益生元组合物及其应用[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 107981359 A(43)申请公布日 2018.05.04

(21)申请号 201711318933.5(22)申请日 2017.12.12

(71)申请人 河北三元食品有限公司

地址 050000 河北省石家庄市新乐市三元

路6号(72)发明人 李朝旭　张天博　杨凯　贾云虹　

薛江超　(74)专利代理机构 石家庄轻拓知识产权代理事

务所(普通合伙) 13128

代理人 张培元(51)Int.Cl.

A23L 33/125(2016.01)A23C 9/156(2006.01)A61K 31/702(2006.01)A61K 31/733(2006.01)

权利要求书1页 说明书8页 附图1页

A61K 31/715(2006.01)A61P 1/00(2006.01)A61P 37/04(2006.01)

(54)发明名称

益生元组合物及其应用(57)摘要

本发明公开了益生元组合物及其应用，该组合物包含低聚半乳糖(GOS)、低聚果糖(FOS)及异构化乳糖(LOS)，所述低聚半乳糖、低聚果糖、异构化乳糖的重量份数比为（5-10）：（0.5-1.5）：（0.5-1.5），其中所述的低聚果糖的聚合度范围在2-9之间。本发明的益生元组合物可应用于营养食品和药剂中，用于增强人体肠道菌群中有益于健康的微生物，同时抑制有害菌的生长，从而增强机体免疫力及机体的整体机能。

CN 107981359 ACN 107981359 A

权　利　要　求　书

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1.益生元组合物，该组合物包含低聚半乳糖、低聚果糖及异构化乳糖，其特征在于：所述低聚半乳糖、低聚果糖、异构化乳糖的重量份数比为（5-10）：（0.5-1.5）：（0.5-1.5），其中所述的低聚果糖的聚合度范围在2-9之间。

2.根据权利要求1所述的益生元组合物，其特征在于：所述低聚半乳糖、低聚果糖、异构化乳糖的重量份数比为6：（0.5-1.5）：（0.5-1.5）。

3.根据权利要求1所述的益生元组合物，其特征在于：所述低聚半乳糖、低聚果糖、异构化乳糖的重量份数比为6：1：1。

4.益生元奶粉，其特征在于：该奶粉包含权利要求1所述的益生元组合物。5.根据权利要求4所述的益生元奶粉，其特征在于：所述奶粉中包含1-10％ wt的益生元组合物。

6.根据权利要求4所述的益生元奶粉，其特征在于：所述奶粉中包含2-6.5％ wt的益生元组合物。

7.权利要求1所述益生元组合物的用途，其特征在于：所述益生元组合物用于优化肠道菌群结构、优化肠道中短链脂肪酸的组成及含量、提高肠道黏膜表面分泌型IgA的含量、提升血清中细胞因子IL-10和IL-17的含量，从而增强机体免疫力及综合机能。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述益生元组合物添加到婴幼儿配方食品、婴幼儿辅助食品、特殊医学用途配方食品中使用。

9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述益生元组合物添加到成人食品、饮品、药剂中使用。

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说　明　书益生元组合物及其应用

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技术领域

[0001]本发明涉及营养和健康相关技术领域，尤其涉及婴幼儿食品中的低聚糖营养组合物及相关技术。

背景技术

[0002]母乳是新生婴儿最理想的食品，它含有适当比例的蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素和矿物质等营养物质，易于被婴儿所消化和吸收，能满足它们生长发育的需要；此外，母乳中富含乳铁蛋白、双歧因子等免疫因子，可以预防婴儿发生肠道感染性疾病。其中，母乳低聚糖（Human milk oligosaccharides，HMOs）是母乳中仅次于乳糖和脂肪的第三大营养素，它不被人体的胃酸破坏，也不被消化酶分解，能直接达到大肠，刺激肠道中的有益菌群（双歧杆菌和乳杆菌）生长，间接抑制有害菌群生长，维持肠道微生态平衡。[0003]当母乳不足时，婴幼儿配方奶粉是母乳最好的替代品。它以牛乳或羊乳为基础，通过调整乳清蛋白/酪蛋白比例，添加必需脂肪酸亚油酸和亚麻酸，和强化维生素和矿物质，可以满足婴幼儿快速生长发育的需要。但由于牛乳中的低聚糖含量很低，人们结合对母乳低聚糖的认识，将现有的低聚糖添加到婴幼儿配方奶粉中，尽可能模拟母乳低聚糖的功能。[0004]婴儿刚出生时的肠道呈无菌状态，之后的一周内便有细菌的植入。新生婴儿特别是早产儿的肠道屏障功能尚不成熟，肠黏膜容易受到损害使婴儿受到感染。渗透性的增加导致肠道菌群失衡，也容易引起婴儿对食物的过敏反应。因此及早建全婴儿的肠道屏障功能至关重要。

