康迪，消毒专家 总机：ｏ５３ １７ａ０∞、３１６４１４７ｌ￣ｌｉＥ，３￣７８６６１ №：／／ｗｗｗ．ｋｏｎｄｙ．ｃｎＥ－ｍａｉｌ：ｋｏｎｄｙ９７＠１６３ＣＯｌＴ 康迪日用化工有限公司 ４）每天早中晚各摇动一次，并旋转１８０度， ）１２．究０５ 研取（图１）中菌体进行革兰氏染色：菌体呈红 证实该菌种为革兰氏阴性菌。菌体呈杆状到 使之受光均匀。由于样本中所含光合细菌数量 色，运动，结合培养过程中的实验现象得出结 相对低，又要适应新的环境，第一次培养大约需 卵形，该菌是光合细菌。见（图２）。 要５天。随着培养时间的延续，培养液颜色逐渐 论：由黄褐变淡红至褐红，一些菌体附着在玻璃瓶壁 上形成紫红色的膜，培养液粘度逐渐升高，ｐＨ值 由最初的７．０升至８．５，培养液有特殊的发酵臭 味。 ５）将４）中的培养液用１２０目无菌丝网滤除 淤泥，取７０ｍｌ滤液置于ｌＯＯｍｌ无菌具塞三角瓶 中，添加无菌培养基至瓶塞下方０．５～１厘米，以下 步骤同富集培养中的３）、４）步，再次富集培养。 ６）富集培养光合细菌应注意的问题：ａ．生长因 子溶液为限定因子，如果不添加，将导致富集培养 缓慢或失败．ｂ．如果一次富集培养达不到效果，再 富集培养一次。ｃ．横向依次加入（表１）中试剂，每 添加一种试剂，必须待充分溶解后再添加下一个 试剂。用１０％的碳酸氢钠调节培养基ｐＨ值在 ７．０—７．５，放人灭菌锅，１２１％灭菌１５分钟。ｄ．微量 元素在试剂商店不好购齐，我们采用果园中肥沃 的土壤２００克，加水９００ｍｌ，充分搅拌，静置后，取上 清液经滤纸过滤，取５０ｍｌ过滤液加入光合细菌培 养基中（水的数量相应减除），替代微量元素溶液， 效果很好。 ３．１．３菌体纯化 经过三次富集培养，本来淤泥中物竞天择，光 合细菌势强；再加之培养液为光合细菌培养基，选 择性强；接种量大；发酵液经有氧到厌氧；发酵液 ｐＨ值由７．０升至９．０左右等外因干预，菌体得以 纯化，光合细菌占绝对优势。镜检，杂菌率≤ ０．８％。此纯度作为应用菌种已经能够满足，血球 计数板计数：４０．５亿个菌体／ｍｌ发酵液。划线分离 得到纯种，见（图１）。 图１ ３．１．４菌体鉴定 图２ ３．１．５发酵培养 将纯化的ｌＯＯｍｌ三角瓶培养液摇匀，倒入已 灭菌的２５０ｍｌ三角瓶中，添加无菌培养基至瓶塞 下方０．５～１厘米，具塞，培养方法同标题２富集培 养中３）、４）步，培养时间约为３天。至三角瓶内培 养液变成鲜艳的紫红色。这时的培养菌液已能满 足一般规模的水质净化应用，如果培养液数量不 足，按照１：２或１：３的比例扩大培养，重复以上培 养操作获得足量的光合细菌。 ３．２应用对比试验 ３．２．１自然体、光合细菌强化体水质改良对比实验 水６升、金鱼８条、同等体积鱼缸两个。自来 水的ｐＨ值７．０，氨氮（ＮＨ，一Ｎ）浓度为０。左一鱼缸 为光合细菌强化样的鱼缸，每当氨氮上升到 ０．４ｍｇ／Ｌ时，添加０．１ｍｌ／Ｌ光合细菌发酵液；自然体 做空白对照的鱼缸，养殖过程中充氧、喂饲相同， 两缸均不换水。第６１天，“自然体缸”金鱼死亡１ 条，且应激性明显不如强化缸。检测水体指标见 （表２） 表２金鱼死亡时水质指标 项目 ｐＨ值 氨氮（ｍｇ／Ｌ） 自然体 ５．６ ≥１．５ 强化体 ７．２ ＜０．２ ３．２．２光合细菌强化浓度的对比实验 取ｐＨ值６．８、氨氮浓度０．９ｍｇ／Ｌ的污水样 ｌＯ００ｍｌ，等体积分装在两只矿泉水瓶中，使用同一 批菌种，ｌ＃瓶添加光合细菌发酵液０．１ ｌｍｌ，２＃瓶添 加０．２２ｍ１。氨氮降解速率不同，见（图３）。 