体细胞杂交在油菜细胞质雄性不育创建和改良中的应用

作　物　学　报

ACTAAGRONOMICASINICA

Vol132,No11

pp1138-143　Jan1,2006

综述

体细胞杂交在油菜细胞质雄性不育创建和改良中的应用

Ξ

胡　琼　李云昌

(中国农业科学院油料作物研究所,国家油料作物改良中心,农业部油料作物遗传改良重点实验室,湖北武汉430062)

摘　要:油菜细胞质雄性不育作为生产油菜杂交种的主要授粉控制系统得到广泛利用,但由于油菜种内自然发生的有利用价值的雄性不育细胞质类型不多,所以种属间转移现有不育细胞质及发掘新型不育细胞质意义重大。体细胞杂交不仅避开了有性杂交亲和障碍的限制,还可实现两个杂交亲本细胞质基因组的重组,是一种快速有效、应用广泛的转移和诱导雄性不育细胞质的手段。本文综述了利用原生质体杂交技术在油菜种内、种间和属间转移雄性不育细胞质以及通过细胞质基因组重组改良和创建新型雄性不育细胞质的研究进展,并讨论了利用体细胞杂交方法创建新型雄性不育细胞质的应用前景。

关键词:油菜;雄性不育细胞质;原生质体融合;远缘杂交;线粒体基因组重组中图分类号:S565

InductionandImprovementofCytoplasmicMaleSterilityinOilseedBrassicaby

SomaticHybridizationHUQiongandLIYun2Chang(NationalCenterforOilCropsImprovement,KeyLaboratoryofAgriculturalMinistryforOilCropsImprovement,InstituteofOilCropResearch,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Wuhan430062,Hubei,China)

Abstract:Cytoplasmicmalesterility(CMS)hasbeenwidelyusedasanefficientpollinationcontrolsystemforoilseedrapehybridproduction1ThenaturaloccurrenceofCMS,however,hasrarelybeenfoundinBrassicaspecies,withPolimaCMSastheonlyusefuloneforhybridproduction1HencethetransferandinductionofnewmalesterilecytoplasmisveryimportantfortheapplicationofheterosisinBrassicacrops1SomatichybridizationasanapproachforthetransferandinductionofCMSishighlyefficientbecauseitbypassessexualincompatibilityandrecombinesthecytoplasmicgenomesoftwoparentallines1ItisreviewedinthispaperthatthetransferandinductionofCMStraitwithinspeciesorbetweenspeciesandgenerabyprotoplastfusionmethodologyestablishvaluableCMSinagriculturallyimportantspeciesorvarietiesofoilseedBrassica1TheperspectiveofsomatichybridizationandthepotentialoftheestablishednovelCMSsystemsforoilseedrapehybridimprovementarealsodiscussed1

Keywords:Oilseedrape;Cytoplasmicmalesterility;Protoplastfusion;Remotehybridization;Mitochondrialrecombination

　　由于油菜杂种优势利用在提高油菜产量方面发挥着重大作用,细胞质雄性不育(Cytoplasmicmalesterility,简称CMS)作为生产油菜杂交种的主要授粉控制系统越来越受到重视。油菜中存在着较多的细胞质雄性不育系统,根据细胞质来源可分为同源

[2]

细胞质雄性不育和异源细胞质雄性不育。波里马(PolCMS)、napCMS、MICMS和NcaCMS的细胞质

[1]

来源于油菜栽培种本身,属于前者;OguraCMS、tourCMS、oxyCMS和NsaCMS的细胞质来源于油菜的近

缘属,则属于后者。前者是在自然繁殖过程中

或品种间杂交时,因核基因突变或纯合导致恢复基因丢失,细胞质雄性不育性状得以表现;后者则是由于种属间杂交造成细胞质和细胞核基因组重组,细胞核中恢复基因被置换去除,或直接通过体细胞杂

[2～5]

Ξ基金项目:国家“863计划”项目(2002AA207009)和武汉市晨光计划项目(T20005102019)资助。

作者简介:胡琼(1966),女,安徽霍邱人,博士,副研究员,从事油菜遗传育种研究。Tel:027286812729;E2mail:huqingy@public1wh1hb1cnReceived(收稿日期):2004211216;Accepted(接受日期):20052042021

　第1期胡　琼等:体细胞杂交在油菜细胞质雄性不育创建和改良中的应用　　　139

交转移不育细胞质,或重组细胞质基因组而诱导产生的。后者不育性稳定,不易受环境条件的影响,比前者更具利用价值。

油菜是容易进行原生质体操作的少数几个作物之一,在原生质体再生植株及原生质体融合方面的研究处在前沿地位。除了芸薹属的非油用种和野生种外,与油菜已经成功进行体细胞杂交并再生出植株的还涉及到萝卜属(Raphanus)、白芥属(Sinapis)、芝麻菜属(Eruca)、二行芥属(Diplotaxis)、诸葛菜属(Orychophragmus)、Moricandia和Trachystoma等芸薹簇近缘属,以及芸薹簇外的远缘属,包括拟南芥属(Arabidopsis)、山茶属(Camelina)、Barbarea、Thlaspi和。由于体细胞杂种育性往往很差,利用该方法成功转育核基因控制的优良性状并不多。进入育种品系阶段的体细胞杂种后代仅见从黑芥和芥

Lesquerella

[6]

[6,7]

杂种中,筛选出一株同工酶带型与Bienvenu相同、具

[13]

甘蓝型油菜染色体数的单株。该单株具不育细胞质供体亲本的线粒体DNA酶切带型及一条新带,表明冬性甘蓝型油菜品种Bienvenu的核基因组与雄性不育的萝卜细胞质基因组在杂种植株中实现了重组。

在油菜生产上广泛利用的Polima不育细胞质也通过体细胞杂交在甘蓝型油菜种内获得了快速转

[14]

移。Barsby等将含Polima细胞质的春性油菜品种PolimaRegent与冬油菜品种AWR融合,通过对线粒体DNA的分析鉴定出杂种,并发现这些杂种植株雌性育性正常,生态和农艺性状在随后的世代中可以稳定遗传。该实验仅用9个月就成功地将Polima不育细胞质从春性油菜品种转入冬性油菜品种,而用常规回交转育达到同样目的至少需要3年。

菜型油菜转入抗黑胫病性状的甘蓝型油菜品系,及含异质性细胞质雄性不育恢复基因的甘蓝型和芥[9,10]

菜型油菜品系。线粒体基因控制的细胞质雄性不育性状不会因为雄性不育和连续回交而丢失,通过体细胞杂交转移和创新获得了广泛的成功。本文就油菜中利用体细胞杂交方法转育、改良和创建细胞质雄性不育的研究进展进行概述,并讨论该方法及其所创建的新型雄性不育细胞质在油菜种质创新和品种改良中的利用潜力。

[8]

2　种属间杂交向油菜转移雄性不育细胞质体细胞杂交在种属间转移雄性不育细胞质得到了更广泛的利用。除了向芸薹属蔬菜(Brassica

oleracea)转移在甘蓝型油菜中首次发现的Polima不

1　油菜种内杂交直接转移雄性不育细胞质

在种内转移细胞质的常规方法是利用连续数次回交将新的细胞核基因组导入含被转移细胞质基因组的植物体中,从而达到重组两个亲本的核质基因组、转移雄性不育细胞质的目的。利用体细胞杂交结合杂交前的辐射处理,可以加快细胞质向目标核

[11]

背景的转移进程。为了将萝卜(Ogura)CMS转移

[12]

到商业化的甘蓝型油菜品种中,Pelletier等利用一个从杂交组合♀萝卜(含Ogura胞质)×♂(甘28

蓝)×♂(甘蓝型油菜)中获得的、具高芥酸含量和低温缺绿不良形状的甘蓝型油菜CMS品系,与春性油菜品种Brutor融合,从131个融合再生植株中,发现5株雄性不育且不缺绿的植株。通过一个世代的回交就极大程度地降低了细胞核染色体数,筛选出春性甘蓝型油菜萝卜质不育株系。这些雄性不育株系的育性稳定,花药不开裂,仅有空瘪的花粉囊。进一步将该不育系与冬性甘蓝型油菜品种Bienvenu进行对称性细胞融合,从5株完全雄性不育的体细胞

育细胞质外,通过体细胞杂交实现了向油菜转移萝卜和芥菜的不育细胞质(Ogura和tourCMS)。萝卜质雄性不育在甘蓝型油菜中的育成是利用常规有性杂交进行属间细胞质性状转移的一个成功的例子,但利用体细胞杂交达到这一目的则更有效,需要的时间更短。Sakai和Imamura采取“供体2受体”融合方法(即用辐射去除细胞质供体的核基因组),向甘蓝型油菜转移了萝卜的CMS。他们在获得的雄性不育且染色体数与甘蓝型油菜相同的胞质杂种中,鉴定出了1株雄性不育性在连续几个回交世代都能够稳定遗传、雌性育性很好的单株。这一方法在1年内就能获得具甘蓝型油菜细胞核基因组和萝卜细胞质基因组的胞质杂种,而有性杂交由于以萝卜为母本与甘蓝型油菜杂交不亲和,采用萝卜与甘蓝杂交而后再与甘蓝型油菜杂交,不仅耗时长,而且核基因组更复杂,需要更多世代的回交才能获得甘蓝型油菜株系。

tourCMS(又称AnandCMS)最早是在芥菜型油

[18]

菜中发现的,其细胞质来源于洋基芥(B1

[19]

tournefoutii)。Szasz等尝试通过体细胞杂交将其从芥菜型油菜转入甘蓝型油菜。他们在甘蓝型油菜与含有tourCMS的芥菜型油菜的原生质体融合实验中获得了47株杂种,其中所有雄性不育的杂种都含

[17]

[16]

[15]

140　　　　作　　物　　学　　报第32卷　

有与芥菜型油菜亲本相同的线粒体基因组的杂交带

型,证实了杂交种的细胞质为tour不育细胞质。据报道,通过广泛筛选恢复系,印度、澳大利亚和我国

[20]

都实现了甘蓝型油菜tourCMS的三系配套。

为了进一步验证芥菜型油菜的不育细胞质(即

[21]

AnandCMS)来源于洋基芥,Stiewe和Ro¨bbelen及Liu等

生长箱种植及叶绿体基因组分析得到了进一步验

证,其雌性育性正常,田间自然授粉结实率达到了(2114±311)粒Π角,与正常甘蓝型油菜没有差别。芥菜型油菜的oxyCMS和morCMS的细胞质分别来自B1oxyrrhina和Moricandiaarvensis,育成之初都同样存在低温缺绿的问题。印度学者Kirti等利用低温缺绿、含oxyCMS胞质的芥菜型不育系与正常可育的芥菜型油菜品种RLM2198融合,从123株杂种植株中获得1株雄性不育且不缺绿的单株,与保持系回交3代后染色体数回归正常,其线粒体基因杂交带型与雄性不育亲本相同,而叶绿体基因杂交带型除了含两亲本的带型之外,还产生了新的带型。他们将该不育材料中低温缺绿性状的改良归功于两亲本叶绿体基因组的重组,但很明显这种线粒体中雄性不育与叶绿体中抗低温的基因组合发生的频率很低(123株中仅有1株)。他们还利用同一方法对芥菜型油菜morCMS的低温缺绿性状进行了

[27]改良,获得了具芥菜型油菜叶绿体基因组的雄性不育、低温不缺绿的芥菜型油菜morCMS品系。

[26]

利用可育的洋基芥与甘蓝型油菜进行体细

胞杂交,均获得了雄性不育的体细胞杂种。前者从1674个再生植株中鉴定出6株可遗传的雄性不育体细胞杂种,其中1株的雄性不育性可稳定遗传。

[22]

线粒体DNA分析表明这一体细胞杂种植株的线粒体DNA为两亲本线粒体DNA的重组,而其他可育植株或雄性不育不可稳定遗传的植株的线粒体

[22]

DNA杂交图谱等同于甘篮型油菜亲本。Liu等通过用碘乙酸(IOA)处理甘蓝型油菜的原生质体后,再与用X射线处理过的洋基芥原生质体融合,获得了更高比例的(25个杂种中有20个)、具洋基芥细胞质的雄性不育胞质杂种。这种高比例的胞质杂种的出现可能得益于IOA处理使甘蓝型油菜的线粒体失活。这些体细胞杂种中所有雄性不育株均具有B1tournefortii的atp6基因特征谱带,表明B1tournefortii的atp6基因可能与该不育系统中雄性

4　诱导新型细胞质雄性不育

萝卜和洋基芥雄性不育细胞质在原始种中表现雄性不育性状,它们的线粒体基因组中含有决定雄性不育的基因,转入油菜后由于没有育性恢复基因而表现雄性不育性状。近年来多个细胞质雄性不育系统通过属间或簇间体细胞杂交在油菜中建成(见表1),但由于对其细胞质的来源种研究不多,不清楚其细胞质的育性特征,通过体细胞杂交后在油菜中表现出的细胞质雄性不育,本文将它们都归入诱导型细胞质雄性不育。

印度学者最先在体细胞杂交诱导芥菜型油菜细胞质不育的研究方面取得成效。他们用原生质体融合方法向芥菜型油菜引入近缘属Trachystomaballii的细胞质基因,诱导出了新的细胞质雄性不育材[28]

料。经过与芥菜型油菜几个世代的回交,该雄性不育材料的细胞核基因组就完全被芥菜型油菜所取代,表现出芥菜型油菜的性状。分子分析表明2个亲本的线粒体基因组在该不育系中发生了广泛的重组,可能是雄性不育产生的遗传因素。几年后他们又从芥菜型油菜与M1arvensis体细胞杂种的回交6代品系中,筛选鉴定出了含M1arvensis细胞质基因

[29]

的稳定雄性不育系。该不育系具有典型的芥菜型油菜特征,其花丝纤细,花药不开裂,雄性不育性彻

不育性的表达有关。

3　改良油菜细胞质雄性不育系的不良性状

远缘杂交获得的细胞质雄性不育系由于核质基因组重组引起的不协调而产生一些不良性状,如低温缺绿、蜜腺不发达、花瓣缺失等。以原始的OguraCMS为例,在温度低于12℃时,其叶绿素合成受到干扰,植株心叶变黄,影响光合作用。利用甘蓝型OguraCMS系与正常甘蓝型油菜品种进行体细胞杂

交,多个研究者获得了稳定的雄性不育且低温不缺

[23,24]

绿的胞质杂种。对其中的1个杂种进行细胞质基因组的RFLP分析,结果证明其叶绿体基因组来

[23]

自于正常甘蓝型油菜。回交2代后该杂种的衍生后代染色体数恢复正常并稳定在38条,其他的不正常花器性状也得到了改良,蜜腺发达,结实正[11][25]

常。Heath等则利用原生质体融合人工合成甘蓝型油菜的方法改良了OguraCMS的低温缺绿性状。他们利用低温缺绿甘蓝(B1oleracea)OguraCMS系NY7642A与正常的白菜型油菜品种Candle融合,获得了21株雄性不育且低温不缺绿的杂种株。这些合成的甘蓝型油菜植株的低温不缺绿性状以控温

　第1期胡　琼等:体细胞杂交在油菜细胞质雄性不育创建和改良中的应用

表1

Table1

　　　141

体细胞杂交创建的油菜异质性细胞质雄性不育一览表线粒体基因组类型

MitochondrialtypeAlloplasmicmalesterilitysystemsestablishedbysomatichybridizationinoilseedBrassicacrops

油菜种

Species近缘种

KindredspeciesT1balliiM1arvensis

叶绿体基因组类型

Chloroplasttype恢复系

Restorer参考文献

ReferenceKirtietal1,1997,1998Prakashetal1,1998SakaiandImamura,1990;

1992

Stiewe&Robbelen,1994;Liuetal1,1996Leinoetal1,2003Hu(胡琼)etal1,2003Hu(胡琼)etal1,待发表Inpress芥菜型B1juncea芥菜型B1juncea甘蓝型B1napus甘蓝型B1napus甘蓝型B1napus甘蓝型B1napus甘蓝型B1napus重组

Recombinant

M1arvensis

重组

Recombinant

已找到

Found

重组

Recombinant

已找到

Found

萝卜R1sativa洋基芥

B1tournefoutii拟南芥A1thaliana新疆野芥S1arvensis诸葛菜O1violaceus重组

Recombinant

改良后重组

Recombinant

已找到

Found

重组

Recombinant

混合或重组

Mixorrecombinant

重组

Recombinant

甘蓝型B1napus甘蓝型B1napus未鉴定

Notdetermined

已找到

Found

未报道

Notknown

已找到,待稳定Found

重组

Recombinant未鉴定

Notdetermined已找到

Found底。这2个芥菜型油菜异质性雄性不育的恢复基因均通过对来自同一组合的体细胞可育杂种的选择鉴

[10,29]

定而从近缘种转移到油菜中。目前该两个新型细胞质雄性不育系已在芥菜型油菜中实现三系配套,不久将会对印度芥菜型油菜的生产发挥重大作用。瑞典学者通过体细胞杂交结合回交选育获得了含模式植物拟南芥细胞质基因组的甘蓝型油菜细胞[30]

质雄性不育系。在170个甘蓝型油菜(+)拟南芥的体细胞杂种的回交一代株系中,22个株系表现出雄性不育或非正常的花器形态。选用其中的9个株系进一步回交并用RFLP标记分析细胞质和核基因组的组成,结果表明,这些株系线粒体基因组具有两亲本混合的杂交带型,并发现一定比例的重组类型。用10个分布于拟南芥整个线粒体基因组的探针杂交后,每个株系的线粒体基因组杂交带型均不相同,但却在遗传上很稳定,回交三代以后株系内没有变化。但没有一个株系是仅具有某一个亲本的杂交带型的,表明杂种中不存在单一亲本的线粒体。在其中5个株系中发现了线粒体基因组的重组,重组的区域为cob、cox2、atp1、atp9和nad5a。但所有的株系均只含有甘蓝型油菜的叶绿体。利用遍布拟南芥全细胞核基因组的16个RFLP标记杂交表明,用甘蓝型油菜回交6代之后核基因组基本上不含拟南芥的遗传物质。

Nsa细胞质雄性不育是笔者将我国的野生油菜资源野芥(即新疆野芥,Sinapisarvensis)的细胞质经原生质体融合导入甘蓝型油菜后诱导出的异质性细

[5]

胞质雄性不育。在6株融合再生当代植株中就有2株表现出彻底的雄性不育。随着回交世代的增加不育株率逐渐提高,至回交四代不育株率已达到100%。通过与我国甘蓝型油菜品种广泛测交没有

发现其恢复系,所有材料均能很好地保持其不育特性。该不育系跟我国现有的油菜细胞质雄性不育系相比,其不育性更彻底、更稳定,不易受温度变化的影响,也不存在其他异质性雄性不育系创建之初表现出的低温缺绿现象。在低世代回交群体的不育单

[31]

株中检测到了线粒体基因组的重组,这种重组很可能是导致雄性不育的内因。

在以诸葛菜(Orychophragmusviolaceus)为供体与甘蓝型油菜进行非对称性体细胞融合的再生植株中

[32]

我们也发现了雄性不育胞质杂种。用不同甘蓝型油菜品种回交后育性分离情况差异很大,回交一

[33]

代群体中完全不育株率变幅为2146%～8810%。其不育性在油菜开花前期低温条件下比较彻底,雄蕊短,花药空瘪,无花粉。随着气温的升高雄蕊开始伸长,产生大量花粉,套袋自交可以结实,有育性翻转的现象。但与波里马不育细胞质在低温条件下产生微量花粉的温度敏感性完全不同。通过广泛测交已获得了不育性稳定、不育株率100%的不育系(OrychCMS)及其保持系,恢复材料的鉴定也取得了实质性的进展(胡琼等,待发表)。

5　体细胞杂交创建和改良细胞质雄性不育

的应用前景

　　利用有性杂交创建或转育细胞质雄性不育往往受到杂交亲和障碍的限制,特别是以转移近缘野生种的细胞质为目的时要求用近缘野生种为杂交母本,其杂交亲和性更低,常常不能获得杂交种子。利用原生质体的融合实现两亲本的完全或部分基因组重组,避开了杂交亲和障碍的限制,不仅可有效置换核基因组,转移近缘种的不育细胞质,而且可实现两亲本的线粒体基因组的重组,从而诱导新的细胞质

142　　　　作　　物　　学　　报

[40]

第32卷　

不育,是发掘和创建新型雄性不育细胞质的有效手

[34,35][36][37]段。除了油菜外,在水稻和烟草中都有体细胞杂交转移和创建雄性不育细胞质成功的报道。油菜及其近缘种(属)由于更容易进行原生质体操作,获得的异质性雄性不育细胞质更多,涉及到的细胞质来源种更广(表1)。除了避开杂交亲和障碍的限制外,体细胞杂交转移雄性不育细胞质还具有速度快、耗时短的优点。结合原生质体融合前的细胞核基因组去除技术,利用非对称性融合加上筛选鉴定在当代即可获得期望的核质杂种。这在甘蓝型油菜中一般只需要6～10个月,而常规有性杂交结合回交则需要3～5年。随着植物体外组织培养条件的改善和普及,体细胞杂交在改良和创建作物雄性不育细胞质中的应用还会得到发展。

体细胞杂交创建细胞质雄性不育的另一个显著优点,是可以同时转移细胞质雄性不育的恢复基因。如前面所述的由于T1ballii和M1arvensis细胞质的引入产生的芥菜型油菜雄性不育系,均在同一体细胞杂交组合的可育杂种后代中找到了恢复材料,亦即细胞质来源种中的恢复基因也同时被转入体细胞杂种中,经过自交,回交改良和杂交转育,很快可获

[10,29]

得遗传稳定的恢复系。而用常规有性杂交从近缘种中转移雄性不育细胞质,由于杂交亲和性低,很少有雄性可育的杂种后代,雄性不育的杂种后代需要不断回交才能繁殖。随着回交世代的增多,细胞质来源种的核基因组被完全代换,不可能转移和保留恢复基因。这种现象在小麦中最为典型,前人通过常规有性杂交将小麦、山羊草2个属3个种46个系统的细胞质转入普通小麦的5个种中,已获得雄性不育类型70多种,但找到的可恢复育性的材料很[38]

少。利用有性杂交转入芥菜型油菜的D1catholica不育细胞质,其恢复基因也是在芥菜型油菜(+)D1catholica体细胞杂种可育后代中找到[39]

的。我们通过对引入新疆野芥细胞质获得的甘蓝型油菜NsaCMS的恢保关系测定也发现,其恢复材料仅存在于从同一体细胞杂交组合获得的雄性可育杂种衍生而来的后代株系中,表明通过体细胞杂交引入野生种细胞质诱导雄性不育的同时,也转入并通过筛选鉴定保留了其恢复基因。

我国在油菜原生质体融合方面研究较少,但在体细胞杂交创建甘蓝型油菜异质性雄性不育已见成[5]

效。虽然国际上特别是印度已创建了不少不育性稳定的油菜异质性细胞质雄性不育系统,但因受到知识产权的限制,在我国的利用还存在很多问

题。引入我国野生资源新疆野芥及诸葛菜细胞质的Nsa和Orych甘蓝型油菜细胞质雄性不育系,是我国自主知识产权的第一批油菜异质性雄性不育系统。其不育性稳定,对温度敏感性小,恢复基因也已转育到甘蓝型油菜中。经过一定的改良和组配,有望在我国油菜杂交种生产上发挥重大作用。

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[29]PrakashS,KirtiPB,BhatSR,GaikwadK,KumarVD,ChopraVL1A

Moricandiaarvensis2basedcytoplasmicmalesterilityandfertility

restorationsysteminBrassicajuncea1TheorApplGenet,1998,97:488492

[30]LeinoM,TeixeiraR,LandgrenM,GlimeliusK1Brassicanapuslines

withrearrangedArabidopsismitochondriadisplayCMSandarangeofdevelopmentalaberrations1TheorApplGenet,2003,106:11561163[31]HuQ,AndersenSB,DixeliusC,HansenLN1Productionoffertile

intergenericsomatichybridsbetweenBrassicanapusandSinapisarvensisfortheenrichmentoftherapeseedgenepool1PlantCellRep,2002,21(2):147152

[32]HuQ,HansenLN,LaursenJ,DixeliusC,AndersenSB1Intergeneric

hybridsbetweenBrassicanapusandOrychophragmusviolaceus

containingtraitsofagronomicimportanceforoilseedrapebreeding1

TheorApplGenet,2002,105(67):834840

[19]SzaszA,LandgrenM,FahlesonJ,GlimeliusK1CharacterizationandtransferofthecytoplasmicmalesterileAnandcytoplasmfromBrassicajunceatoBrassicanapusviaprotoplastfusion1PhysiolPlant,1991,82:

