４４８ 生ＬＥ ＴＴＥＲＳ ＩＮ Ｈ ＯＬＯＧ ＨＮ Ｙ …Ｖｏｌ．・２３一－ Ｎｏ．・３・ｊ Ｍ－ａｙ，２０１２ｚｕｌ 一 ＴＴ ｓ Ｉ ＢＩＯＴＥＣ 术ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００９—０００２．２０１２．０３．０３３ 综 述 口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及应用研究进展 杨沁，林彤，高闪电，常惠芸 中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，国家口蹄疫参考实验室，甘肃兰州Ｉ ７３００４６ ［摘要］ 口蹄疫是严重影响全球政治经济的烈性动物传染病，快速诊断及有效防治对口蹄疫的防控具有重要意义。 单克隆抗体具有高特异性、均质、活性单一等优点，在生物医学领域中有广泛用途。目前，国内外学者制备了多种抗 口蹄疫病毒的单克隆抗体，并应用于口蹄疫病毒抗原定型、疫苗量化、抗体水平监测、自然感染与疫苗免疫动物的鉴 别诊断，以及口蹄疫病毒抗原表位分析等方面。我们简要综述口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及应用进展。 ［关键词］ 口蹄疫；口蹄疫病毒；单克隆抗体 ［中图分类号］ Ｒ３９２．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］ １００９—０００２（２０１２）０３—０４４８—０４ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｏｎｏｅｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｇａｉｎｓｔ Ｆｏｏｔ－ａｎｄ－Ｍｏｕｔｈ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ ＹＡＮＧ Ｑｉｎ，ＬＩＮ ，ＧＡＯ Ｓｈａｎ—Ｄｉａｎ，ＣＨＡＮＧ Ｈｕｉ—Ｙｕｎ Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｅｔｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｏｔ ａｎｄ Ｍｏｕｔｈ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌａｎ— ｚｈｏｕ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｈｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００４６，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ，Ｅ—ｍａｉｈ ｃｈａｎｇｈｕｉｙｕｎ＠１２６．ｅｏｍ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｆｏｏｄ ａｎｄ ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ（ＦＭＤ）ｉｓ ａ ｖｉｏｌｅｎｔ ｚｏｏｎｏｓｉｓ ｗｈｉｃｈ ａｆｆｅｃｔｓ ｇｌｏｂａｌ ｐｏｌｉｔｉｃ ａｎｄ ｅｃｏｎｏｍｙ。ｆａｓｔ ｄｉ— ａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｉｓ ｄｅｆｉｎｉｔｅｌｙ ｎｅｅｄｅｄ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｈａｓ ｔｈｅ ａｄｖａｎｔａｇｅ ｏｆ ｈｉｇｈ ｓｐｅｃｉｉｃｉｆｔｙ，ｈｏｍｏ— ｇｅｎｅｉｔｙ ａｎｄ ｓｉｎｇｌｅｎｅｓｓ ｏｆ ｃｏｍｐｅｔｅｎｃｅ，ｗｈｉｃｈ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｗｉｄｅｌｙ ｕｓｅｄ ｉｎ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｏｍｅｎｔ，ｓｃｈｏｌ— ａｒｓ ｆｒｏｍ ｄｏｍｅｓｔｉｃ ａｎｄ ｏｖｅｒｓｅａｓ ｈａｓ ｍａｄｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ＦＭＤ ｖｉｒｕｓ（ＦＭＤＶ）。