维普资讯 http://www.cqvip.com 第２０卷第４期 沈阳化工学院学报 Ｖ０１．２０ Ｎｏ．４ ２００６．１２ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＳＨＥＮＹＡＮＧ ＩＮＳＩ＇ＩＴＵＴＥ ＯＦ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ Ｄｅｅ．２００６ 文章编号：１００４—４６３９（２００６）０４—０２４８—０３ 番茄红素测定方法研究 侯纯明，何美 （沈阳化工学院，辽宁沈阳１１０１４２） 摘要： 从番茄红素及口一胡萝卜紊的紫外图谱差异入手，得到以氯仿为溶剂，以５１８．８ ｒｉｍ吸收 峰为测定波长的番茄红素测定方法；制作标准曲线．该测定方法避免了番茄红素标准样品的制约， 为番茄红素的准确测定奠定了基础． 关键词：番茄红素；测定法；紫外图谱 中圈分类号：ＴＱ０７５ 文献标识码：Ａ 番茄、红素的分子式为ｃ４０ Ｈ５６，分子量为 番茄红素的准确测定奠定了基础 ５３６．８５，与 一胡萝卜素是同分异构体，它由１１ 个共轭及２个非共轭碳一碳双键组成，是许多类 １材料与仪器 胡萝卜素生物合成的中间体．番茄红素是一种脂 番茄红素、 一胡萝卜素，华北制药厂； 溶性不饱和碳氢化合物，可溶于乙醚、石油醚、正 氯仿、正己烷、四氢呋喃、丙酮、乙醇：均为分 己烷、丙酮，易溶于氯仿、二硫化碳、苯等有机溶 析纯，沈阳化学试剂厂． 剂． 紫外分光光度计，７２１型，上海第三分析仪 目前番茄红素的测定方法主要有以下几种： 器厂； （１）紫外一可见分光光度法…１；（２）ＴＣＬ薄层色 ＵＶ—Ｖｉｓｉｂｌｅ Ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ， 谱法［ ；（３）高压液相色谱法 ３．这几种方法均 ＵＶ一２４０ Ｓｈｉｍａｄｚｕ型，日本岛津公司； 有较明显的优缺点：紫外一可见分光光度法比较 电子天平，ＹＰ６Ｏ０ｏ型，上海精科天平厂； 简单，但不能排除样品中 一胡萝卜素等其它类 电热烘干箱，１０１—１型，上海湖南科学技术 胡萝卜素的干扰；ＴＣＬ薄层色谱法测定过程复 联营厂； 杂，分析时间长，不易定量；高压液相色谱法是通 电子分析天平，ＡＲ２１４０，沈阳杰龙仪器有限 过与标准样品的峰面积比测定样品中番茄红素 公司． 的含量，要求有番茄红素的标准样品，而高纯度 的番茄红素本身稳定性很差，不宜长期存放，且 ２实验与讨论 其价格又非常昂贵，日常测定难度很大． 本实验是在研究和参考前人有关番茄红素 ２．１番茄红素在不同溶剂中的紫外图谱分析 测定方法－４ Ｊ基础上，从番茄红素及胡萝卜素的 取５个５Ｏ ｍＬ容量瓶，在每个容量瓶中分 紫外图谱差异人手，通过对番茄红素及胡萝卜素 别加入番茄红素、 一胡萝卜素样品Ｏ．５ ｍｇ，用四 的紫外图谱分析，确定最佳溶剂为氯仿；并对番 氢呋喃、正己烷、乙醇、丙酮、氯仿５种溶剂分别 茄红素标准曲线进行绘制；确定了方法的准确度 定容．在３００ ６００ ｎｉ－ｉ１范围内进行扫描，得出的 和精密度．这种方法排除了口一胡萝卜素的干扰， 吸收光谱如图１～图５所示． 避免了番茄红素标准样品的制约，为进一步研究 收稿日期：２００５—１２—０９ 作者简介：侯纯明（１９５９一）。女，福建南安人，副教授，硕士，主要从事物理化学及相关学科的研究 维普资讯 http://www.cqvip.com 运 采 第４期 侯纯明，等：番茄红素测定方法研究 ｇ／ｎｍ 图１番茄红素、口一胡萝卜索在四氢呋哺中的紫外图谱 ｇ／ｎｍ 图２番茄红素、 一胡萝ｂ素在正己烷中的紫外图谱 吾 ．ｇ／ｎｍ 图３番茄红素、口一胡萝ｂ素在氯仿中的紫外图谱 ｇ／ｎｍ 图４番茄红素、口 胡萝卜素在丙酮中的紫外图谱 螽 ｇ／ｎｍ 图５番茄红素、 一胡萝ｂ素在乙醇中的紫外图谱 番茄红素及 一胡萝ｂ素在不同溶剂中的紫 外吸收光谱吸收峰情况如表１所示． 表１番茄红索及卢一胡萝ｂ素在不同 溶剂中的紫外吸收光谱吸收峰 ｎｍ 由以上图表数据可以看出，番茄红素在几种 不同溶剂中均有类似的吸收峰，但对不同的溶剂 其峰的位置各有不同．不过无论在哪种溶剂中， 均以中间的峰为最强，两边的峰稍弱．所以，通常 紫外分光光度法中均以最强吸收峰作为测定基 准．但是在番茄红素的最强吸收波长时， 一胡萝 卜素的吸收也很强，它又是番茄红素提取物中的 主要类似物．所以，ｐ．胡萝ｂ素对番茄红素含量 测定值的影响很大． 对比番茄红素及 一胡萝ｂ素在５种溶剂中 的吸收光谱后可以看出，番茄红素在氯仿和正己 烷中吸收光谱特征明显，而且这两种溶剂本身又 没有紫外吸收，因而适合作为测定用的溶剂．考 虑到番茄红素在正己烷中的溶解能力较差，实际 操作中极易造成番茄红素的过饱和，使测定结果 低于实际值，决定试验中以氯仿作为溶剂．番茄 红素在氯仿中极易溶解，一般提取番茄红素时也 多用氯仿作为萃取剂，所以，选用氯仿还可以减 少由于不同溶剂带来的测定误差，提高方法的准 维普资讯 http://www.cqvip.com 沈阳化工学院学报 ２００６正 确度． 确定了氯仿作为溶剂后，还要确定测定波 长．当选择番茄红素吸收最强的４８５．０ ｎｎ３．作为 由图６可以看出，番茄红素的质量浓度．吸 光度（５１８．８ ｎｍ波长处）关系为一条直线，其直 线方程为：Ａ＝０．２６９ ７ ｃ＋０．０５８ ９，显示出良好 的线性关系．． ２．３方法的准确性和精密度 测定波长时， ．胡萝ｂ素的吸收峰也相当强，所 以４８５．