第４１卷第２期 酿 酒 Ｖｏ１．４１．№．２ ２ ０ １ ４年３月 ＬＩＱＵＯＲ ＭＡＫＩＮＧ Ｍａ１７，２０１４ 文章编号：１００２—８１１０（２０１４）０２—００５０—０４ 葛根提取方式及葛根配制酒的研究 李小丽，郭黎媛，韩英，安丽娟，王庆亮 （山西杏花村汾酒厂股份有限公司技术中心，山西汾阳０３２２０５） 摘要：本试验对葛根中的葛根异黄酮的提取方法进行了研究，以葛根素为标准品对提取液中的葛根异黄酮含 量进行测定，测定结果表明：由超声辅助提取得到的葛根异黄酮含量高于冷浸提和热回流提取，为０．７３５ｍｇ／ｍＬ。 对６５％ｖｏｌ汾酒、６５％ｖｏｌ食用酒精、７０％ｖｏｌ食用酒精三种提取溶剂进行了试验，得到的葛根异黄酮含量分别为 ０．７３５ｍｇ／ｍＬ、０．７２９ｍｇ／ｍＬ、０．６７８ｍｇ／ｍＬ，６５％ｖｏｌ汾酒和６５％ｖｏｌ食用酒精提取效果相差不大，但用６５％ｖｏｌ汾酒 提取后配制的酒口感更加柔顺，故选择６５％ｖｏｌ汾酒为提取溶剂。将葛根提取液在４２％ｖｏｌ基酒中进行试验，酒体 清亮透明，绵软醇厚，舒顺适口、醇和，余味悠长，并用ＨＰＬＣ法测定了葛根配制酒中葛根素含量，为Ｏ．３ｍＬ／Ｌ。 关键词：葛根；提取；葛根异黄酮；ＨＰＬＣ 中图分类号＂ＴＳ２６２．８；ＴＳ２６１．４ 文献标识码：Ｂ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｐｕｅｒａｒｉａ Ｅｘｔｒａｃｔ Ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ Ｐｕｅｒａｒｉａ Ｌｉｑｕｅｕｒ ＬＩ Ｘｉａｏ－ｌｉ，ＧＵＯ Ｌｉ－ｙｕａｎ，ＨＡＮ Ｙｉｎｇ，ＡＮ Ｌｉ－ｊｕａｎ，ＷＡＮＧ Ｑｉｎｇ－ｌｉａｎｇ （Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｅｎｔｅｒ，Ｓｈａｎｘｉ Ｘｉｎｇｈｕａｃｕｎ Ｆｅｎｊｉｕ Ｄｉｓｔｉｌｌｅｒｙ Ｃｏ．Ｌｔｄ，Ｆｅｎｙａｎｇ，Ｓｈａｎｘｉ，０３２２０５，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ ｆｒｏｍ Ｐｕｅｒａｒｉａ ａｎｄ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔ ｗｉｔｈ ｐｕｅｒａｒｉｎ ａｓ ｓｔａｎｄａｒｄ，ｔｈｅ ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｈｔａｔ：ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｕｅｒａｒｉａ ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ ｗｉｔｈ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ０．７３５ｍｇ／ｍＬ， ｉｔ ｗａｓ ｈＪｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｃｏｌｄ ｓｏａｋ ａｎｄ ｈｅａｔ ｒｅｆｕｘ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｒｅｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ６５％ＶＯｌ Ｆｅｎ ｌｉｑｕｏｒ，６５％ｖｏｌ ａｌｃｏｈｏｌ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ．７０％ＶＯｌ ｏｆ ｌａｃｏｈｏｌ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ，ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｕｅｒａｒｉａ ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ ｗｅｒｅ ０．７３５ｍｇ／ｍＬ，０．７２９ｍｇ／ｍＬ，０．６７８ｍｇ／ｍＬ，ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ６５％ｖｏｌ Ｆｅｎ ｌｉｑｕｏｒ ａｎｄ ６５％ｖｏｌ ａｌｃｏｈｏｌ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ ｉｓ ｂａｓｉｃａｌｌｙ ｔｈｅ ＳａＢｌｅ，ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ６５％ｖｏｌ Ｆｅｎ ｌｉｑｕｏｒ ａｓ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ｔｏ ｍａｋｅ ｔｈｅ ｐｕｅｒａｒｉａ ｌｉｑｕｏｒ ｍｏｒｅ ｓｕｐｐｌｅ．Ｐｕｅｒａｒｉａ ｅｘｔｒａｃｔ Ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｉｎ ４２％ｖｏｌ ｗｉｎ，ｔｈｅ ｗｉｎｅ Ｗａｓ ｃｌｅａｒ ａｎｄ ｔｒｎａｓｐａｒｅｎｔ，ｓｏｆｔ ａｎｄ ｍｅＨｏｗ，ｐａｌａｔａｂｉｌｉｔｙ，ａｌｃｏｈｏｌ，ｌｏｎｇ ａｆｔｅｒｔａｓｔｅ，ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｕｅｒａｒｉｎ ｂｙ ＨＰＬＣ Ｗａｓ ０．３ｍＬ／Ｌ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｐｕｅｒａｒｉａ；ｅｘｔｒａｃｔ；ｐｕｅｒａｒｉａ ｉｓｏｆｔａｖｏｎｅｓ；ＨＰＬＣ 葛根（Ｒａｄｉｘ Ｐｕｅｒａｒｉａ），是豆科植物葛的块根，含 毒的小鼠具有一定的解酒预防效果，灌胃葛根提取 有葛根素、葛根木糖苷、大豆苷、大豆苷元等多种异 液的小鼠醉酒潜伏期延长，睡眠时间减少，醒酒时间 黄酮类物质，葛根素含量＞２．４％，味甘、辛、性平，既 缩短，并且葛根能降低小鼠对乙醇的吸收并增加血 是中药材又是营养丰富的食用原料ｆ１１，同时，也是一 液乙醇代谢速度，降低血乙醇浓度［２】。张建夫［３１等人对 种理想的绿色保健食品，被列入国家卫生部批准的 葛根与葛花的解酒功效进行了研究，试验结果表明， “既是食品又是药品的物品名单”。 葛根与葛花均有解酒的效果，但葛根解酒效果明显 葛根中含量丰富的葛根异黄酮具有解肌退热、 好于葛花。因此研究葛根中葛根异黄酮的提取方法 生津止渴、降低心肌耗氧量、增加冠脉脑血管流量、 并将其运用到配制酒的研发过程中是非常有必要 缓减心绞痛、抗心肌缺血、抗心律失常、抗氧化、降低 的，符合当前白酒行业对增强饮酒舒适度的需求，消 血压、降低血糖、调节血脂、解毒、增强机体免疫力等 费者对这款酒的渴望程度及其创造的经济价值也是 多种药理作用。此外，有研究报道葛根对急性酒精中 可想而知的。 收稿日期：２０１３—１２—１７ １材料与方法 作者简介：李小￣（１９８７－），女，山西人，硕士研究生，从事保健酒新品研发工 １．１试验原料与仪器 作，助理工程师。 试验原料：葛根（粉葛）、原度汾酒、９５％ｖｏｌ优级 第二期 李小丽，等：葛根提取方式及葛根配制酒的研究 ２０１４ 食用酒精、蒸馏水、葛根素标准品（大连美仑生物技 根素标准曲线。 术有限公司，纯度＞９８％），无水乙醇（色谱级）。 试验仪器：水浴锅、超声波提取机、小型粉碎机、 紫外分光光度计、电子天平、具塞三角瓶、玻璃棒、烧 杯、微量进样器、电子称、移液管、量筒、滤纸、漏斗、 １．２．４提取液中葛根异黄酮含量的测定 将提取液稀释合适的倍数后倒人比色皿中，于 ２５０ｎｍ处测定吸光值，代人标准曲线计算测定液中 的葛根异黄酮含量，并换算出提取中的葛根异黄酮 容量瓶 １．２试验方法 １．２．１原料的选择 试验所需的葛根为切片状，购于安国市祁澳中 药饮片有限公司（广西），葛根切片断面整齐，无霉变， 将葛根切片用粉碎机粉碎成Ｏ．５～ｌｃｍ左右的小方块 备用；提取溶剂为山西杏花村汾酒厂股份有限公司 生产的６５％ｖｏｌ汾酒，所选食用酒精为优级食用酒 精。 １．２．２提取方法 试验采用冷浸提、热回流提取、超声波辅助提取 这三种较常用的浸提方法对葛根中的葛根异黄酮进 行提取，以葛根素为标准品，通过测定提取液中的葛 根异黄酮含量选择提取效果较好的方法。 冷浸提：称取粉碎后的葛根１０ｇ，加人６５％ｖｏｌ汾 酒２００ｍＬ浸泡３～５ｄ，浸泡期间每天摇晃数次，使其 提取完全，提取完成后滤纸过滤，记录提取液体积， 测定其葛根异黄酮含量； 热回流提取 ：称取粉碎后的葛根１０ｇ，加人 ７０％ｖｏｌ食用酒精２００ｍＬ，于８０℃热回流提取１．