２０１５年１０月 基础医学与临床 Ｂａｓｉｃ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１５ Ｖｏ１．３５ Ｎｏ．１０ 第３５卷第１０期 文章编号：１００１－６３２５（２０１５）１０—１ ３５１—０７ 研究论文 雌激素对不同年龄组帕金森病大鼠的影响及其机制 眭晨燕，李学忠 ，周小平，陈晓鹏 （江苏大学附属人民医院神经内科，江苏镇江２１２０００） 摘要：目的探讨雌激素（Ｅ２）对鱼藤酮诱导的不同年龄组帕金森病（ＰＤ）大鼠模型的影响及其机制。方法将２４ 月龄ＳＤ大鼠（高龄组）和ｌ２周龄ＳＤ大鼠（低龄组）分别分为对照组（０．９％氯化钠溶液）、鱼藤酮处理组（鱼藤酮 ２ ｍｓ／ｋｇ）、雌激素治疗组（鱼藤酮２ ｍｓ／ｋｇ和Ｅ２ １ ｍｓ／ｋｇ）和他莫昔芬处理组（鱼藤酮２ ｍｓ／ｋｇ、Ｅ２ １ ｍｓ／ｋｇ和他莫 昔芬１ ｍｓ／ｋｇ），用行为学测试观察大鼠运动功能改变，免疫组织化学法及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＴＨ及ＬＣ一３表达，高效 液相色谱一电化学检测仪（ＨＰＬＣ—ＥＣＤ）检测纹状体单胺类递质的变化。结果１）鱼藤酮显著缩短高龄大鼠转棒潜伏 期，延长爬杆时间（Ｐ＜０．０５），雌激素减弱鱼藤酮作用，他莫昔芬减轻雌激素作用。２）鱼藤酮显著减少高龄组黑质 ＴＨ阳性细胞数和ＴＨ表达（Ｐ＜０．０５），雌激素逐渐恢复ＴＨ阳性细胞损失和ＴＨ表达，他莫昔芬减轻雌激素作用。 ３）鱼藤酮增加ＬＣ一３表达（Ｐ＜０．０５），雌激素和他莫昔芬对其表达影响不大。４）鱼藤酮显著降低ＤＡ及其代谢产物 ＤＯＰＡＣ含量（Ｐ＜０．０５），升高５－ＨＴ含量，高龄组更明显（Ｐ＜０．０５），雌激素减弱鱼藤酮作用，他莫昔芬减轻雌激素 作用。５）鱼藤酮增加自噬体的数量，雌激素增加自噬溶酶体／自噬体的比例。结论高龄大鼠ＰＤ模型更可靠，雌激 素通过促进自噬成熟对鱼藤酮诱导的大鼠ＰＤ模型产生明显的治疗作用。 关键词：雌激素；帕金森病；年龄；自噬 中图分类号：Ｒ７４１ 文献标志码：Ａ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｏｎ ｒａｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｇｅ ｇｒｏｕｐｓ ｗｉｔｈ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ＳＵＩ Ｃｈｅｎ－ｙａｎ，ＬＩ Ｘｕｅ－ｚｈｏｎｇ ，ＺＨＯＵ Ｘｉａｏ—ｐｉｎｇ，ＣＨＥＮ Ｘｉａｏ—ｐｅｎｇ （Ｄｅｐｔ．ｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ ｏｆＨｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ ２１２０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｓｔｒｏｇｅｎ（Ｅ２）ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｇｅ ｒａｔ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ ｄｉｓｅａｓｅ （ＰＤ）ｍｏｄｅｌｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｒｏｔｅｎｏｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４一ｍｏｎｔｈ－ｏｌｄ ＳＤ ｒａｔｓ（ｈｉｇｈ ａｇｅ ｇｒｏｕｐ）ａｎｄ １２一 ｗｅｅｋ—ａｇｅ ＳＤ ｒａｔｓ（１ｏｗ ａｇｅ ｇｒｏｕｐ）ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（ｓａｌｉｎｅ），Ｒｏｔｅｎｏｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ（Ｒｏｔｅｎｏｎｅ ２ ｍｇ／ｋｇ），Ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ（Ｒｏｔｅｎｏｎｅ ２ ｍｇ／ｋｇ ａｎｄ Ｅ２ １ ｍｇ／ｋｇ）ａｎｄ Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ（Ｒｏｔｅ— ｎｏｎｅ ２ ｍｇ／ｋｇ，Ｅ２ １ ｍｇ／ｋｇ ａｎｄ Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ １ ｍｇ／ｋｇ）．