠⽔溶液 。

⼤黄素（Emodin ）为橙黄⾊针状结晶（⼄醇或冰醋酸），mp.256—257℃，能升华，易溶于稀氨⽔、碳酸钠和氢氧化钠⽔溶液，可溶于⼄醇、丙酮，在⼄醚、氯仿、苯、四氯化碳、⼆硫化碳等溶剂中溶解度较⼩，⼏乎不溶于⽔。

⼤黄酸（Rheine ）为黄⾊针状结晶（升华法），mp.321－322℃，330℃分解，易溶于碱⽔液、吡啶，微溶于⼄醇、丙酮、⼄醚、氯仿、苯、⽯油醚。⼏乎不溶于⽔。

⼤黄素甲醚（Physcion ）砖红⾊针状结晶（苯），mp.203-207 ℃，能升华，溶解性质与⼤黄酚相似。

芦荟⼤黄素（Aioeemodin ）为橙黄⾊针状结晶（甲苯），mp.223-224 ℃，能升华，可溶于⼄醚、热⼄醇、苯、稀氨⽔、碳酸钠和氢氧化钠⽔溶液 。

羟基蒽醌甙有⼤黄素甲醚葡萄糖甙，⼤黄素葡萄甙，⼤黄酸葡萄糖甙, ⼤黄酚葡萄糖甙，⼤黄素-1-O-B-D-葡萄糖甙，芦荟⼤黄素-ω-O-B-D-葡萄糖甙。⼀、实验⽬的

1. 学会PH 梯度萃取法分离酸性成分的原理及操作技术。2. 学会两相酸⽔解法的操作技术。3. 学会柱⾊谱的操作技术。

4. 学会羟基蒽醌类成分的化学检识及薄层层析检识⽅法。⼆、实验原理

本实验利⽤⼤黄中的羟基蒽醌经酸⽔解成游离蒽醌苷元，苷元可溶于三氯甲烷⽽被提出；再利⽤各羟基蒽醌类化合物酸性不同，采⽤PH梯度萃取法结合柱⾊谱法分离⽽得到⼤黄素单体。三、实验内容（⼀）游离蒽醌的提取

取⼤黄粗粉50g, 置于500ml 的园底烧瓶中，加氯仿——20%硫酸（5：1）300ml ，⽔浴加热回流3～4⼩时，纱布过滤，放冷减压抽滤，得到氯仿液。（⼆）PH梯度萃取法分离

1. 将上述氯仿液转移⾄500ml 的分液漏⽃中，加5%碳酸氢钠⽔溶液80ml （先⽤pH 试纸测定其pH 值）分三次萃取（注意萃取时放置分层的时间应稍长些，以免萃取效果不好），合并三次碳酸氢钠萃取液，在搅拌下⼩⼼滴加浓盐酸调⾄pH2～3（观察萃取，酸化时溶液的颜⾊变化），放置沉淀，过滤，沉淀⽤⽔洗⾄近中性，⼲燥，则其主要含⼤黄酸，留作鉴定⽤。2. 将上述经碳酸氢钠萃取过的氯仿液⽤5% 碳酸钠⽔溶液100ml（先⽤pH 试纸测定其pH 值）分三次萃取，合并碳酸钠萃取液，在搅拌下⼩⼼滴加浓盐酸调⾄pH2～3，放置沉淀，过滤，沉淀⽤⽔洗⾄近中性，⼲燥，则其主要含⼤黄素，留作分离

⽤。

3. 将上述经碳酸钠萃取过的氯仿液⽤5% 氢氧化钠⽔溶液100ml（先⽤pH 试纸测定其pH 值）分3次萃取，合并氢氧化钠萃取液，在搅拌下⼩⼼滴加浓盐酸调⾄pH2～3，放置沉淀，过滤，沉淀⽤⽔洗⾄近中性，⼲燥，则其主要含⼤黄酚、芦荟⼤黄素和⼤黄素甲醚，留作鉴定⽤。（三）柱⾊谱精制⼤黄素1. 湿法装柱

取柱层析⽤硅胶10g，加30ml (P E：EtOAc=7：3)混合溶剂搅拌均匀，装⼊合适的⾊谱柱中，并⽤相同的混合溶剂洗脱⾄液⾯不再发⽣变化2. 湿法上样

将上述⼤黄素的粗品溶于少量(P E：EtOAc=7：3)混合溶剂中,⽤滴管滴于⾊谱柱的顶端。3. 洗脱4.TLC检识

将相同的流份合并,回收溶剂,即得纯品⼤黄素。（四）检识

1. 碱液试验：取上述分离所得游离蒽醌类化合物结晶各5mg 置于⼩试管中，加95% ⼄醇1ml 溶解，再加10% 氢氧化钠⽔溶液2~3滴，观察溶液颜⾊变化。凡具有邻、对位酚羟基的蒽醌类化合物应呈紫-蓝⾊，其它羟基蒽醌类化合物多为红⾊。2. 醋酸镁试验：取上述分离所得游离蒽醌类化合物结晶各5mg 置于⼩试管中，加95% ⼄醇1m1 溶解，再满加0.5% 醋酸镁⼄醇液2~3 滴，观察溶液颜⾊变化。凡具有α-羟基的蒽醌类化合物应呈橙红⾊，具有间位⼆羟基的蒽醌昆类化合物应呈橙-红⾊，具有对位⼆羟基的蒽醌类化合物应呈紫-红紫⾊，具有邻位⼆羟基的蒽醌类化合物应呈蓝紫⾊。3. 蒽醌类成分的薄层层检识

吸附剂：硅胶CMC-Na 硬板，于110 ℃烘半⼩时。样品：a. ⾃制⼤黄酸丙酮溶液b. ⼤黄酸标准品丙酮溶液c. ⼤黄素结晶丙酮溶液d. ⼤黄素标准品丙酮溶液e. ⾃制混合物丙酮溶液展开剂：(P E：EtOAc=7：3)

显⾊剂：先在⽇光和紫外光灯（365nm）下检视, 为橙黄⾊荧光斑点，再置于氨⽓中熏后⽇光下检视，斑点变为红⾊。