医学影像与检验 至 ２０１１年１Ｏ月 第２４卷 第１０期 象 医学信息 病理技术在先天性巨结肠诊断中的研究应用进展 方帅帅 【摘要】先天性巨结肠，是儿童较为常见的一种疾病，其主要病理表现为结肠远端的神经节细胞的完全缺乏，病变肠断持续的痉挛狭窄，造成了病变段 以上的肠管出现了代偿性的扩张，肠壁增厚，进而形成巨结肠。患者多出现有部分性或者完全性的结肠肠梗阻。采用病理技术对先天性巨结肠进行诊断。 主要是为了准确地将神经节细胞分辨出来，进而协助医生对巨结肠进行判断。本文从常规的病理染色、乙酰胆碱酯酶染色、免疫组织化学染色等，综述病 理技术在先天性巨结肠诊断中的应用价值。 【关键词】病理技术；先天性巨结肠；辅助诊断 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｈｉｒｓｃｈｓｐｍｎｇ￣ｄｉｓｅａｓｅ ｉｓ ｍｏｒｅ ＣＯｒ￣＂ｎｏｎ ａ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｃｈｉｌｄｒｅｎ，ｔｈｅ ｍａｉｎ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ ｏｆｔｈｅ ｄｉｓｔａｌ ｃｏｌｏｎ，ａ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｌａｃｋ ｏｆ ｇａｎｇｌｉｏｎ ｅｅｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅｓｉｏｎ ｈｅａｒｔｂｒｏｋｅｎ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｓｐａｓｍ ｎａｒｒｏｗ，ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｉｎ ｌｅｓｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂｏｗｅｌ ｓｅｇｍｅｎｔ ａｐｐｅａｒｅｄ ｉｎ ｍｏｒｅ ｈａｎ ｃｏｍｐｅｎｓａｔｔｏｒｙ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ，ｗａｌｌ ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ。ａｎｄ ｔｈｕｓ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｉａｎｔ ｃｏｌｏｎ．Ｏｆｔｅｎ ｅｅｎ ｉｓｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐａｒｔｉａｌ ｏｒ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｏｂｓｔｕｃｔｒｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｌｏｎ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｈｉｒｓｃｈｓｐｍｎｇ￣ｄｉｓ． ｅａｓｅ，ｍａｉｎｌｙ ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ａｃｃｕｒａｔｅｌｙ ｔｅⅡｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｇａｎｇｌｉｏｎ ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ ｔｈｕｓ ｈｅｌｐ ｄｏｃｔｏｒｓ ｊｕｄｇｅ ｔｈｅ ｇｉａｎｔ ｃｏｌｏｎ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ，ｔｈｅ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ。 ｄ＿ｃｅｔｙｌｃｈ０ｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ，ｉｍｒｎｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ，ｅｔｅ．，ｒｅｖｉｅｗｅｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｈｉｓｒｃｈｓｐｒｕｎｇ￣ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ． 【Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ】Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；Ｈｉｓｒｃｈｓｐｒｕｎｇ￥ｄｉｓｅａｓｅ；Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ 【中图分类号】Ｒ４４６ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１００６—１９５９（２０１１）１０～０３３９一Ｏ１ 先天性巨结肠，是儿童较为常见的一种疾病，其主要病理表现为结肠 进行定量分析。 远端的神经节细胞的完全缺乏，病变肠断持续的痉挛狭窄，造成了病变段 ３．２．２蛋白基因产物９．５：蛋白基因产物９．５，是一种泛素肽羧基末端 以上的肠管出现了代偿性的扩张，肠壁增厚…，进而形成巨结肠。患者多 水解酶，其在细胞水解过程中可用于调节细胞的进程。主要表达在神经元 出现有部分性或者完全性的结肠肠梗阻。采用病理技术对先天性巨结肠 分化的多个阶段，并在中枢神经系统、外周神经系统等多个水平的细胞中 进行诊断，主要是为了准确地将神经节细胞分辨出来，进而协助医生对巨 均可发现。其主要可见有神经丛中，分布有深褐色的神经节细胞，并在神 结肠进行判断。本文从常规的病理染色、乙酰胆碱酯酶染色、免疫组织化 经胶质中不表达。有较高的特异性。但是，其不能够用于定量分析。 学染色等，综述病理技术在先天性巨结肠诊断中的应用价值。 ３．２．３组织蛋白酶：组织蛋白酶为天冬氨酸酶，其为溶酶体酸性蛋白 １常规病理染色 酶，主要在细胞内蛋白质的分解代谢中起作用，可用于催化各种神经肽的 此方法是采用苏木素一伊红进行染色，其能够明显观察到肠壁粘膜下 降解。一般在脑组织神经元、神经节细胞中，含量较为丰富，并主要存在在 层是否存在有神经节细胞，并观察神经纤维的增生情况＿２ Ｊ。如果经过染色 神经胶质细胞和神经原中，神经纤维中不可见。其染色的深浅，与细胞的 后，无神经节细胞，则可判断为先天性巨结肠。一般临床诊断需要连续进 生熟度有较大的关系，因此不但可用于巨结肠的诊断，还可用于判断患者 行４０张切片 Ｊ，方法较为简单。但是，由于采用此染色方法对不成熟的神 的预后。但是，此方法临床检查所需时间较长。 经节细胞诊断不足，而儿童的神经细胞也恰在发育期，因此需要医生对神 ３．３神经因子类标记物：神经细胞粘附分子是在神经突触和神经元 经节细胞的情况进行准确的判断，防止误诊。 见的粘附中出现的。一般在神经细胞上的表达树立和所含唾液酸的量，能 ２乙酰胆碱酯酶染色 够有效调节神经细胞膜之间的接触，并间接影响突触和靶细胞、神经通路 有研究表明，在先天性巨结肠患者中，乙酰胆碱酯酶的值相比于健康 之间的联系和传导。一般巨结肠患者中，缺乏神经细胞粘附分子阳性的神 儿童要明显升高，通过病理染色，可见神经纤维的异常增生，进而能够判断 经接头。 患者是否出现有先天性巨结肠。其染色是假较短，因此可快速诊断。但 ４小结 是，乙酰胆碱酯酶染色存在有较多的不足，首先，乙酰胆碱酯酶特异性较 采用病理技术对神经节细胞及其标记物进行染色，以诊断神经节细胞 差，其可同时存在于胆碱能神经元、非胆碱能神经元【４ Ｊ，因此临床诊断可见 的缺失情况，是目前较为常用的技术，其检查方法多样，检查指标多样，除 假阴性。其次，乙酰胆碱酯酶染色需为冰冻切片，在现代的手术方法中并 本文中叙述的几项外，还可包括神经胶质细胞源性神经营养因子、Ｈｕ蛋白 不适用，因此容易出现误诊。 等。随着临床科技的发展，巨结肠的诊断也逐渐发展。目前除对神经节细 ３免疫组织化学染色 胞的缺失情况进行诊断，还可使用Ｃａｊｌａ细胞、基因诊断等，结合多种临床技 免疫组织化学染色，是临床较为常见的方法，其标记物较多，可为蛋白 术，为患者进行快速准确的诊断。 类标记物（外周蛋白、Ｓ一１００蛋白、突触素等）、蛋白酶类标记物（神经元特 参考文献 异性烯醇酶、蛋白基因产物９．５、组织蛋白酶等）、神经因子类标记物（神经 ［１］Ｄａ—Ｓｉｌｖｅｉｒａ，ＡＢ，ｄｅ—Ａｒａｕｊｏ，ＦＦ，Ｆｒｅｉｔａｓ，ＭＡ ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ 细胞粘附分子等）。 ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ａｎｄ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｘｐ３（＋）ｃｅｉｌｓ ｉｎ ｃｈａｇａｓｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ３．