Ｂｅｈａｖｉｏｒ ｔｅｓｔｓ ｗｅｒｅ ｃａ￣ｉｅｄ ｏｕｔ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｍｏｖｅｍｅｎｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ，Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＴＨ ａｎｄ ＬＣ．３． ＨＰＬＣ－ＥＣＤ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｍｏｎｏａｍｉｎｅ ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ ｉｎ ｓｔｒｉａｔｕｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ １ １ Ｒｏｔｅｎｏｎｅ ｒｅｄｕｃｇｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｏｌｄ ａｇｅ ｒａｔ’Ｓ ｒｏｔａｒｏｄ ｌａｔｅｎｃｉｅｓ ａｎｄ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｔｈｅ ｃｌｉｍｂｉｎｇ ｐｏｌｅ ｔｉｍｅ（Ｐ＜０．０５）．Ｅ２ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｄ ｔｈｉｓ ｅｆｆｅｃｔ，Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｅ２．２）Ｒｏｔｅｎｏｎｅ ｓｉｎｉｇｉｆｃａｎｔｌｙ ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＴＨ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ 收稿日期：２０１５—０３—０２ 修回日期：２０１５．０７．０３ 基金项目：镇江市社会发展项目（ＳＨ２０１４０４９） 通信作者（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ）：ｓｕｄａｌｘｚ＠１６３．ｃｏｒｎ １３５２ 基础医学与临床 Ｂａｓｉｃ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１５．３５（１０） ｈｉｇｈ ａｇｅ ｒａｔｓ（Ｐ＜０．０５），Ｅ２ ｐａ￣ｌｙ ｒｅｓｔｏｒｅｄ ＴＨ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌ ｌｏｓｓ，Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈｉｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｅ２，ＳＯ ｄｉｄ ｔｈｅ ｅｘ－ ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＨ ｐｒｏｔｅｉｎ．３）Ｒｏｔｅｎｏｎｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＬＣ一３（尸＜０．０５），Ｅ２ ｄｉｄ ｎｏｔ ａｆｆｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＬＣ一３，ＳＯ ｄｉｄ Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ．４）Ｒｏｔｅｎｏｎｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＤＡ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ＤＯＰＡＣ（Ｐ＜０．