乏 研贝摩 Ｒ ３；３：２：２器；嚣 Ｅ ．ｔｉ￣薪型巴ＥＥ杀菌监测仪 。ｊ器昌 ０ “ ’ ｏ＜ｈｉｎｓｃｏ ；６ ：＼ ４ ２ ｌ 。８蠼舔骊 。。ｎｖ Ｂ ４ ２ 德田颐贝隆公司中避巷代理 颐贝隆电子科技（北京）有限公司 ・ ３５ ・ 籀 。 天 图３不同光合细菌强化浓度的对比试验 ３．２－３光合细菌贮存时间的强化对比实验 取ｐＨ值５．５、氨氮浓度１．５ｍｇ／Ｌ的污水样 １０００ｍｌ，等体积分装在两只矿泉水瓶中，１＃瓶添加 贮存７天的光合细菌发酵液０．２５ｍｌ，２＃瓶添加贮 存三个月的光合细菌发酵液０．２５ｍｌ。水样氨氮含 量呈逐渐下降趋势但速率不同。氨氮降解速率与 光合细菌贮存时间的关系见（图４）。 ３．２．４ ｐＨ值和氨氮的测定方法 １）ｐＨ值测定方法：ｐＨ快速分析盒（北京大学 化学系研制），水样与试液反应后与标准比色卡 比对，测定范围：６．４ ８．０、８．０～９．６。 ２）氨氮测定方法：纳氏试剂分光光度法。 ４实验结果与分析 １）通过对自然体、光合细菌强化体水质净化 对比实验及（表２）中的数据，得出如下结论： （１）光合细菌对水质有明显的净化作用，其去 除氨氮效果明显，且能稳定水体ｐＨ值。 （２）可使污水处理的换水频次降低，由每月一 次延长至每两个月一次。 （３）经过６１天养殖观察，光合细菌强化体应 激性比对照的自然体强，分析原因：其一是光合细 菌形成优势对养殖水的净化作用；其二是光合细 菌本身营养丰富，并含有大量的生理活性物质如 辅酶ＱｌＯ、抗病毒物质及促生长因子等，鱼儿摄 食后，提高了消化和抗病能力。 ２）通过对光合细菌强化浓度对比实验及（图 ３）的数据，可得出如下结论：同一批次的菌种，添 加量与氨氮降解速率存在线性关系，添加量越高， 降解速率越快，从成本的角度考虑，应根据检测的 氨氮浓度选择添加量，既达到使用效果又经济 合理。（表５）为我们摸索的水体氨氮浓度与光合 细菌添加量。 表５ 项目 １ ２ ３ ４ ５ 氨氮浓度（ｍｇ／Ｌ） Ｏ．４ ０．６ ０．８ １．０ １．２ 添加量（ｍＵＬ） Ｏ．１ Ｏ．２ Ｏ．３ ０．４ ０．５ ３）通过对光合细菌贮存时间强化对比实验及 （表４）中的数据，可得出如下结论： （１）光合细菌加入水中后，要适应新的水环 境，与培养基相比，其ｐＨ值、营养物浓度、渗透压、 光照强度、水温、限定因子、菌群势力等均不是最 佳，所以有一个比较明显的延滞期。 （２）延滞期的长短与菌体的“菌龄”有关，不同 批次的光合细菌延滞期和降解氨氮的速率不同， 贮存时间越长，光合细菌活力越低，死亡率越高， 发酵液中活细胞相对较少，降解氨氮速率越慢。 （３）如何快速恢复光合细菌的活力？我们采 用使用前活化的方法：即光合细菌发酵液１体积， 接人待用水样２体积稀释的培养基中，光照活化 １２小时后，效果很好。 ５总结 １）因时间及对分离的菌种认识程度等关系， 本文仅进行了处理轻度污染水质的应用试验。 ２）光合细菌在溶解氧（ＤＯ）≤ｌｍｇ／Ｌ，光照下， 可以有效净化水质。 ３）目前，我公司采用前段ＵＳＢ厌氧，后段接 触氧化的处理方式处理污水，耗电１．２元／ｍ。污 水。如采用光合细菌降解水中的污染物不需要 充氧，节能明显，有待进一步探讨，希望能将光合 细菌应用到啤酒污水处理中。 参考文献 ［１１ Ｒ．Ｅ．布坎南，Ｎ．Ｅ．吉本斯．ｆ白杰细菌鉴定手册［Ｍ】．第八版 【２］光合细菌培养基［Ｊ］．广东省微生物研究所微生物菌种保 藏中心．２００７ 【３］农业部《新编渔药手册》编撰委员会．新编渔药手册 ［ＭＩ．２００５，６：３８８－３８９．