[0005]随着新型分析技术的发展，我们对于母乳低聚糖的结构愈加了解。此外，人们研制出的新制备方法使得我们能够纯化低聚糖，以此为基础我们才能识别它们的生物作用。研究发现人类母乳中的HMOS由3～14个单糖组成，为直链或支链结构，目前已发现超过200种结构，均在核心结构的基础上变换而来。如图1所示，母乳低聚糖的5种基本单体分别为D-葡萄糖(Glc)、D-半乳糖(Gal)、N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、L-岩藻糖(Fuc)和唾液酸(N-乙酰神经氨酸，Neu5AC)。通常核心结构的还原端为乳糖基［Gal(β1-4) Glc］，通过β1-3键与GlcNAc连接(I型)或通过β1-4键与GlcNAc连接(Ⅱ型)至15个N-乙酰氨基乳糖，核心结构进一步通过α2-3或α2-6键与Neu5Ac残基连接和(或)通过α1-2或α1-3或α1-4键与Fuc残基连接。[0006]研究表明，人初乳中HMOs含量为22～23 g/L，成熟乳中为12～13 g/L；早产儿母亲的乳汁中HMOs比足月儿的浓度高。不同来源的母乳，低聚糖种类和含量也有很大差异。目前已经鉴定出人母乳中有200多种低聚糖，而牛乳中有50多种低聚糖，且含量很少，见下表。[0007]成熟母乳和牛乳中宏量营养素与HMOs的含量约值营养成分人乳牛乳蛋白质/（g/L）832脂肪/（g/L）4137乳糖/（g/L）70 48低聚糖/（g/L）5～150.05

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确定的低聚糖种类100＋ ～40岩藻基化的比例/%50～80～1唾液酸化的比例/%10～20～70

然而，关于低聚糖的结构同它们的生物学功能之间的关系，还有许多问题尚未得到解决。未来很重要的一点是，我们要了解母乳低聚糖中哪些结构成分是它们发挥作用的关键因素；这将作为从动物母乳或其他来源选择低聚糖的科学基础。但由于母乳低聚糖的复杂性，不可能找到与母乳低聚糖完全相同的天然低聚糖。因此，必须分析现有的低聚糖以识别那些虽然结构同母乳低聚糖有差异，但功能与其接近的低聚糖。[0008]动物母乳来源的低聚糖可以作为生物功能接近母乳低聚糖分子的可以接受和可用来源的首选。此外，还应考虑非乳来源的低聚糖。低聚半乳糖（GOS，以乳糖为底物通过酶合成工艺制得）、低聚果糖和多聚果糖（来源于植物）、异构化乳糖等是常见的非乳来源益生元，在成年人和婴儿中已经证明了其益生元作用。GOS的结构是基于乳糖的，同母乳低聚糖的核心分子有相似之处，而在母乳低聚糖中不存在低聚果糖和多聚果糖。GB 14880中规定，在婴幼儿配方奶粉中允许使用的益生元有低聚半乳糖、低聚果糖、多聚果糖、棉籽糖、聚葡萄糖等。[0009]低聚半乳糖( Galactooligosaccharides，GOS)是以乳糖为原料，通过β－半乳糖苷酶的转糖苷作用制得低聚β-半乳糖，所以低聚半乳糖的分子结构一般是在半乳糖或葡萄糖分子上连接1-7个半乳糖基，即Gal－(Gal) n－Glc/Gal(n为0-6)。商业化生产的低聚半乳糖通常是葡萄糖、乳糖、乳糖、半乳二糖、半乳三聚糖、半乳四聚糖和半乳五聚糖的混合物。影响形成的低聚糖结构和比例的主要因素依赖于生产使用的β－半乳糖苷酶的来源和生产工艺。Carlos Sierra等评估在健康婴儿的生命第一年内喂养含有低聚半乳糖的婴儿配方食品(0.44g/dl GOS)以及有GOS的较大婴儿配方食品(0.50g/dl GOS)是否对肠道菌群有益生元作用，结果发现在喂养添加低聚半乳糖的配方奶粉中婴儿GOS组表现出较低的粪便pH值(P=0.019)，分泌的免疫球蛋白A有较低的减少趋势(P=0.078)，丁酸浓度较低(P=0.040)和双歧杆菌数量增加(P=0.010)。可以看出喂养添加GOS的婴儿配方食品具有明确的益生元作用。