[33]MeiD2S(梅德圣),LiY2C(李云昌),HuQ(胡琼)1Investigationof

malesterilelinesderivedfromintergenericsomatichybridsofBrassica

napus(+)OrychophragmusviolaceusandB1napus(+)Sinapisarvensis1ChinJOilCropSci(中国油料作物学报),2003,25(1):

A29

[20]YangG2S(杨光圣),FuT2D(傅廷栋)1Establishmentofthreelines

(malesterileline,maintainerandrestorer)oftourcytoplasmicmalesterilityinBrassicanapusL1SciAgricSin(中国农业科学),1999,32(2):112(inChinese)

[21]StieweG,RobbelenG1Establishingcytoplasmicmalesterilityin

BrassicanapusbymitochondrialrecombinationwithB1tournefortii1PlantBreed,1994,113(4):294304

7275(inChinesewithEnglishabstract)

[34]HalldenC,LindC1Cytoplasmicmalesterilityinbetaisassociatedwith

structuralrearrangementsofthemitochondrialDNAandisnotduetointerspecificorganelletransfer1JMolEvol1990,31(5):365372[35]LosslA,AdlerN,HornR,FreiU,WenzelG1Chondriome2type

characterizationofpotato:mta,b,c,d,eandnovelplastid2mitochondrialconfigurationsinsomatichybrids1TheorApplGenet,1999,98:110

[36]MaH2L(马洪丽),ZhangS2B(张书标)1Advancesinproducingrice

malesterilitybyBiotechnology1MolPlantBreed(分子植物育种),2003,1(5Π6):721724(inChinesewithEnglishabstract)

[37]ZubkoMK,ZubkoEI,AdlerK,GrimmB,GlebaY1NewCMS2

associatedphenotypesincybrids

NicotianatabacumL1(+)

HyoscyamusnigerL1AnnBot,2003,92:281288

[22]LiuJH,LandgrenM,GlimeliusK1TransferoftheBrassicatournefortii

cytoplasmtoB1napusfortheproductionofcytoplasmicmalesterileB1

napus1PhysiolPlant1996,96:123129

[23]MenczelL,MorganA,BrownS,MaligaP1Fusion2mediatedcombination

ofOgura2typecytoplasmicmalesterilitywithBrassicanapusplastidsusingX2irradiatedCMSprotoplasts1PlantCellRep,1987,6:98101[24]JarlCI,van2MGrinsvenQJM,van2derMarkF1Correctionof

chlorophyll2defectivemalesterilewinteroilseedrape(Brassicanapus)throughorganelleexchange:molecularanalysisofthecytoplasmofparentallinesandcorrectedprogeny1TheorApplGenet1989,77:135141

[25]HeathDW,EarleED1SynthesisofOguramalesterilerapeseed

(BrassicanapusL1)withcoldtolerancebyprotoplastfusionandeffectsofatrazineresistanceonseedyield1PlantCellRep,1996,15:939944[26]KirtiPB,NarasimhuluSB,MohapatraT,PrakashS,ChopraVL1

CorrectionofchlorophylldeficiencyinalloplasmicmalesterileBrassica

junceathroughrecombinationbetweenchloroplastgenomes1GenetRes,

[38]LiangF2S(梁凤山),WangB(王斌)1Heredityandgenemappingof

malesterilityinwheat1Hereditas(Beijing)12003,25(4):461465(inChinesewithEnglishabstract)

[39]PathaniaA,BhatSR,KumarVD,Ashutosh,KirtiPB,PrakashS,

ChopraVL1CytoplasmicmalesterilityinalloplasmicBrassicajunceacarryingDiplotaxiscatholicacytoplasm:molecularcharacterizationandgeneticsoffertilityrestoration1TheorApplGenet,2003,107(3):455461

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[27]KirtiPB,PrakashS,GaikwadK,KumarVD,BhatSR,ChopraVL1

ChloroplastsubstitutionovercomesleafchlorosisinaMoricandiaarvensis2