０５）， ｅｌｅｖａｔｅｄ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ５一ＨＴ ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｉｎ ｏｌｄ ｒａｔｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｅ２ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ，ａｎｄ Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｅ２．５）Ｒｏｔｅｎｏｎｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅｓ，ｂｕｔ Ｅ２ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｐｒｏｐｏ￣ｉｏｎ ｏｆ ａｕｔｏｌｙｓｏ— ｓｏｍｅｓ／ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｏｌｄ ａｇｅ ｒａｔ ＰＤ ｍｏｄｅｌ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｒｅｌｉａｂｌｅ．Ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｐｒｏｍｏｔｅｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｍａ— ｔｕｒｅ，ａｎｄ ｈａｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｒａｔ ＰＤ ｍｏｄｅｌ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｒｏｔｅｎｏｎｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｅｓｔｒｏｇｅｎ；Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ；ａｇｅ；ａｕｔｏｐｈａｇｙ 帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）主要病理变化 是中脑黑质。纹状体多巴胺能神经元变性、丢失。 ＰＤ细胞模型予以适当浓度的雌激素（ｅｓｔｒｏｇｅｎ，Ｅ２） 可有效减少细胞损伤，促进黑质神经元的存活，机制 之一在于通过ＥＲＫ途径调节自噬，促进自噬成熟。 为Ｅ２有望成为消除脑老化和治疗神经变性疾病的 候选药物提供了重要的依据 ｊ。然而对于腹腔注 射Ｅ２对不同年龄组ＰＤ动物模型起到治疗的特点 和机制尚不够明确，本研究旨在采用腹腔注射给药 对Ｅ２作用于鱼藤酮诱导的ＰＤ大鼠模型产生的影 响及其机制进行研究。 １材料与方法 １．１材料 鱼藤酮、雌激素、鼠抗Ｂ．ａｃｔｉｎ抗体、他莫昔芬、 兔抗Ｌｃ一３抗体和ＨＰＬＣ—ＥＣＤ标准品（Ｓｉｇｍａ公司）； Ｂｒａｄｆｏｒｄ ＢＣＡ（Ｐｉｅｒｃｅ公司）；兔抗ＴＨ抗体和ＨＲＰ 标记的抗大鼠ＩｇＧ（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ公司）；ＨＲＰ标记的抗 兔ＩｇＧ及化学发光底物ＬｕｍｉＧＬＯ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司）；ＲＩＰＡ蛋白抽提液（申能博彩公 司）；抗兔生物素ＡＢＣ试剂盒和ＤＡＢ显色试剂盒 （Ｖｅｃｔｏｒ公司）；ＨＰＬＣ级甲醇（英国ＢＤＨ实验室）； 其余均为国产分析纯试剂。 １．２方法 １．２．１ 动物分组和处理：雄性１２周龄ＳＤ大鼠４０ 只，平均体质量２５０ ｇ，２４月龄大鼠４Ｏ只，平均体质 量５００ ｇ［ＳＰＦ级上海西普尔ＢＫ实验动物有限公司 提供合格证号：ＳＣＸＦ（沪）２０１３－０００７］。８０只大鼠 随机分为８组：分别为低龄组（ｙｏｕｎｇ）４组和高龄组 （ｏｌｄ）４组，每组１０只。对照组（ｃｏｎ）：０．９％ＮａＣ１ 溶液１．５ ｍＬ；鱼藤酮处理组（Ｒ）：鱼藤酮溶液１．５ ｍＬ（２ ｍｇ／ｋｇ）；雌激素治疗组（Ｒ＋Ｅ）：鱼藤酮溶液 ０．７５ ｍＬ（２ ｍｇ／ｋｇ），雌激素０．７５ ｍＬ（１ ｍｇ／ｋｇ）；他 莫昔芬处理组（Ｒ＋Ｅ＋Ｔ）：鱼藤酮溶液０．５ ｍＬ （２ ｍｇ／ｋｇ），雌激素０．５ ｍＬ（１ ｍｇ／ｋｇ），他莫昔芬注 射液０．５ ｍＬ（１ ｍｇ／ｋｇ）；腹腔注射时，以２ ｍＬ注射 器刺破腹部皮肤，缓慢推注液体，共３ ｄ。在最后１ 次注射后８ ｄ处死动物，断头取脑。一半冰上快速 分离大鼠中脑，分离中脑腹侧约１ ｍｍ×１ ｍｍ× １ ｍｍ组织块用于电镜观察，剩余部分左侧用于 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ；右侧用于免疫组织化学染色；一半冰上 快速分离大鼠纹状体用于ＨＰＬＣ－ＥＣＤ法检测单胺 类递质改变。 １．２．２行为学检测：分别在造模前、后第３天对各 组大鼠进行行为学评定。所有行为学检测均在一恒 温、固定布局、安静并光照充分的房间进行。并固定 由两名实验者进行，一人负责仪器操作，另一人负责 记录。１）转棒耐力检测：转棒速度为８周／分，将大 鼠置于直径１５ ａｍ的旋转圆棒上，记录大鼠被置于 棒上至跌落的时间（潜伏期），每只大鼠重复测３ 次，每次间隔５ ｍｉｎ，取平均值。测试前每只大鼠进 行２次适应性训练。２）爬杆检测：测试前引导大鼠 自杆顶爬下至桌面两次，测试时将大鼠头端向下置 于杆顶（注意杆子用绳子缠好，保证有足够的摩擦 力），记录大鼠由５０ ａｍ高度爬至杆底平面的时间， 每只大鼠测３次，每次间隔５ ｍｉｎ，取平均值，爬杆稍 倾斜，角度８０。。 １．２．３免疫组织化学染色：冰上快速取出中脑组织 后固定于４％多聚甲醛＋２％蔗糖中４—６ ｈ，然后浸 于３０％蔗糖中待组织块沉底后，ＯＣＴ包埋后冰冻切 片机行中脑连续冠状切片，层厚５ ｍ，采用ＡＢＣ （ａｖｉｄｉｎ ｂｉｏｔｉｎ．ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｃｏｍｐｌｅｘ）法染色，按说明书 操作，显微镜观察拍照。 １．２．４ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测：取同等重量左侧中脑组 眭晨燕雌激素对不同年龄组帕金森病大鼠的影响及其机制 １３５３ 织。１）蛋白抽提：取组织冰上按１００ ｍｇ：１ ｎ／『 加入 ＲＩＰＡ溶液，匀浆（５ Ｓ Ｘ ７次），冰上静置３０ ｍｉｎ， ４℃，２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心３０ ｍｉｎ，弃沉淀，取上清液，混 匀，一２０℃保存备用。２）蛋白印迹：取各组蛋白质 １０ ｇ，行ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳；电转膜，５％脱脂奶粉封 闭后加入稀释好的一抗ＴＨ、Ｂ—ａｃｔｉｎ、ＬＣ一３抗体；４℃ 孵育过夜，次日分别加入二抗，室温孵育１ ｈ后行化 学发光法显示结果。３）图象扫描与灰度测定：扫描 底片后，用ＩＭＡＧＥ Ｊ图像程序分析软件分析免疫印 迹蛋白条带灰度值，两组间目的蛋白条带与同一样 品Ｂ—ａｃｔｉｎ的比值进行比较。 １．２．５ 高效液相色谱一电化学检测仪（ＨＰＬＣ— ＥＣＤ）检测单胺类递质：取分离的同等重量纹状体组 织，加人１００ Ｌ的０．１ ｍｏＬ／Ｌ的高氯酸制成匀浆 （８．０ ｍｉｃｒｏｎｓ，１０ Ｓ，３次），１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ，４℃离心， ２次取上清液，上液相系统，检测ＮＥ、Ｅ、ＤＡ、 ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ和５－ＨＴ的含量。用ＢＡＳＣｈｒｏｍ Ｇｒａｐｈ １ １５１０１色谱控制分析系统进行数据分析。 １．２．６透射电镜检查：取中脑腹侧约１ ｍｍ ｘ １ ｍｍ ｘ１ ｍｍ大小的组织块，放人４％戊二醛中；４％戊二 醛及１％锇酸双重固定。丙酮逐级脱水，树脂包埋。 ＬＫＢ一１型切片机做超薄切片，厚度为５０ ｎｍ。柠檬 酸铅染色；透射电镜观察ＳＤ大鼠纹状体神经元中 自噬体的形成和溶酶体激活、摄片。 １．３统计学分析 应用ＳＡＳ６．１２软件分析，实验数据均采用均 数±标准差（ ±ｓ）表示。多组间比较先行方差齐性 检验：方差齐者进行方差分析；方差不齐者进行成组 秩和检验。 ２ 结果 ２．１动物的行为学检测 所有鱼藤酮注射大鼠第２天即有捕捉时反抗动 作减少的现象，并逐渐出现主动活动减少，动作迟 缓，全身抖动，嗜睡；皮毛及尾巴伸直，弓背状姿势等 ＰＤ症候群特征。随着注射天数增加活动减少程度 加重。高龄组出现肌肉震颤，四肢僵直等类ＰＤ症 状；毛色逐渐发黄、变脏、有竖毛现象；其中部分大鼠 还出现阵挛性惊厥，全身肌紧张、匍匐、呼吸急促。 低龄组则未见明显肌肉颤动和惊厥表现，并且在最 后１次注射后３ ｄ开始运动能力缓慢好转，自主活 动明显增多。