[0010]低聚果糖是指果糖基经β-2，1糖苷键连接而成的聚合度为2～9的功能性低聚糖，属于食品配料。按结构，低聚果糖可分为蔗-果型和果-果型两种。工业上生产低聚果糖有两种方法：以菊粉为原料的酶水解法和以蔗糖为原料的酶转化法。前者所得低聚果糖聚合度范围较大（DP2-DP9），属果-果型；后者所得低聚果糖聚合度范围较小（DP3-DP6），属蔗-果型。低聚果糖是一种益生元，优良的理化特性和生理功效使其得到了广泛的应用。赵红玲等通过体外试验研究发现，在对双歧杆菌和大肠杆菌进行分别培养时，培养基中添加2%的雪莲果低聚果糖可促进双歧杆菌的增殖，抑制大肠杆菌的生长。张泽生等通过试验研究发现，无论是菊粉还是蔗糖来源的低聚果糖均能促进双歧杆菌的体外增殖，但菊粉来源的低聚果糖对双歧杆菌的体外促生长作用优于蔗糖来源的低聚果糖。Damien Paineau等研究证实，补充低聚果糖可提高婴儿粪便中双歧杆菌的数量。粪便中的双歧杆菌来源于肠道，粪便中双歧杆菌数量的增加说明低聚果糖可促进肠道中双歧杆菌的增殖。Sirimu Celestin 等研究发现，在羊乳或牛乳中添加低聚果糖可促进发酵过程中双歧杆菌等益生菌的增殖。[0011]异构化乳糖是一种新型功能性双糖，GB2760中规定可以在婴幼儿奶粉中使用。异

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构化乳糖是双歧杆菌生长的糖源，它在小肠内不被分解，移到大肠内可被双歧杆菌利用，使双歧杆菌增长占优势、抑制腐败细菌及病原菌的生长，对改变肠内菌群、保持肠道正常功能起重要作用，有足够证据表明它在人类肠道中有益生元的作用，在GB8816-88中也提到它是一种双歧杆菌的增殖因子。

[0012]益生元不仅选择性刺激大肠中微生物的生长，还通过发酵影响肠功能的很多方面。益生元分解过程中除了产生短链脂肪酸之外，还不可避免的要产生一些气体，这是食用益生元的主要障碍。DAVID C. HERNOT等的研究表明，中短链低聚糖产生较多数量的气体和短链脂肪酸意味着发酵速度快，达到最高生产速度需要的时间更早；长链低聚糖产生较少数量的气体和短链脂肪酸意味着发酵速度慢，达到最高生产速度需要的时间更长。此外，将短链低聚糖和长链低聚糖相混合，降低了短链低聚糖的发酵速度和发酵能力。为此，在婴幼儿配方奶粉中经常使用短链低聚糖和长链低聚糖的混合物。

发明内容

[0013]本发明要解决的技术问题是提供益生元组合物及益生元奶粉，同时提供并验证其用途。

[0014]为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下。[0015]益生元组合物，该组合物包含低聚半乳糖(GOS)、低聚果糖(FOS)及异构化乳糖(LOS)，所述低聚半乳糖（纯品）、低聚果糖（纯品）、异构化乳糖（纯品）的净含量重量份数比为（5-10）：（0.5-1.5）：（0.5-1.5），其中所述的低聚果糖的聚合度范围在2-9之间。[0016]作为本发明的一种优选技术方案，所述低聚半乳糖、低聚果糖、异构化乳糖的重量份数比为6：（0.5-1.5）：（0.5-1.5）。