１蛋白类标记物 ａｎｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ｍｅｇａｃｏｌｏｎ．［Ｊ］．Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００９，７０（１）：２７１１ ３．１．１外周蛋白：外周蛋白是参与构成细胞骨架的主要蛋白，为ⅡＩ型 —２７１９． 中间丝蛋白 Ｊ，其在周围神经元较多，并可部分存在于中枢神经系统。因 ［２］ Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ，ＳＣ，Ｃｏｎｌｏｎ，Ｓ，Ｌｅｅｎ，Ｅ ｅｔ ａ１．Ｃｏｌｌａｇｅｎｏｕｓ ｃｏｌｉｔｉｓ ａｓ ａ ｐｏｓｓｉｂｌｅ 此，在临床检查中，其肠神经元的特异性较高，其可识别出成熟与未成熟的 ｃａｕｓｅ ｏｆ ｔｏｘｉｃ ｍｅｇａｃｏｌｏｎ．［Ｊ］．Ｉｉｒｓｈ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ，２００９ｔ 神经元，甚至可观察到神经节细胞的浓度。 １７８（１）：１９３３—１９３９． ３．１．２ Ｓ一１００蛋白：Ｓ—１００蛋白，是一种神经胶质细胞的特异性蛋 ［３］ 张明杰，刘立炜．先天性巨结肠的病理一Ｘ线特征［Ｊ］．现代临床医 白，其能够存在于神经纤维中，在临床检查时，可作为肠道的神经丛的胶质 学生物工程学杂志。２００３，９（１）：２５—２８． 细胞及神经纤维等标记物。其主要特点是在染色后出现有细胞状的阴影 【４］ 罗洪，孔庆云，王瑛瑚等．直肠黏膜活检病理检查对先天性巨结肠的 空白。临床检查时可与其他方法连用，敏感度和特异性较高。 诊断评价［Ｊ］．中华消化内镜杂志，２００３，２０（１）：８． ３．１．３突触素：突触素是突触表面的特有蛋白，可在周围神经系统的 ［５］Ｅｓｐｉｎ—Ｂａｓａｎｙ，Ｅ，Ｖａｌｌｉｒｂｅｒａ—Ｖａｉｌｓ，Ｆ，Ｌｏｐｅｚ—Ｃａｒｌｏ，Ｍ ｅｔ ａ１．Ｍｕｈｉｍｅ— 神经突触终末中发现。一般在低倍颈下可见到黄褐色的小团，在高倍镜下 ｄｉａ ａｒｔｉｃｌｅ．Ｌａｐａｒｏｓｃｏｐｉｃ—ａｓｓｉｓｔｅｄ ｒｅｃｔｏｓｉｇｍｏｉｄｅｃｔｏｍｙ ｗｉｔｈ ｉｌｅａｌ ｌｏｏｐ ｉｎ— 为黄褐色的神经节细胞胞浆，可见细胞核。在有神经细胞缺失的巨结肠 ｔｅｒｐｏｓｉｔｉｏｎ．Ｓｕ ｃａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈａｇａｓｉｅ ｍｅｇａｃｏｌｏｎ．［Ｊ］．Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ 中，不会出现突触素表达现象。 ｔｈｅ Ｃｏｌｏｎ ａｎｄ Ｒｅｃｔｕｍ，２００８，５１（９）：１６３５—１６４１． ３．２蛋白酶类标记物 ［６］ Ａｒａｋｉ Ｔ，Ｍｉｋｉ Ｃ，Ｙｏｓｈｉｙａｍａ Ｓ ｅｔ ａ１．Ｔｏｔｌａ ｐｍｃｔｏｃｏｌｅｃｔｏｍｙ ａｎｄ ｉｌｅａｌ ｊ— ３．２．１神经元特异性烯醇酶：神经元特异性烯醇酶是一种糖酵解酶， ｐｏｕｃｈ ａｎａｌ ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ ｆｏｒ ｃｈａｇａｓｉｅ ｍｅｇａｃａｌｏｎ ｗｉｔｈ ｃａ１０ｍａ：ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ａ 其作为神经元发育成熟的标记，能够很好地辅助诊断巨结肠。当被标记的 ｃａｓｅ．［Ｊ］．Ｓｕｌｔｒｙ ｔｏｄａｙ，２００６，３６（３）：３６２１—３６２８． 抗神经元特异性烯醇酶抗体与标本中神经元特异性烯醇酶结合后，即可显 示出神经组织 Ｊ。在病变组织中，一般可见到不同程度的神经元特异性烯 作者单位：３１０００９浙江杭州市第三人民医院病理科 醇酶阳性的神经纤维增生，但无细胞出现。此方法特异性较高，但不能够 培养基颜色，如有少量的碱性标本和一些耐药菌株也可致使ｐＨ值上升导 ［２］ 尹跃平．性传播疾病实验室诊断指南［Ｍ］．上海；上海科学技术出版 致假阳性。另外，本实验所用的试剂还有菌落计数的功能，但是个人认为 社２００７：９９—１００ 宫颈拭子没有准确地量化标准，菌落计数形同虚设，这一方面还有待改进。 ［３］ 周庭银，倪语星，张秀珍．临床微生物诊断与图解［Ｍ］．第２版，上海； 参考文献 上海科学技术出版社，２００７：２８９ ［１］ 叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程［Ｍ］第３版，南京 东南出版社。２００６：８８６—８８７ 作者单位：２０１４００上海市奉贤区中医医院检验科 ．－——３３９—－——