ａｎｄ ｕｓｅ ｔｈｅｍ ｔｏ ｖａｒｉｏｕｓ ｆｉｅｌｄｓ ｏｎ ＦＭＤＶ ｓｕｃｈ ａｓ ａｎｔｉｇｅｎ ｓｔｅｒｅｏｔｙｐｅｓ ｉｄｅｎｔｉｆｙ，ｖａｃｃｉｎｅ ｑｕａｎｔｉｚａｔｉｏｎ，ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｅｖｅｌ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｎａｔｕｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ ａｎｉｍａｌｓ，ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ ｅｐｉｔｏｐｅ． Ｔｈｉｓ ａｒｔｉｃｌｅ ｍａｋｅｓ ａ ｂｒｉｅｆ ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆ ＦＭＤ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ ｆｏｏｔ—ａｎｄ—ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ；ｆｏｏｔ—ａｎｄ—ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ；ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ 口蹄疫（ｆｏｏｔ—ａｎｄ—ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ，ＦＭＤ）是由口 ＳＡＴ３等７个血清型和８０多个亚型，且极易发生突 变。由于型与型之间无交叉免疫保护作用，同一血 清型内的不同亚型的抗原性皆有不同程度的差别， 血清学交叉反应的程度也各不相同，使得口蹄疫的 蹄疫病毒（ＦＭＤ ｖｉｒｕｓ，ＦＭＤＶ）引起的一种急性、热 性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疫 病。偶蹄动物对该病毒极为敏感，主要侵染对象为 牛、羊、猪等家畜，易感动物多达７０余种。ＦＭＤＶ可 造成患病动物的口、鼻、蹄和母畜乳头等无毛部位发 诊断和控制存在很大的难度。单克隆抗体具有识别 单一抗原位点的能力，与抗原结合的特异性强，均质 性高，生物活性单一，易于标准化，可批量生产，已在 生物医学领域中得到广泛应用。我们就ＦＭＤＶ单抗 生水疱，或水疱破损后形成溃疡或烂斑，发病率几乎 达１００％。该病在全世界范围内分布，严重危害畜产 品质量，给畜牧业和进出口贸易造成巨大经济损 失。口蹄疫的发生和流行影响着发生地的经济和政 的制备及应用做一简要概述。 治活动，又称为“政治经济病”。世界动物卫生组织 （ＯＩＥ）和联合国粮农组织（ＦＡＯ）将其列为Ａ类动物 传染病。口蹄疫有Ａ、Ｏ、Ｃ、Ａｓｉａ Ｉ、ＳＡＴ１、ＳＡＴ２、 １ 抗原选择 ＦＭＤＶ属小ＲＮＡ病毒科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｄａｅ）口蹄疫 病毒属（Ａｐｈｔｈｏｖｉｒｕｓ），其ＲＮＡ全长约８５００ ｂｐ，病毒 收稿日期：２０１１－０８—１１ 呈球形，正十二面体结构。该病毒有４种结构蛋白 （ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３和ＶＰ４），它们构成病毒的衣壳；非 结构蛋白有前导蛋白酶（Ｌｐｒｏ）、２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、３Ａ、３Ｂ、 ３Ｃ蛋白酶（３Ｃｐｒｏ）及３Ｄ聚合酶（３Ｄｐｏ１）和它们的前 基金项目：国家科技部转基因重大专项（２０１１ＺＸ０８０１１—００４ ２０Ｏ９ＺＸ０８Ｏ０７一Ｏ０８Ｂ．２００９ＺＸＯ８００６—００２Ｂ） 作者简介：杨沁（１９８７一），女，硕士研究生 通信作者：常惠芸，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｃｈａｎｇｈｕｉｙｕｎ＠１２６．ｃｏｎ 杨沁等：口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及应用研究进展 ４４９ 体。不同血清型ＦＭＤＶ结构蛋白之间有抗原差异 性，ＶＰ１蛋白的型特异性最好，因为ＶＰ１的Ｇ—Ｈ环 叉污染，也不能很好地区分ＦＭＤＶ的血清型。不同 血清型的ＦＭＤＶ可感染同一动物群体，且ＦＭＤＶ的７ 个血清型之间存在共有表位 ，有时会出现交叉反 应，因此提高ＦＭＤＶ定型的特异性就显得尤为重要。 近几年，很多学者着眼于建立一种基于ＦＭＤＶ （１４１～１６０残基）和Ｃ端（２００～２ｌ３残基）在病毒抗原 性和免疫原性方面起重要作用。４种结构蛋白的变 异顺序依次为ＶＰ１＞ＶＰ３＞ＶＰ２＞ＶＰ４。非结构蛋白主 要在病毒ＲＮＡ的复制、裂解及结构蛋白的折叠、装 配等过程中发挥作用，不存在血清型间的差异。 研究表明，部分抗某一血清型的ＦＭＤＶ单抗可 单抗的检测方法。周国辉等 用制备的Ａｓｉａ Ｉ型单 抗Ｉ Ｂ４作为检测抗体，以牛抗ＦＭＤＶ ＩｇＧ为捕获抗 体，建立了检测Ａｓｉａ Ｉ型ＦＭＤＶ的抗原捕获ＥＬＩＳＡ 方法，可检出０．５８５９ Ｉｘｇ纯化的Ａｓｉａ Ｉ型ＦＭＤＶ和 同时和几种ＦＭＤＶ反应 。因此，用特异抗原制备单 抗，用以对ＦＭＤＶ定型检测，可提高其特异性。由于 ＦＭＤＶ全病毒粒子１４０Ｓ具有较强的免疫原性，为获 得高亲和力的单抗，很多学者用不同血清型ＦＭＤＶ 的全病毒粒子作为免疫原。也有很多学者致力于研 ２．５ｘ１０ ＴＣＩＤ 。病毒。李任峰等 用Ｏ型完整病毒制 备了兔抗ＦＭＤＶ高免血清和单抗２Ｇ１２，分别作为捕 获抗体和检测抗体，建立了双抗夹心ＥＬＩＳＡ，能检出 ９Ｏ ｎｇ的病毒。Ｋａｚｕｋｉ等 用Ａ、Ｏ、Ｃ和Ａｓｉａ Ｉ型抗 原制备出多型反应的单抗，用获得的５株单抗进行 究ＶＰ１蛋白的表达和纯化，并用其作为抗原来制备 单抗。ＶＰ１蛋白是最重要的抗原位点，也是抗原变 异的关键。它是在动物体内诱导产生中和抗体的主 要成分，也是惟一耐受水解蛋白酶的病毒蛋白。针 对ＶＰ１的特异性单抗在疫苗研制方面有较好效果。 不同组合，分别代替抗毒血清和过氧化物酶标记抗 体，建立了能同时检测多血清型和单一血清型抗原 的夹心ＥＬＩＳＡ法，解决了ＦＭＤＶ抗原性的差异问题。 将型特异性单抗用于ＦＭＤＶ不同血清型的临床 诊断，能在特异性和稳定性方面对试验进行优化。 国外的一些学者用抗ＦＭＤＶ非结构蛋白的单抗，研 部分国内外学者制备ＦＭＤＶ单抗的抗原选择见表１。 ２ 单抗应用 单抗特异性强，不仅可用于ＦＭＤＶ临床诊断、流 行毒株的抗原性分析、疫苗量化，而且在口蹄疫的检 制出了商品化诊断试剂盒，在特异性和敏感性方面 都优于其他鉴别诊断试剂盒－－ 。胶体金免疫层析技 术操作简便、快速、灵敏，且胶体金免疫层析试纸条 可在常温下保存、运输，能够在田间、野外操作，且无 需专业人员和仪器。运用该方法可有效避免因送检 样品导致的样品、漏检、实验结果假阴性及可能 引发的散毒的危险，被广泛应用于生物医学等领 域。林彤 等用柠檬酸三钠还原法标记已制备的抗 Ａｓｉａ Ｉ型单克隆抗体，结合羊抗鼠ＩｇＧ研制出了检测 Ａｓｉａ Ｉ型ＦＭＤＶ的胶体金免疫层析试纸条。 ２．１．２ 疫苗量化 疫苗在疾病控制中起到了至关重 疫、ＦＭＤＶ抗原位点分析等方面都有广泛的用途。 ２．１ 抗原检测 ２．１．１ 临床诊断——抗原定型 在口蹄疫的临床诊 断中，病毒的快速定型是诊断的重点，也是指导选择 适合的疫苗进行紧急免疫的关键。传统的ＦＭＤＶ抗 原检测用血清学方法，有补体结合法、中和试验、琼 脂扩散试验、间接血凝试验、双抗夹心ＥＬＩＳＡ、胶体 金定型试纸条等，分子生物学方法ＲＴ—ＰＣＲ和基因 芯片技术也是实验室常用的检测方法 。大多数夹 要的作用，当口蹄疫暴发时，实行疫苗免疫可减少损 失。在疫苗生产中，抗原变性会降低终产品的免疫 心ＥＬＩＳＡ方法都采用２种多抗分别作为捕获抗体和 检测抗体，故实验的特异性相对较低，而胶体金定型 试纸条的捕获抗体一般多选用ＦＭＤＶ全病毒的高免 血清。虽然ＲＴ—ＰＣＲ方法敏感性较高，但其容易交 原性。口蹄疫疫苗免疫原性的关键组成部分是 １４０Ｓ病毒粒子，该粒子的降解将大大降低疫苗的效 力。蔗糖密度梯度离心纯化是量化ＦＭＤＶ粒子最常 用的方法，但费时费力。与此相比，ＥＬＩＳＡ方法可大 表１ 口蹄疫病毒单克隆抗体 ４５０ ＬＥＴＴＥＲ ０ｌ－ ＴＴ ＳＩＮ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ Ｖ 技 术 通 讯ｖ ０ｌ＿２３Ｎｏ ・３～ ｊ Ｍａｙ， ２０１２．大缩短分析时间，且操作简便、敏感性高。ＥＬＩＳＡ可 以同时在许多样本中量化１４０Ｓ粒子，其不但可以在 疫苗生产的每个环节监测全病毒粒子，而且可以用 于改进不同组织培养方法带来的影响。Ｙａｎｇ 等用 Ｏ型和Ａ型ＦＭＤＶ全病毒粒子免疫小鼠，获得了２株 备的抗Ａｓｉａ Ｉ型ＦＭＤＶ的单抗１Ｂ８，用纯化的Ａｓｉａ Ｉ 型ＶＰ１蛋白作为抗原，建立了单抗竞争ＥＬＩＳＡ，可用 于Ａｓｉａ Ｉ型猪ＦＭＤＶ抗体的监测。应用特异性和敏 感性较高的抗ＦＭＤＶ单抗建立竞争ＥＬＩＳＡ，可避免 多抗中不明因子的影响，且酶标单抗能用以检测多 结合表位为病毒粒子天然构造的单抗，并以其作为 检测抗体、抗ＦＭＤＶ ０型和Ａ型的多抗作为捕获抗 宿主动物样品，从而提高抗体的监测水平。 ２－３ ＦＭＤＶ抗原位点分析 体，建立了双抗夹心ＥＬＩＳＡ，该方法不仅可以量化 ＦＭＤＶ全病毒粒子到纳克级，还能用于病原的定性 检测。决定ＦＭＤＶ疫苗质量和免疫效率的关键之一 在ＦＭＤＶ型、亚型的特异性方面，中和性位点起 着决定性的作用。很多学者通过制备ＦＭＤＶ中和性 单抗来研究ＦＭＤＶ中和性抗原位点，并对氨基酸位 是抗原含量。张怀宇 等用制备的４株抗Ａｓｉａ Ｉ型 ＦＭＤＶ的单抗建立了ＥＬＩＳＡ方法，用于检测成品疫 苗的ＦＭＤＶ乳化前灭活抗原中的总抗原含量。 ２．２抗体检测 ２．２－１ 区分自然感染和疫苗免疫 用大量扑杀动物 控制疫情会造成巨大的经济损失，相比之下，将屠宰 和疫苗策略联合应用会得到较为理想的效果。疫苗 策略能够帮助控制疫情的暴发，但要想使其更好地 发挥作用，关键是要准确可靠地从感染动物中区分 出疫苗免疫动物，以便保留免疫动物。这也是建立 以贸易为目的，被ＯＩＥ指定为“无口蹄疫区”的关键。 ＦＭＤＶ的某些非结构蛋白也具有免疫原性，部 分自然感染ＦＭＤＶ的动物，其体内多产生针对非结 构蛋白的抗体；而用疫苗免疫的动物，一般都产生针 对结构蛋白的抗体。利用这种抗体的差异性，可以 用检测动物体内抗ＦＭＤＶ非结构蛋白的抗体来区分 该动物的免疫状况，这种方法也可用于检测持续性 感染动物。建立“无口蹄疫区”，要求对抗ＦＭＤＶ非 结构蛋白抗体在口蹄疫暴发后进行大规模血清学监 测 。从预防接种的动物中鉴别感染动物（ＤＩＶＡ， ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ ａｎｉｍａｌｓ）的 有效定性诊断试验，对证明无感染和允许重新开始 畜产品贸易起决定性作用。检测动物体内抗非结构 蛋白３Ｂ和多聚蛋白３ＡＢＣ的抗体，用以区分自然感 染动物和注苗动物，其结果的可信度较高 。 ２．２．２监测抗体水平 目前，许多发展中国家还采 用常规灭活疫苗免疫来控制该病的流行。检测免疫 动物的抗体水平，国际上最常用的是国际贸易中指 定的抗体水平检测方法，即病毒中和试验和液相阻 断ＥＬＩＳＡｔ 。传统检测方法周期长，分子生物学方法 仪器昂贵、成本高，不利于基层推广，而ＥＬＩＳＡ检测 法快速、简便、重复性好、灵敏度高、节省试剂，可用 于批量检测。Ｋａｚｕｋｉ 等用２株抗ＦＭＤＶ Ｏ／ＪＰＮ／ ２０００毒株的中和单抗７２Ｃ１和６５Ｈ６分别作为捕获抗 体和过氧化物酶标检测抗体，建立了中和单抗夹心 液相阻断ＥＬＩＳＡ，可特异地检测血清中的ＦＭＤＶ Ｏ 型抗体。林彤 １等用改良后的过碘酸钠法标记已制 点进行分析，将研究深入到氨基酸水平，以便从病毒 分子生物学的角度解释ＦＭＤＶ抗原结构不断变异， 型间及型内交叉保护小或无交叉保护力的原因。 Ｄｕｃｈｅｓｎｅｔ 等用抗ＦＭＤＶ的中和性单抗与同一亚型 不同毒株的全病毒粒子和ＶＰ１蛋白反应，定位中和 性抗原位点。Ｒａｎａ 等将１２株抗Ａｓｉａ Ｉ型ＦＭＤＶ印 度疫苗株的单抗分成３组，分别结合不同的表位，用 于对３ｌ株Ａｓｉａ Ｉ型ＦＭＤＶ田间分离株和２株疫苗株 的抗原性分析。Ｓａｎｙａｌ 等用制备的１ １株单抗，通 过夹心ＥＬＩＳＡ方法，对ＦＭＤＶ Ａ型的田间分离株进 行比较，虽然在单抗分析中发现了小的抗原性差异， 但在参考毒株和田间分离株之间不存在较大分歧， 证明了疫苗毒株具有广泛的抗原性。 ３ 结语 作为全球最重要的动物传染病之一，口蹄疫依 然受到世界各国的密切关注。口蹄疫０、Ａ和Ａｓｉａ Ｉ 型在亚洲地区仍普遍流行。虽然现用的单型夹心 ＥＬＩＳＡ（ＩＳ—ＥＬＩＳＡ）可区分ＦＭＤＶ的７种血清型抗原 及猪水泡病病毒（ＳＶＤＶ），但由于Ｏ型和Ａ型的抗原 性很广，疫苗株很难抵抗田间分离株，故而ＩＳ—ＥＬＩ． ＳＡ的敏感性和适应性相对较低。目前，国内外大多 数学者都致力于ＦＭＤＶ Ｏ型和Ａｓｉａ Ｉ型单抗的研 究，而对Ａ型单抗的研究较少，Ｃ型的研究暂时还停 留在蛋白表达阶段，还没有相关单抗的文献报道。 单抗能阻止病毒吸附及穿入，也可使已吸附的 病毒解离，用单抗进行预防接种及动物的紧急免疫， 已在许多人畜共患病研究中取得了较好效果。