[0017]作为本发明的一种优选技术方案，所述低聚半乳糖、低聚果糖、异构化乳糖的重量份数比为6：1：1。

[0018]益生元奶粉，该奶粉包含权利要求1所述的益生元组合物。[0019]作为本发明的一种优选技术方案，所述奶粉中包含1-10％ wt的益生元组合物。[0020]作为本发明的一种优选技术方案，所述奶粉中包含2-6.5％ wt的益生元组合物。[0021]上述益生元组合物用于优化肠道菌群结构、优化肠道中短链脂肪酸的组成及含量、提高肠道黏膜表面分泌型IgA（sIgA）的含量、提升血清中细胞因子IL-10和IL-17的含量，从而增强机体免疫力及综合机能。

[0022]上述益生元组合物添加到婴幼儿配方食品、婴幼儿辅助食品、特殊医学用途配方食品中使用。

[0023]上述益生元组合物添加到成人食品、饮品、药剂中使用。[0024]采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明提供了低聚糖的营养组合物，它包含低聚半乳糖(GOS)、低聚果糖(FOS)和异构化乳糖(LOS)三种益生元，它们在上消化道中不会被消化，在大肠中能够被肠道中的微生物所利用。它们可应用于营养食品和药剂中，用于增强人体肠道菌群中有益于健康的微生物，同时抑制有害菌的生长，从而增强机体免疫力及机体的整体机能。本发明提供的益生元碳水化合物用于全喂养婴儿配方粉或部分喂养婴儿奶粉时，对婴幼儿的健康和成长具有良好的助益作用，当用于含有炎性肠病(IBD)或肠易激综合征(IBS)等肠道问题的成人摄入时，也具有促进健康的效果。

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尤其是，本发明对不同低聚糖之间的协调比例进行了大量的分析和试验研究工

作，摸索出了全新的配比方案，不仅突破了国外现有技术资料的配比界限及专利封锁，尤其是取得了非常良好的实用效果。经试验验证，本发明配方下的益生元组合物，能够有效的优化肠道菌群结构、优化肠道中短链脂肪酸的组成及含量、提高肠道黏膜表面分泌型IgA（sIgA）的含量、提升血清中细胞因子IL-10和IL-17的含量，从而增强机体免疫力及综合机能，具有十分突出的实用效果，不仅在国内具有开创性，在国际上也具有重要的学术及使用价值和意义。详细的试验方法及结果数据可参见下文的实施例。附图说明

[0026]图1是实施例2中16S/18S/ITS rDNA扩增子测序的实验流程示意图。[0027]图2是实施例2中16sRNA检测方法测得的基于OUT的heatmap图。

具体实施方式

[0028]以下实施例详细说明了本发明。本发明所使用的各种原料及各项设备均为常规市售产品，均能够通过市场购买直接获得。其中，低聚半乳糖(57%)，来源于云浮市新金山生物科技股份有限公司或量子高科（中国）生物股份有限公司，低聚果糖为BENEO Qrafti P95；异构化乳糖（50%）为森永乳业株式会社或法国Solactis公司。[0029]实施例1、实验目的及材料。[0030]实验目的：比较低聚半乳糖、低聚果糖和异构化乳糖的益生元组合以不同添加量喂养小鼠时的益生元效果，以不含益生元的婴儿配方奶粉作为对照，并与作母乳比较。[0031]实验材料：40只3周大的清洁级雄性昆明小鼠（购于河北医大实验动物中心），按体重随机分为5组，如下所示。实验为期3周。每只小鼠每天灌喂2.8mL奶粉冲调液或母乳。组别内容阴性对照不添加益生元的奶粉（以下省略为奶粉）益生元1组奶粉+1.85% GOS+0.3% FOS+0.5% LOS益生元2组奶粉+3.08% GOS+0.5% FOS+0.5% LOS益生元3组奶粉+ 4.85% GOS+0.8% FOS+0.8% LOS母乳对照母乳[0032]其中，不添加益生元的婴儿配方奶粉由在河北三元食品有限公司中试制得。[0033]实施例2、肠道微生物检测。[0034]每个实验周期结束前，清晨经肛门取新鲜粪便样品，进行肠道菌群检测。本方法的检测原理如下：

16S/18S/ITS rDNA，序列包括保守区域和高变区域，其中保守区在微生物菌种间差异不大，高变区具有属或种的特异性，随亲缘关系不同而有一定的差异。因此，16S/18S/ITSrDNA可以做作为揭示生物物种的特征核酸序列，被认为是适于微生物系统发育和分类鉴定的指标。如今，16S/18S/ITS rDNA扩增子测序技术已成为研究环境样本中微生物群落组成结构的重要手段。[0035]16S rDNA扩增子测序，是通过特异性引物扩增样本中原核生物16S rDNA的可变区，构建高通量测序文库并对16S rDNA可变区序列进行分析，从而鉴定环境中原核微生物