但高龄组大鼠在最后１次注射后运动 能力进一步下降，２周也未见明显好转。鱼藤酮明 显缩短高龄组转棒潜伏期，延长爬杆时间（Ｐ＜ ０．０５）；雌激素减弱鱼藤酮毒性作用，表现为转棒潜 伏期延长，爬杆时间缩短（Ｐ＜０．０５）；他莫昔芬减弱 雌激素作用，表现为爬杆时间明显延长（Ｐ＜０．０５）。 爬杆时间高龄组明显慢于低龄组；部分大鼠甚至时 常从杆上滑落（表１）。 表１不同年龄和干预对大鼠行为学的影响 Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｇｅ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ ｒａｔｓ（ｉ± ，ｎ＝１０） ＜０．０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎ ｇｒｏｕｐ： ＜０．０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ Ｒ ｇｒｏｕｐ ＜Ｏ．０５ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ Ｒ＋Ｅ ｇｒｏｕｐ． ２．２ ＴＨ和ＬＣ－３的表达 １）免疫组织化学染色结果：鱼藤酮明显降低高 龄组ＴＨ阳性细胞数（Ｐ＜０．０５），雌激素治疗后ＴＨ 阳性细胞增多（Ｐ＜０．０５），但少于对照组（Ｐ＜ ０．０５），他莫昔芬减轻雌激素作用（Ｐ＜０．０５）（图１， 表２）。２）Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果：鱼藤酮显著减少ＴＨ表 达（Ｐ＜０．０５），雌激素处理增加ＴＨ表达（Ｐ＜ ０．０５）。他莫昔芬减轻雌激素作用，高龄组更明显 （Ｐ＜０．０５）。鱼藤酮明显增加Ｌｃ一３表达（Ｐ＜ ０．０５），雌激素和他莫昔芬对ＬＣ一３表达影响不大 （图２，表３）。同低龄组相比，高龄组中脑黑质区域 神经元明显减少，较低龄组对鱼藤酮更敏感，更易受 损，雌激素的保护作用更明显，他莫昔芬减轻雌激素 作用。 ２．３纹状体单胺类递质的改变 低龄组单胺类递质基础水平比高龄组高，提示 神经递质水平可能发生随龄性下降，或者高龄组代 谢水平偏低；多巴胺（ｄｏｐｍａｉｎｅ，ＤＡ）及其代谢产物 二羟苯乙酸（３，４－ｈｙｄｒｏｘｙ．ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ，ＤＯＰＡＣ） １３５６ 基础医学与临床 Ｂａｓｉｃ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｅ２可以使女性ＰＤ患者在运动效应中获益 。自 噬水平正常可以保护细胞抵御不良刺激，自噬异常 导致疾病的发生。溶酶体功能和自噬效率发生随年 问存在着密切联系。本研究利用行为学检测方法， 对２４月龄和ｌ２周龄ＳＤ大鼠在选择性ＤＡ能神经 毒性物质鱼藤酮处理前、后的运动功能变化作了系 统观察。并研究雌激素（ｅｓｔｒｏｇｅｎ，Ｅ２）对不同年 龄大鼠保护作用及作用机制。 研究发现２４月龄大鼠对鱼藤酮耐受性较低， 龄性下降，为老年人中ＰＤ发生率较高提供了一定 的理论依据 。自噬触发受ＭＡＰＫ／ＥＲＫ和Ｐ３８信 号途径调节。ＥＲＫ途径与自噬成熟相关 。Ｅ２及 运动功能障碍更明显，且运动障碍代偿能力低。但 Ｅ２在低龄鼠的保护作用不如高龄鼠明显，可能由 其受体参与ＭＡＰＫ／ＥＲＫ信号调控。本研究发现老 化和鱼藤酮均诱导黑质神经元内自噬体形成和溶酶 于低龄鼠体内Ｅ２的基础水平高于高龄鼠，同样剂 量的Ｅ２对高龄鼠的影响相对较大。为进一步探讨 行为学变化的病理基础，了解ＤＡ代谢状况，本研 究对纹状体单胺类递质检测结果发现鱼藤酮减少 ＤＡ及其代谢产物ＤＯＰＡＣ含量，Ｅ２治疗后ＤＯＰＡＣ 含量升高，与对照组无明显差异。是否这种递质的 含量变化就一定与对ＤＡ能神经元的治疗作用相平 行？答案可能是否定的 。而黑质ＴＨ阳性细胞数 亦表现 随龄性减少。一般认为，黑质ＴＨ阳性神 经元的多少可以反映黑质ＤＡ能神经元的水平。暴 露于鱼藤酮后，２４月龄大鼠ＴＨ阳性细胞数下降程 度更明显，与行为学观察结果相一致，即相同剂量 的鱼藤酮在高龄个体产生更为明显的病理学损害和 行为学改变 』。研究表明，高龄个体血一脑脊液屏 障通透性增加，线粒体功能发生衰退以及氧化应激 持续增高 ，导致其对鱼藤酮高度易感，从而产 生更为严重的类ＰＤ症候群。 流行病学研究发现ＰＤ在男性中发生率较高， 参考文献： ［１］Ｓｍｉｔｈ ＡＷ，Ｂｏｓｃｈ ＭＡ，Ｗａｇｎｅｒ ＥＪ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｌｉｇａｎｄ ＳＴＸ ｒａｐｉｄｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｓ ＧＡＢＡｅｒｇｉｃ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ＮＰＹ／ＡｇＲＰ ｎｅｕｒｏｎｓ：ｒｏｌｅ ｉｎ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｎ— ｏｒｅｘｉｇｅｎｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ １７１３一ｅｓｔｒａｄｉｏｌ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎ— ｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ，２０１３，３０５：Ｅ６３２一Ｅ６４０． ［２］Ｋａｎｔａｒｃｉ Ｋ，Ｓｃｈｗａｒｚ ＣＧ，Ｒｅｉｄ ＲＩ，ｅｔ ａ１．Ｗｈｉｔｅ ｍａｔｔｅｒ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｔｅｎｓｏｒ ｉｍａｇｉｎｇ ｉｎ ｏｌｄｅｒ ａ— ｄｕｈｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ｄｅｍｅｎｔｉａ：ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｍｙｌｏｉｄ ｌｏａｄ ａｎｄ ｎｅｕｒｏ— ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＡＭＡ Ｎｅｕｒｏｌ，２０１４，７１：１５４７—１５５４． ［３］Ｓｔｅｙｎ ＳＪ，Ｃａｓｔａｇｎｏｌｉ Ｋ，Ｓｔｅｙｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉ— ｔｉｏｎ ｏｆ ＭＡＯ．Ｂ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｏｗ—ｄｏｓｅ（Ｒ）一ｄｅｐｒｅｎｙｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ Ｃ５７ＢＩ／６ ｍｉｃｅ ｈａｓ ｎｏ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｂａｓａｌ ｎｅｏｓｔｒｉａ— 体数量增加，Ｅ２治疗后自噬体与溶酶体融合增多， 自噬溶酶体／自噬体比例增高。研究发现Ｅ２的神 经保护作用是与ＭＡＰＫ／ＥＲＫ信号途径的激活有关， 在阿尔茨海默病中，Ｅ２激活ＭＡＰＫ／ＥＲＫ信号途 径，减少Ｂ．淀粉样蛋白沉积，介导神经保护和认 知修复功能 ９ Ｊ。在ＰＤ细胞实验中Ｅ２能通过介导 ＥＲＫ的磷酸化调节自噬途径来抑制ＳＨＳＹ５Ｙ细胞 自噬性死亡¨ 。本研究发现Ｅ２虽未能明显上调 ＬＣ一３的表达，但促进自噬体转化为自噬溶酶体， 上调自噬溶酶体／自噬体的比例，促进自噬成熟， 减少多巴胺能神经元的损害。 本实验通过鱼藤酮构建不同年龄组大鼠ＰＤ模 型，然后腹腔注射Ｅ２对其进行治疗和机制进行ｒ 系统的研究，从行为学、ＤＡ代谢和形态学方面探 讨了老化作为ＰＤ危险因素在该病的发生发展中起 重要作用，提示高龄大鼠更适合制作ＰＤ模型；同 时进一步证实了Ｅ２通过调节自噬，促进白噬成 熟，从而促进多巴胺能神经元的存活。 眭晨燕雌激素对不同年龄组帕金森病大鼠的影响及其机制 １３５７ ［７］Ｋｒｏｅｍｅｒ Ｇ．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ：ａ ｄｒｕｇｇａｂｌｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｔｈａｔ ｉｓ ｄｅｒｅｇｕ— ｌａｔｅｄ ｉｎ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ， ２０１５．