为了 使针对ＦＭＤＶ的单抗在易感动物的被动免疫中发挥 出其潜在的应用价值，需要选取相对保守、优势且广 谱的抗原表位制备抗原，进而获得高特异性的单抗。 通过运用单抗对ＦＭＤＶ抗原位点的分析，可以 从氨基酸水平上研究定位抗原表位。单抗具有导向 作用，可作为治疗性药物，应用于口蹄疫的临床治 疗。又因为单抗毒性较低，故可用其作为传递药物 的载体，将药物携带至靶器官，针对性地作用于机 杨沁等：口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及应用研究进展 ４５Ｉ ｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｏｏｔ——ａｎｄ—－ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅｓ ｕｓｉｎｇ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｄｅｆｉｎｉｎｇ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ｅｐｉｔｏｐｅｓ 体，提高药物的疗效。在放射免疫分析、免疫组化、 流式细胞术中，单抗也有广泛应用。单抗还可作为 亲和层析的配体，用以纯化口蹄疫抗原。 不同单抗只能特异识别不同抗原位点，所以用 ｏｎ ＦＭＤＶ Ａ５ ｓｕｂｔｙｐｅｓ［Ｊ］．Ｖｉｕｓ Ｒｅｓ，１９８９，１３（１）：ｒ４５—６０． ［１６］周国辉，李万，赵磊，等．抗Ａｓｉａ Ｉ型口蹄疫病毒单克隆抗体的 制备及抗原捕获ＥＵＳＡ检测口蹄疫病毒的研究『Ｊ１．中国预防兽 医学报，２００７，２９（１２）：９６０—９６４． 针对ＦＭＤＶ同一血清型的不同单抗研制的试剂盒， 在检测结果上也会存在一定的差异。为了提高检测 ｆｌ７】李任峰，何启盖，刘正飞，等．口蹄疫病毒单克隆抗体的制备 结果的精确度，需要在标准化问题上进一步研究。 参考文献 ［１］ Ｋａｚｕｋｉ Ｍ，Ｋａｔｓｕｈｉｋｏ Ｆ，Ｋａｚｕｏ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｆｏｏｔ—ａｎｄ—ｍｏｕｔｈ ｄｉｓ． ｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅ——ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓ－－ ｓａｙ ｕｓｉｎｇ ｍｕｌｔｉｓｅｒｏｔｙｐｅ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００９，４７（１ １）：３６６３—３６６８． ［２］ 向敏，张克山，卢顺，等．Ａｓｉａ Ｉ口蹄疫ＶＰ２蛋白单克隆抗体的 制备及单抗竞争ＥＬＩＳＡ方法的建立【Ｊ】．生物工程学报，２００８，２４ ｒ９１：１６６４—１６６９． ［３］ Ｒａｎａ Ｓ Ｋ， Ｂａｇｃｈｉ Ｔ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ＦＭＤ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ Ａｓｉａ Ｉ ａｎｄ ｄｅ— ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎｓｉｎ ｔｈｅ ｆｉ ｅｌｄ ｓｔｒａｉｎｓ［Ｊ］．Ｖｅｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ，２００８，１２２（３—４）：２４１—２４９． 『４］林彤，邵军军，丛国正，等．利用Ａｓｉａｌ型口蹄疫病毒ＶＰ１蛋白 的单克隆抗体建立单抗竞争ＥＬＩＳＡ方法［Ｊ１．安徽农业科学， ２００９，３７（２３）：１ １０２５—１ １０２６． ［５］Ｌ１ Ｗａｎ，ＺＨＯＵ Ｇｕｏ—ｈｕｉ，ＹＡＮＧ Ｚｅｎｇ－ｑｉ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ａｓｉａ Ｉ ｆ０ｏｔ—ａｎｄ—ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｕｒｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｊ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ Ｖｅｔ Ｍｅｄ ２００７，２９（６）：４４８—４５２． ［６ ６］鲁会军，韩松，郑敏，等．