灵芝多糖锗的免疫增强作用研究

文章编号：１（１０９　９７２７（２ｆｘ监　Ｉ｝ｌ㈣　）　［实验研究］　灵芝多糖锗的免疫增强作用研究　丘琳　牛建伟０　摘要目的探计灵芝多糖锗对实验动物体液免疫和细胞免疫的影响。方法　采用小鼠溶血素形成和溶血空　斑形成测定法，检验对体旋免疫的影响；利用ｃ锄　、ＬＰＳ请导脾细胞培养＂ｒｒ比色分析击，检验对细胞免疫的影响。站　秉是芝多糖锗对小鼠溶血素形成和溶血空兜形成有显著的升高作用，对ｃ０ｎＡ、ＬＰＳ诱导体外小鼠Ｔ、Ｂ淋巴细胞增　是芝多耱锗有明显的体液免疫和细胞免疫增强作用　殖有明显的兴奋作用。站论关键词灵芝多耱锗；溶血素；溶血空斑；Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖．　文献标识码：Ａ　中田分类号！Ｒ．０７９．５　Ｓｌｕｄｙｔｈｅ　Ｏｉｌｔｈｅ　ｅｔｔ＇ｅｅｔｓ　ｏｆＳａｅｅｈａｔｌｌｍ（　啊咀Ｉ　ｍｎ　ｏｆＧｌｏｓｓｙＧａｎｏｄｅｒｍａ帅ｔｍｍｌｌｎｉ￣．ＱｎＪ　Ｌｉｎ．ＮＩＶ　Ｊｉａｎ—ｗｅｉ，ＫａｉｆｅｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＤｒｕｇＣｏｎｔＭ，Ｋａｉｆｅｎｇ４７５００２，ＨｅｎａｒｔＰｒｏ＇Ａｎｃｅ，Ｐ　Ｒ，Ｃｌａｉｍ　Ａｌ￣ａ．ａｃｌ　ｏｂｊｅｅｌｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙｔｈｅｉｌｌｉｌｕｅｌｌｃｅ　ｏｆＳａｃｃｈａｍｍＧｅｍｌａｎｉｕｍ　ｏｆＧｌｏｓｓｙＧａｎｏｄｅｒｒｎａ　０１３ｔｈｅｈｏａｙｌｉｑ—　ｕｉｄ　ａｎｄ　ｃｅｌｌ　ｉｒｍｎｌｍｉｔｙ　ｏｆ　ｅｅ￣ｐｅｒｉｒｎｅｎｔｅｃｌ　ａｎｉｍａｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｓ　ａｂｄＤ￡ｅｄ　ｔＯ　ｍａｋｅ　ｍｉｃｅ’ｓ　ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ　ａｎｄ　ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ　ａｅｒｏ—ｍａｃｕｌｅ　ｆｏｒｍｅｄ　ｍ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｔｅｓｔ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　Ｏｉｌ　ｔｈｅ　ｂｏｄｙ　ｌｉｑｕｉｄ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ．ａ　ｍｏｍｅ时ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｈａｖｅ　ＣｏｎＡ，ＬＰＳ　ｉｎｄｕｃｅ　ｓｐｌｅｅｎ　ｃｅｌｌｓ　ｃａｌｔｕｒｅ，ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｔｅｓｔ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｒ￣Ｏｉｌ　ｃｅｌｌ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｓａｏｃｈａｎ珊ｇｅｎｎａｎｉｔｍｌ　ｏｆｄ０ｓｓｙ铲ｎ０ｄ踟ｍ　ｈａｄ　ｅｆｆｅｃｔｓ　Ｏｎｔｈｅｉｎｃｒ￣ｓｅ　ｏｆｍｉｅｅｓ　ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ　ａｎｄｈｅｍｏｌｙｓｉｓ　∞ｒｏ—ｍａｃｕｌｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｈａｓ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ｅ￣［ｅｃｔｓｍｍｉｅｅｓ　Ｔ　Ｂｌｙ￣ｈｏｅｙｔｅｓｍｕｌｔｉｐｌｉｅａｔｉｏｔａｉｎｄｕｃｅｄ　ｈｊｒ　ＣｏｎＡ，　ＩＰＳ．ｅｏｎｄｌ￣ｏｎ　Ｓａｅｃｈａｒｕｍ　ｇｅｒｍａｎｉｕｍ　ｏｆｇｌｏｒｙ　ｇａｎｏｄｅｒｍａｈａｓ　ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｍｅｎｔ　ｏｆｔｈｅ　ｂ０ｄｙ　ｌｉｑｕｉｄ　ａｎｄ　ｃｅｌｌｉｎ￣ｎｕｎｉｔｙ．　Ｋ叮ｗｏｒｄｓ　Ｓａｃｅｈａｍｍ　ｇｅｒｍａｎｉｔｍｌ　ｏｆ　ｇｌｏｓｓｙ　ｇａｎｏｄｅｒｍａ；Ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ；