EB病毒诱发人弥漫大B细胞淋巴瘤的分子病理特性探索
作者：宋魏 于庆凯
来源：《中国实用医药》2014年第33期
【摘要】 目的 探讨EB病毒诱发人弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）的分子病理特性。方法 50例EB病毒诱发人DLBCL患者， 应用EBV原位杂交技术、免疫组化及实时荧光定量PCR 法， 并对分子病理特性展开探讨。结果 50例EB阳性DLBCL病例中病变仅累及淋巴结11例， 仅位于淋巴结外器官19例， 既有淋巴结病变又伴结外累及20例。中位生存35个月。分析组织学特征：可见多形性淋巴样细胞散在或弥漫浸润性分布， 背景部分情况下可见嗜酸细胞。本组多形性亚型15例， 大细胞亚型34例， 混合亚型1例。免疫表型：40例老年EB阳性DLBCL组中bcl-6表达为15%， 较非老年组40%低， 但差异无统计学意义（P>0.05）。老年EB阳性DLBCL组中血EBV病毒DNA检出率为50%， 明显高于非老年组检出率10%， 差异有统计学意义（P
【关键词】 EB病毒；人弥漫大B细胞淋巴瘤；分子病理特性
弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma， DLBCL）是一组异质性较明显的肿瘤实体， 是非霍奇金淋巴瘤病发率较高的类型， 可依据分子遗传学、组织学、临床、免疫表型按亚型或多种变异型划分。EB诱发的DLBCL在生物学及形态学特征上可能与DLBCL其他亚型不同， 其具有侵袭性更强、年龄分布更高、生存率更低等特征[1]。本次研究选取50例EB诱发的DLBCL病例， 就其分子病理特性展开探讨， 现将结果总结如下。 1 资料与方法
1. 1 一般资料 本次选取50例EB病毒诱发的DLBCL患者， 男28例， 女22例， 年龄52～88岁， 平均年龄（73.2±3.8）岁， 其中年龄>60岁40例， 中位年龄70岁。依据2008年WHO制定的造血与淋巴组织肿瘤新分类标准， 对免疫表型和组织学表型确诊。均采用CHOP方案治疗， 即环磷酰胺药物+多柔比星药物+长春新碱药物+泼尼松， 可取CHOP应用， 开展联合化疗。对患者一般资料进行收集。
1. 2 方法 ①EBV原位杂交：病变组织中相关EBVmRNA表达采用EBV寡核苷酸探针原位杂交技术（EBER1/2）。常规脱蜡水化， 蛋白酶K 4 g/L， 37℃， 行30 min消化， 乙醇脱水， 干燥， 再探针滴加， 孵育3 h， 温度为55℃， 漂洗后取抗FITC/HRP抗体滴加， 室温行30 min孵育， 实施DAB显色， 应用苏木精完成对比染色处理， 试剂盒中提供阳性对照片， 予以阳性对照， 探针对PBS代替， 完成阴性对照。②免疫组织学染色：本操作应用免疫组代Envision法进行。以pH 9.0的Tris-EDTA微波修复20 min为抗原修复条件， Dako免疫组织化学仪上完成相关检测操作。③实时荧光定量PCR技术：采用此技术对淋巴细胞中EB 病毒游离
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DNA 进行定量测定。反应条件为93℃ 3 min， 93℃ 45 s， 55℃ 2 min， 共40 个循环。反应结束后， 用计算机将样本和标准曲线对比， 计算出反应体系中待测标本中DNA 的拷贝数。PCR 反应总体积为50 μl， 含10 μl PCR 缓冲液， 引物和对应的荧光标记探针各10 pmol。dATP、dCTP、dGTP 和dUTP 各200 μmol/L， Tap 聚合酶5 U， DNA 模板5 μl， 吸取抽提的DNA 5 μl置入PCR的反应管中， 在ABI7300 自动荧光PCR 仪上进行扩增。判别标准定义为：DNA水平>1×103copy/ml为阳性， DNA≤1×103copy/ml 为阴性。
1. 3 统计学方法 采用SPSS13.0统计学软件分析数据。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P 2 结果
50例EB阳性DLBCL病例中， 病变仅累及淋巴结11例， 仅位于淋巴结外器官19例， 既有淋巴结病变又伴结外累及20例。中位生存35个月。分析组织学特征：可见多形性淋巴样细胞散在或弥漫浸润性分布， 背景部分情况下可见嗜酸细胞。本组多形性亚型15例， 大细胞亚型34例， 混合亚型1例。免疫表型：40例老年EB阳性DLBCL组中bcl-6表达为15%， 较非老年组40%低， 但差异无统计学意义（P>0.05）。老年EB阳性DLBCL组中血EBV病毒DNA检出率为50%， 明显高于非老年组检出率10%， 差异具有统计学意义（P 3 讨论
本次选取病例中， 老年人占80%， 老年EB病毒诱发的DLBCL属新的DLBCL亚型， 随着年龄增大， EB阳性DLBCL发病人数增多， 且年龄增长造成的免疫系统衰老或衰退属全球现象， 本研究40例老年EB阳性DLBCL病例年龄均>60岁， 中位年龄70岁， 相较60岁外周血单核细胞等EBV DNA有较高检出率。而青少年在EBV感染时， 造成的EBV核抗原2IgG抗体多呈终生存在表现， 而已证实EBV与多种淋巴造血系统肿瘤有较为密切的关联， 即随年龄增长， 老年人EB阳性DLBCL的发生发展与人体免疫系统的退化和衰老关联密切[2， 3]。
本次研究中约1/3患者病变累及的结外器官在一个以上， 乳腺、扁桃体、甲状腺、鼻咽、胃、皮肤、胸腔、支气管等为结外常见累及部位， 与国外报道一致。与EBV阴性DLBCL比较， EB阳性DLBCL同样具更侵袭性特征、更高发病年龄和更差预后， 一般患病年龄>70岁， 在临床被认为是老年EB阳性DLBCL多变量和单变量分析较为可靠的预后因素， 但结果显示， 虽>70岁患者有更差预后， 但相较
综上所述， 老年EB阳性DLBCL属临床病理特征独特的DLBCL亚型， 但与非老年EB阳性DLBCL有一定相似性， 需结合免疫学、临床等资料， 与其他类型淋巴瘤鉴别。 参考文献
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[1] 林云， 杨文萍， 黄慧， 等. EB病毒感染相关的儿童散发性伯基特淋巴瘤中miR-127和miR-155表达及意义. 临床与实验病理学杂志， 2013， 29（10）：1076-1080.
[2] 徐方平， 刘艳辉， 庄恒国， 等. 老年人EB病毒阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤的临床病理特征. 中华病理学杂志， 2011， 40（9）：616-621.
[3] 程波， 孙锁柱， 丁姗姗， 等. 老年性EB病毒阳性的弥漫性大B细胞淋巴瘤1例. 诊断病理学杂志， 2013， 20（3）：189-190. [收稿日期：2014-08-22]
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