Ｏ型口蹄疫病毒ＶＰ１蛋白单克隆抗体 的制备及其抗原识别位点的初步分析［ｃ１∥中国畜牧兽医学会 家畜传染病学分会第六次全国会员代表大会即第１１次学术研 讨会论文集．２００５：９４４—９４７． 【７］段舒怡，姜平，李玉峰，等．Ｏ型口蹄疫病毒ＶＰ１蛋白单克隆抗 体的制备与生物学特性鉴定ｆＪ］．中国人兽共患病学报，２００７，２３ （３）：２４０—２４３． ［８】宋帅，林彤，邵军军，等．Ｏ型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备和 鉴定［Ｊ］．中国预防兽医学报，２００９，３１（４）：３２５—３２８． （９］吴磊，田美娜，卢曾军，等．口蹄疫病毒非结构蛋白３Ａ单克隆 抗体的制备和鉴定［ｊ］．中国兽医科学，２０１０，４０（４）：３３１—３３６． ［１０］田美娜，李永亮，付元芳，等．口蹄疫病毒非结构蛋白２ｃ主要 表位区的原核表达及其单克隆抗体的制备［Ｊ］．中国预防兽医学 报。２００９．３１（１）：６９—７３． 【１１】何永强，杜青云，盛祖恬，等．抗猪口蹄疫病毒单克隆抗体的 研制及其生物学特性鉴定［Ｊ】．浙江农业学报，２００２，１４（３）： １３５—１３８． ［１２］李永亮，田美娜，卢曾军，等．１：３蹄疫病毒非结构蛋白３Ｂ单克 隆抗体的制备与鉴定『Ｊ１．江苏农业学报，２００２，１４（３）：１３５—１３８． ［１３］Ｙａｎｇ Ｍ，Ｈｏｌｌａｎｄ Ｈ，Ｃｌａｖｉｊｏ Ａ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉ－ ｈｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｗｈｏｌｅ ｖｉｒｕｓ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｏｆ ｆｏｏｔ—－ａｎｄ—．ｍｏｕｔｈ ｄｉｓ． ｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｓｅｒｏｔｙｐｅ Ｏ ａｎｄ Ａ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｕｓｅ ｉｎ ｑｕａｎｔｉ— ｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔａｃｔ ｖｉｒｕｓ ｆｏｒ ｖａｃｃｉｎｅ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ， ２００８，２６：３３７７—３３８２． ［１４】Ｌｕ Ｚ，Ｃａｏ Ｙ，Ｂａｏ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ｏｆｒ ｆｏｏｔ—ａｎｄ—ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｂｏｕｎｄ Ｅｍｅｒｇ Ｄｉｓ，２００８，５５（５／６）：１９６—１９９． ［１５】Ｓａｉｚ Ｊ Ｃ，Ｇｏｎｚａｌｅｚ Ｍ Ｊ，Ｍｏｒｇａｎ Ｄ Ｏ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｅｏｍ— 及检测应用【ＪＪ．生物技术通报，２００６，增刊：５４４—５４８． ［１８］Ｋａｚｕｋｉ Ｍ，Ｋａｔｓｕｈｉｋｏ Ｆ，Ｋａｚｕｏ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｆｏｏｔ—ａｎｄ—ｍｏｕｔｈ ｄｉｓ． ｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅ——ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓ— ｓａｙ ｕｓｉｎｇ ｍｕｈｉｓｅｒｏｔｙｐｅ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００９，４７（１ １）：３６６３—３６６８． 