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的组成与丰度的方法。GENEWIZ自主研发的引物体系能有效扩增出16S rDNA的多个可变区（V3，V4），能够准确鉴定出包含古生菌在内的多个物种。18S/ITS rDNA扩增子测序，是通过特异性引物扩增样本中真核生物18S/ITS rDNA的可变区，构建高通量测序文库并对18S/ITS rDNA可变区序列进行分析，从而鉴定环境中真核微生物的组成与丰度的方法。Illumina MiSeq测序平台由于在测序深度、通量、运行周期、测序准确性及价格方面的优势，广泛应用于16S/18S/ITS rDNA扩增子测序；近年来，Paired-end Reads拼接方法使MiSeq测序平台的读长达到了600bp，从而使分析准确性得到进一步提高。[0036]16S/18S/ITS rDNA扩增子测序的实验流程包括样本基因组DNA的提取与质检，16S/18S/ITS rDNA可变区扩增与测序文库构建，高通量测序等多个步骤。其中每一个环节都会对数据质量和数量产生影响，而数据质量又会直接影响后续信息分析的结果，为了保证源头数据的准确性与可靠性，我们对每一步实验过程都进行严格质控，检测合格后，按照目标数据量调整文库体积，将多个文库混合后进行Illumina MiSeq测序。具体实验流程参见附图1。

[0037]附图2为16sRNA检测方法测得的基于OUT的heatmap图。图中，A为实验开始前的对照，D1、D2、D3、D4和D5分别为实验三周时动物粪便中微生物的测定情况。[0038]从图中可以看出，益生元奶粉组中的双歧杆菌高于阴性对照组和母乳对照组，因此，本实验中采用益生元组合对于双歧杆菌具有较强的增殖作用。[0039]实施例3、短链脂肪酸检测。[0040]粪便样品的制备：为了测定SCFA，将1g样品在冰水中融化，10X稀释于MilliQ中，并使用stomacher(IUL Instruments，Barcelona，西班牙) 均质化10分钟。将350μL均质粪便与200μl5％(v/v)甲酸，100μL1.25g/L 2-乙基丁酸(Sigma-Aldrich，Zwijindrecht，荷兰) 和350μl MilliQ 混合。将样品在14,000rpm 离心5分钟以除去大的颗粒并将上清液存储在-20℃。为了FISH分析和乳酸测量，将样品在冰水中融化，10X(w/v) 稀释于磷酸盐缓冲盐水，pH7.4(PBS)中并使用stomacher 均质化10 分钟。将均质粪便存储于-20℃。[0041]短链脂肪酸分析：通过配备有火焰电离检测仪的Marian 3800 气相色谱仪(GC) (Varian Inc.，Walnut Creek，U.S.A.)定量测定短链脂肪酸(SCFA)，甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸。将0.5μL样品在80℃注射于柱子(Stabilwax，5X0.53nm，膜厚度1.00μm，Restek Co.，U.S.A.)中，使用氦作为载气(3.0psi)。注射样品后，以16℃/分钟的速度将烘箱加热至160℃，接着以20℃/分钟的速度加热至220℃并最终维持于220℃的温度1.5分钟。注射器和检测仪的温度是200℃。将2-乙基丁酸用作内标。

[0042]下表中的数据分别为实验第三周结束时小鼠粪便中短链脂肪酸的测定情况。我们使用采用SPSS18.0的One Way ANOVA程序分析数据，对数据进行显著性差异的分析，P<0.05代表显著性差异。

[0043]实验结束时各实验组小鼠粪便中短链脂肪酸的变化情况（单位：μg/g）组别短链脂肪酸总和阴性对照2218.82±9.95a 益生元1组2239.36±9.31a益生元2组2428.90±5.15c益生元3组2279.62±8.12b