５ｈ， 提取液冷却后过滤，记录滤液体积，测定其葛根异黄 酮含量；超声辅助提取：称取粉碎后的葛根１０ｇ三份 置于具塞三角瓶中，分别加入６５％ｖｏｌ汾酒、６５％ｖｏｌ 食用酒精、７０％ｖｏｌ食用酒精２００ｍｌ进行超声提取， 提取温度为６５％，提取时间为４０ｍｉｎ，超声频率为 ４０ＫＨｚ，提取完成待提取液冷却后过滤，分别记录滤 液体积，测定葛根异黄酮含量，选出提取效果较好的 溶剂。 １．２．３葛根素标准曲线的绘制 准确称取葛根素标准品５ｍｇ置于２５ｍＬ容量瓶 中，加入少量无水乙醇溶解后蒸馏水定容至刻度线 处，摇匀后用移液管分别吸取０ｍＬ、０．２ｍＬ、０．４ｍＬ、 ０．６ｍＬ、０．８ｍＬ、１．０ｍＬ分别置于６个１０ｍＬ容量瓶中， 各加入ｌｍＬ无水乙醇后用蒸馏水定容至１０ｍＬ，摇 匀，以第一管为对照，在２５０ｎｍ处测定吸光值Ｄ，以 葛根素含量为横坐标，吸光度值Ｄ为纵坐标绘制葛 含量，比较不同提取方式的提取效果。 １．２．５高效液相色谱法测定葛根素含量【５间 １．２．５．１色谱条件 分析柱：Ｃ１８色谱柱；柱温：３０￣Ｃ；检测波长： ２５０ｎｍ；进样体积２０ Ｌ；定量方式：峰面积；流动 相：甲醇：水＝２５：７５；流速：１ｍＬ／ｍｉｎ。 标准曲线的绘制：精密称取葛根素标准品５ｍｇ， 置于５０ｍＬ容量瓶中，用少量乙醇溶解并加水定容 至刻度，摇匀，作为标准母液置于冰箱中４￣Ｃ保存备 用（溶液每毫升相当于１００ ｇ葛根素）。精密吸取葛 根素储备液０．２ｍＬ、０．４ｍ Ｌ、０．６ｍ Ｌ、０．８ｍ Ｌ、１．０ｍ Ｌ、 １．５ｍＬ、２．０ｍＬ分别置于２５ｍＬ比色管中，用水定容至 刻度，混匀，样品过＜Ｏ．４５ ｍ的滤膜。 １．２．５．２葛根配制酒的制备 将葛根提取液以０．５‰、１．０‰、１．５‰、２．Ｏ‰的加 量加人４２％ｖｏｌ汾酒基酒中，混匀后对葛根配制酒进 行感官品评，确定葛根提取液的最佳加量，并利用高 效液相色谱法测定配制酒中的葛根素含量。 ２结果与分析 ２．１ 葛根素标准曲线 表１ 葛根素标准品吸光度值 葛根素含量／ｍｇ・ｍＬ－ ０ ０．００４ ０．００８ ０．０１２ ０．０１６ ０．０２０ 吸光值Ｄ ０ ０．２８１ ０．４７５ ０．７１ １ ０．９５３ １．１８７ 吕１．５ １．０ ０．５ Ｏ Ｏ．００５ ０．０１０ ０．０１５ ００２０ ０．０２５ 葛根异黄酮浓度／ｍｇ・ｍＬ－ 图１葛根素标准曲线 标准曲线方程为ｙ＝５８．４７９ｘ＋０．０１６４，ＲＥ＝０．９９８６， 线性关系良好。 ２．２提取液中葛根异黄酮含量的测定 冷浸提，热回流提取，超声辅助提取三种提取方 法得到的提取液按照１．２．４中的方法对其中的葛根 异黄酮含量进行测定，测定结果见表２。 第二期 表２不同提取方法葛根异黄酮测定结果 再良 酒 表３不同提取液在基酒中的试验 提取溶剂 品评 ２０１４ 以６５％ｖｏｌ汾酒为溶剂酒体无色或微带黄色，绵软醇厚，柔 顺适口，酒体协调完整，爽净、余味悠长 以６５％ｖｏ１酒精为溶剂酒体无色或微带黄色，醇和，柔顺适 口，酒体协调完整。 以７０％ｖｏｌ酒精为溶剂酒体无色或微带黄色，醇和，柔顺，酒 体协调较完整，余味短。 由表２测定结果可以看出，冷浸提效果最差，另 外两种方法中，６５％ｖｏｌ要比７０％ｖｏｌ提取效果好，而 显，因此，选择６５％ｖｏｌ超声提取方式为最佳提取方 法。 由表３品评结果可以看出，经过用不同溶剂提取 汾酒为溶剂的提取液口感最佳，所以，选择６５％ｖｏ１ 同酒精度的汾酒和食用酒精的提取效果差异不明 所得的提取液在４２％ｖｏｌ基酒中进行试验，以６５％ｖｏｌ汾酒为提取溶剂。 ２．４ ＨＰＬＣ法测定葛根素含量 ２．４．１葛根素标准品标准曲线的绘制 葛根素标准曲线方程为ｙ＝０．０４ｘ＋２．４４ｅ，Ｒ ＝０．９９８， 线性关系较好。葛根素标准品高效液相色谱图如下。 ２．３不同提取液在基酒中的试验 将超声波提取液按照１‰～５％。不同梯度的比例 加入酒液中，经项目组评酒员反复品评后，确定提取 液最佳添加量及最佳提取溶剂。 图２葛根素标准品ＨＰＬＣ图 ２．４．２提取液中葛根素含量测定结果 对６５％ｖｏｌ汾酒为基酒、超声辅助提取得到的提 取液经滤膜过滤后ＨＰＬＣ测定其中葛根素含量为 １９９．６ｍｇ／Ｌ，ＨＰＬＣ图如下。 分钟 图４ ４２％ｖｏｌ葛根配制酒中葛根素ＨＰＬＣ图