【１９］Ｂｒｏｃｃｈ Ｉ Ｅ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ Ｉ Ｅ，Ｄｅｋｋｅｒ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｘ ＥＬＩＳＡｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ｎｏｎｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｆｏｏｔ—ａｎｄ—ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｖａｃ— ｅｉｎｅ，２００６，２４（４７）：６９６６—６９７９． ［２０］林彤，邵军军，丛国正，等．Ａｓｉａ Ｉ型口蹄疫病毒胶体金免疫层 析检测方法的建立 ．生物工程学报，２００９，２５（５）：７６７—７７２． 【２１］张怀宇，王泰健，赵耘，等．抗Ａｓｉａ Ｉ型口蹄疫单克隆抗体的制 备及初步应用［Ｃ］．中国畜牧兽医学会２００６学术年会，２００６： ７７２—７７６． ［２２】Ｆｏｏｒｄ Ａ Ｊ，Ｍｕｌｌｅｒ Ｊ Ｄ，Ｙｕ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａ— ｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｆｏｏｔ——ａｎｄ—．ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉ—． ｕｒｓ ｎｏｎ—ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ３ＡＢＣ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００７， ３２１：ｌ４２—１５１． ［２３］Ｓｏｒｅｎｓｅｎ，Ｋ Ｊ，ｄｅ Ｓｔｒｉｃｋｅｒ Ｋ，Ｄｙｒｔｉｎｇ Ｋ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ— ｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｏｔ—－ａｎｄ—．ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ａｎｉｍａｌｓ ｆｒｏｍ ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ ａｎｉｍａｌｓ ｕｓｉｎｇ ａ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ＥＬＩＳＡ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｂａｃｕｌｏｖｉ— ｕｒｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ＦＭＤＶ ３ＡＢＣ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ａ ３ＡＢＣ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ［Ｊ］．Ａｒｃｈ ＶｉｆｌＪＩ．２００５．８０５：１４． 【２４】Ｂｅｒｇｍａｎｎ Ｉ Ｅ，Ｍａｌｉｒａｔ Ｖ，Ｎｅｉｚｅｒｔ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｓｅｒｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ ｆｏｏｔ—‘ａｎｄ——ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｓｕｒ— ｖｅｉｌｌａｎｅｅ ｉｎ ｃａｔｔｌｅ ｕｎｄｅｒ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ：ａ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ａｎ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡ－３ＡＢＣ ｗｉｔｈ ａｎ ｅｎｚｙｍｅ—ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｅｌｅｃｔｒｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｂｌｏｔ ａｓｓａｙ［Ｊ］．