０ ｎｎ３．不适合做测定波长．因而选择较长 波区５１８．８ ｍ作为测定波长，其吸收峰的吸收 强度虽然不如４８５．０ ｎｎ３．的高，但此时 ．胡萝ｂ 素的吸收却很小，可以避免 ．胡萝ｂ素对测定 的影响，提高方法的准确度．因此，实验过程选用 ５１８．８ ｎｎ３．作为测定波长． ２．２番茄红素标准曲线的绘制 准确称取经真空干燥的番茄红素标准品 ０．７、１．３、１．９、２．６、３．０、３．９、４．１ ｍｇ，分别在 １００ ｍＬ，￣－量瓶中用氯仿溶解并定容，迅速稀释＋ 分别在７２１型分光光度计上于５１８．８ ｎｎ３．波长 处，用１ ｃｍ比色皿以氯仿作参比，测得一系列吸 光度值，经７次平行测定，其平均结果见表２． 裹２番茄红素的质量浓度与吸光度的关系 吸光度 质量浓度／（ｍｇ／Ｌ） ０．２１５ ０．６９８ ５ ０．３９８ １．２９３ ０ ０．５８４ １．８９７ ３ ０．７８９ ２．５６３ ４ ０．９００ ２．９２４ ０ １．０４１ ３．８００ １．１１７ ４．０００ 以吸光度值对番茄红素的质量浓度作图得 番茄红素标准曲线，如图６所示． ｐ／（ｍｇ／Ｌ） 图６番茄红紊的质量浓度与吸光度的标准曲线 采用标准加入法和重现性测定方法，对不同 浓度进行实验，结果表明：番茄红素的回收率为 ９４．５％，重现性相对标准偏差为ｓ＝３．５％． ３结论 （１）使用氯仿作溶剂，大大增加了番茄红素 的溶解度，避免了由于稀释时番茄红素不能全部 溶解所带来的测定误差，这对番茄红素粗提取物 或纯品番茄红素的测定都极为有利． （２）实验采用番茄红素在氯仿中５１８．８ ｎｍ 下的吸收峰，而不用最大吸收峰４８５．０ ｎｎ３．，此时 ．胡萝ｂ素的吸收峰很小，可以避免其对测定的 影响，有很好的实际意义． （３）该方法能将番茄红素与 ．胡萝ｂ素较 好分离，并定量分析，简便易行，不需高纯度的番 茄红素标样，适用于日常的检验测定工作．该测 定方法避免了番茄红素标准样品的制约，为番茄 红素的准确测定奠定了基础． 参考文献： ［１］王罗新，吕军，杜宗良，等．番茄红素与口环糊精包 结物的紫外一可见吸收光谱研究［Ｊ］．光谱学与光谱 分析，２００４，２４（２）：１８３—１８６． ［２］邸进申，王燕燕，郑辉杰，等．番茄红素的层析分离 ［Ｊ］，精细化工，２００３，２０（４）：２１５—２１７． ［３］孙国新，王德才，孙长顺．反相高效液相色谱法测 定番茄红素［Ｊ］．中国公共卫生，２００３，１９（１２）： １５１７． ［４］ 张连富，丁霄霖．番茄红素简便测定方法的建立 ［Ｊ］．食品与发酵工业，２００１，２７（３）：５１—５５． （下转第２５７页） 维普资讯 http://www.cqvip.com 第４期 盂玲，等：双水相体系萃取植物酯酶的研究 ２５７ 参考文献： ［Ｊ］．浙江农业大学学报，１９９７，２３（２）：２０５—２１０． ［１］迟玉杰．实用蛋白质制备技术［Ｍ］．北京：化学工业 ［５］ 蒋能群，赵风生．用双水相系统从大肠杆菌细胞内 出版社，１９９８：６５—６８． 释放Ｌ一天门冬酰胺酶［Ｊ］．工业微生物，１９９９，２９ ［２］童爱军，王珊．生物大分子的新颖分离系统——双 （２）：５—９． 水相及其应用［Ｊ］．抚顺石油学院学报，１９９８，１６ ［６］ Ａｌｂｅｒｔｓｓｏｎ Ｐ Ａ．Ｐａｒｔｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｎｄ Ｍａｃｒｏ— （３）：４—６． ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ［Ｍ］：２ｎｄ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ，１９７１：５８— ［３］周延，张鹏，谭天伟．胞内蛋白的选择性提取［Ｊ］．微 ７１． 生物学通报，２０００，２７（２）：１４３—１４５． ［７］ 陈毓茎．生物化学实验方法和技术［Ｍ］．北京：科学 ［４］周晓云，傅美景．双水相体系提取脂肪酶的研究 出版社，２００２：９５—９６． Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｅｓｔｅｒａｓｅ ｂｙ Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ ＡｍｍＯｎｉｕｍ Ｓｕｌｆａｔｅ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｔｗｏ—ｐｈａｓｅ Ｓｙｓｔｅｍ ＭＥＮＧ Ｌｉｎｇ ，一，ＹＡＮＧ Ｄａｎ ，ＺＨＵ Ｊｉａｎ—ｘｉｎｇ （１．Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １０１４２，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １０１６１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｐａｐｅｒ ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｅｓｔｅｒａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ＰＥＧ／（ＮＨ４）２ＳＯ４ ｔｗｏ－ｐｈａｓｅ ｓｙｓ— ｔｅｒｎ．