１２５：ｌ一４． ｍｏｔｅｓ ｎｏｎ－－ａｍｙｌｏｉｄｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｅ－－ ｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｖｉａ ｔｈｅ ＭＡＰＫ／ＥＲＫ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｊ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１４，１４４：２８０—２８５． ［８］Ｌｉ ＸＺ，Ｓｕｉ ＣＹ，Ｃｈｅｎ Ｑ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｏｆ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ａｔ ｔｈｅ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｓｔｅｐ ｂｙ ＩＬ一６ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｍｉｔｏｇｅｎ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ／ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｇｎａｌ—ｒｅｇｕｌａ— ［１０］Ｂａｒｂａｔｉ Ｃ，Ｐｉｅｒｄｏｍｉｎｉｃｉ Ｍ，Ｇａｍｂａｒｄｅｌｌａ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｌｐｈａ ｉｓ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ｓｕｂ— ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｅｌｌ ｄｅｇｅｎ— ｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０１３，３８０： ２１９—２２７． ｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１２，７：ｅ４２３３９．ｄｏｉ：１０． １３７１／ｊｏｕｒｎａ１．ｐｏｎｅ．００４２３３９． ［９］Ｓｈｉ Ｃ，Ｚｈｕ Ｘ，Ｗａｎｇ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ０Ｉ ｐｒｏ— 新闻点击 食用低脂肪酸奶可减少２型糖尿病风险 据英国《ＢＢＣ新闻》（ＢＢＣ ＮＥＷＳ）２０１４年２月９日报道，英国剑桥大学的科学家发现，食用各种类型的低脂肪酸奶 以及某些低脂肪奶酪可以降低２型糖尿病风险。和不喝酸奶的人相比，食用低脂肪酸奶的人罹患２型糖尿病的风险下降 ２８％。这篇文章发表在欧洲糖尿病研究协会会刊《糖尿病学》（Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ）上。 该论文主要作者法鲁西医生（Ｎｉｔａ Ｆｏｒｏｕｈｉ）认为，此项研究显示某些食物在预防２型糖尿病上可能有重要功能，和公 共健康息息相关。奶制品是重要的蛋白质、维生素和矿物质来源。但同时，它们又含有饱和脂肪，而目前饮食专家建议不 要大量摄取。而应选用那些低脂肪的奶制品。 早期治疗抑郁症有益心脏 据美国ＷｅｂＭＤ医学新闻网（２０１４－０２－０９）报道，最新研究指出，早期治疗抑郁症有助于降低心脏病发作与脑卒中的 风险。 研究人员评估２３５位诊断为抑郁症的年长者，将患者随机分为服用抗抑郁剂与心理疗法，或是由医生决定的标准疗法。 所有患者在研究开始时都没有心脏病的迹象。 依据８年的研究结果显示，相较于使用标准疗法的患者来说，接受抗抑郁剂与抑郁症治疗的患者心脏病发作或脑卒中 的风险减少约１／２。 印第安纳大学与普渡大学印地安纳波里斯分校的心理学助理教授Ｊｅｓｓｅ Ｓｔｅｗａｒｔ认为，这篇研究最后应该会产生预防心 血管疾病的新方法。 然而，抑郁症与生理变化有关。那些有抑郁症的人可能会吸烟、较少运动、饮食不良或是较少服用药物，这些行为都 可能增加心脏病发作或脑卒中的风险。 有专家表示，医生们在讨论到第一次心脏病发作时，只会考虑到五大风险因素，高血压、吸烟、糖尿病、胆固醇以及 家族史，但不能忽略其他因素，例如久坐、压力以及忧郁等身心失调的问题。 这篇研究刊登在身心医学（Ｐｓｙｃｈｏｓｏｍａｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）期－７１】上。