Ａｒｃｈ Ｖｉｒｏｌ，２０００，１４５： ４７３—４８９． ［２５］Ｃｌａｖｉｊｏ Ａ，Ｈｏｌｅ Ｋ，Ｌｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ— ｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｆｏｏｔ—ａｎｄ－ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｎｏｎ－ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ３ＡＢＣ，３Ｄ，３Ａ ａｎｄ ３Ｂ ｂｙ ａｍｕｈｉｐｌｅｘｅｄ Ｌｕｍｉｎｅｘ ａｓｓａｙ ｔｏ ｄｉｆ－ ｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ ｃａｔｔｌｅ［Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ，２００６，２４ （１０）：１６９３—１７０４． ［２６］Ｍａｃｋａｙ Ｄ Ｋ，Ｆｏｒｓｙｔｈ Ｍ Ａ，Ｄａｖｉｅｓ Ｐ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｆｏｏｔ—ａｎｄ—ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｕｓｉｎｇ ａ ｐａｎｅｌ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｎｏｎ—ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ＥＬＩＳＡ［Ｊ］．Ｖａｃ— ｃｉｎｅ，１９９７，１６：４４６—４５９． ［２７］Ｋａｚｕｋｉ Ｍ，Ｋａｔｓｕｈｉｋｏ Ｆ，Ｋａｚｕｏ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ｍｏｎｏｃｌｏ． ｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓａｎｄｗｉｃｈ ｌｉｑｕｉｄ——ｐｈａｓｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ——ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｏｔ——ａｎｄ——ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ０ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｂｒｉｅｆ Ｒｅｓ Ｒｅｐ，２００９，２１：４９９—５０３． ［２８］Ｄｕｃｈｅｓｎｅ Ｍ，Ｃａｒｔｗｒｉｇｈｔ Ｔ，Ｃｒｅｓｐｏ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｅｐｉｔｏｐｅ ｏｆ ｆｏｏｔ—‘ａｎｄ—－ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｕｓｉｎｇ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｍ１．１９８４．６５（９）： １５５９—１５６６． ［２９］Ｓａｎｙａｌ Ａ，Ｇｕｒｕｍｕｒｔｈｙ Ｃ Ｂ，Ｖｅｎｋａｔａｒａｍａｎａｎ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉ— ｇｅｎｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｏｔ—－ａｎｄ——ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｕｒｓ ｓｅｒｏ． ｔｙｐｅ Ａｓｉａ Ｉ ｆｉｅｌｄ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｕｓｉｎｇ ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｄ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎ ｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｖｅｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００３，９３：１—１ １．