Ｔｈｅ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ ｏｆ ｐａｒｔｉｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｅｓｔｅｒａｓｅ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ，ａｎｄ ｔｈｅ ｖｏｌｕｍｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｐ ｐｈａｓｅ ｔｏ ｔｈｅ ｂｏｔｔｏｍ ｐｈａｓｅ ｏｎ ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ＰＥＧ ａｎｄ（ＮＨ４）２ＳＯ４，ｐＨ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｒｅｓｐｅｃ— ｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｔｈｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｒｅ ２７％ＰＥＧ１０００，１３％（ＮＨ４）２ＳＯ４，ｐＨ ７．５。Ｉｔ ｗａｓ ｓｈｏｗｎ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐａｒｔｉｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ Ｋ。ｏｆ １０．２４６ ２，Ｋｐ ｏｆ ２．３１６ ０，ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ９４．８％． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ａｑｕｅｏｕｓ ｔｗｏ－ｐｈａｓｅ ｓｙｓｔｅｍ；ｐｌａｎｔ ｅｓｔｅｒａｓｅ；ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ； （ＮＨ４）２ＳＯ４ （上接第２５０页） Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｍｅａｓｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｙｃｏｐｅｎｅ ＨＯＵ Ｃｈｕｎ—ｍｉｎｇ，ＨＥ Ｍｅｉ （Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｇｏｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １０１４２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｌｙｃｏｐｅｎｅ ｉｓ ａ ｋｉｎｄ ｏｆ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｃａｒｏｔｅｎｅ ｔｈａｔ ｈａｓ ｖａｒｉｏｕｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．Ｕｓｕａｌｌｙ， ｉｔ ｅｘｉｓｔｅｄ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｃａｒｏｔｅｎｅ ｓｙｎｃｈｒｏｎｏｕｓｌｙ ｉｎ ｍａｎｙ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ．Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｌｙｃｏｐｅｎｅ ａｎｄ ．ｃａｒｏｔｅｎｅ，ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｍｅａｓｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｃｏｐｅｎｅ．Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ｉｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｓｏｌｖｅｎｔ ａｎｄ ｔｈｅ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ａｔ ５１８．８ ｎｎ２ ａｓ ｉｎｄｅｘ．Ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｄｒａｗｎ ｏｕｔ．Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ａｖｏｉｄｓ ｔｈｅ ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ ｌｙｃｏｐｅｎｅ ｓａｍｐｌｅ ａｎｄ ｗｉｌｌ ｈｅｌｐ ｅｘａｃｔ ｍｅａｓｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｃｏｐｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｌｙｅｏｐｅｎｅ；ｍｅａｓｕｒａｔｉｏｎ；ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｕｍ