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母乳对照2496.28±9.48d

注：同一列中，不同字母表示存在显著性差异（P<0.05）从表中可以看出，益生元2和3组小鼠粪便中的短链脂肪酸显著高于阴性对照组，益生元1组小鼠粪便中短链脂肪酸虽然与阴性对照组没有显著性差异，但高于阴性对照组。实验结束时益生元2组小鼠粪便中短链脂肪酸总和显著增加，仅次于母乳对照组小鼠粪便中的短链脂肪酸含量。[0044]实施例4、ELISA检测乳酸。[0045]粪便样品的制备：将样品在冰水中融化，10X(w/v) 稀释于磷酸盐缓冲盐水，pH7.4(PBS)中并使用stomacher 均质化10 分钟。将均质粪便存储于-20℃。[0046]设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。每孔加入酶标试剂100μL，空白孔除外。用封板膜封板后置37℃温育60分钟。将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。每孔加终止液50μL，终止反应（此时蓝色立转黄色）。以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。[0047]检测结果见下表。

[0048]实验前后各实验组小鼠粪便中乳酸的变化情况（单位：mmol/mL）

注：同一列中，不同字母表示存在显著性差异（P<0.05）

从表中可以看出，益生元2和3组小鼠粪便中乳酸显著高于阴性对照组，益生元1组小鼠粪便中乳酸虽然与阴性对照组没有显著性差异，但高于阴性对照组。在益生元奶粉动物实验过程中，随着时间的延长小鼠粪便中乳酸的含量不断增加。其中，益生元2组小鼠粪便中的乳酸含量最高。

[0049]

实施例5、ELISA检测SIgA。[0050]采用实施例4的检测方法。检测结果见下表。[0051]实验前后各实验组小鼠粪便中sIgA的变化情况（单位：μg/mL）

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注：同一列中，不同字母表示存在显著性差异（P<0.05）从表中可以看出，在益生元奶粉动物实验结束时，各益生元实验组小鼠粪便中sIgA，与阴性对照组相比，有显著性差异。随着益生元添加量的增加，小鼠粪便中sIgA的含量也呈不断增加的趋势。这表明本研究所采用的益生元组合能增加小鼠粪便中sIgA，对黏膜免疫有积极作用。

[0052]实施例6、ELISA检测IL-10。[0053]现在已知，GOS可显著增加有益菌，尤其是双歧杆菌的数量。GOS与免疫应答呈正性相关，即NK细胞活性及细胞吞噬活性增强，PBMCs分泌的抗炎因子IL-10分泌增加，致炎因子IL-6、IL-1β及TNF-α分泌减少。因此，使用GOS作为膳食调节可帮助增强胃肠道及免疫系统功能。

[0054]采用实施例4的检测方法。检测结果见下表。[0055]各实验组小鼠血清中的IL-10（单位：pg/mL）组别IL-10阴性对照257.51±36.85a益生元1组309.59±33.91b益生元2组338.84±33.99bc益生元3组357.50±35.50c母乳对照376.01±36.58c

注：同一列中，不同字母表示存在显著性差异（P<0.05）从表中可以看出，各益生元实验组与阴性对照组相比，有显著性差异。随着益生元添加量的增加，IL-10的含量增加，益生元3组中的IL-10数量略低于母乳组中IL-10数量。在本研究中，益生元导致IL-10分泌增加，与上述研究结果相一致。[0056]实施例7、ELISA法测定IL-17。

[0057]IL-17是CD4+T细胞亚群Th17分泌的细胞因子。Th17的发育、扩增及分泌IL-17主要受TGF-β、IL-6、IL-15、IL-23等细胞因子的调控。IL-17调节前炎性因子、趋化因子等的产生及分泌，在白细胞的迁移、破骨细胞的活化和骨质的吸收等方面发挥重要作用。研究证实，IL-17在自身免疫性疾病的发生、发展中也具有一定的影响和作用。[0058]采用实施例4的检测方法。检测结果见下表。[0059]各实验组小鼠血清中的IL-17（单位：pg/mL）组别IL-17阴性对照26.07±6.66a

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益生元1组35.67±6.61b益生元2组35.92±4.93b益生元3组36.72±4.14b母乳对照29.21±3.74a

注：同一列中，不同字母表示存在显著性差异（P<0.05）从表中可以看出，三个益生元组中IL-17的含量与阴性对照组和母乳对照组有显著性差异。我们可以看到，本实验中使用的益生元组合导致IL-17分泌增加，在免疫调节中发挥提升和助益效用。

[0060]上述描述仅作为本发明可实施的技术方案提出，不作为对其技术方案本身的单一限制条件。

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CN 107981359 A

说　明　书　附　图

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图 1

图 2

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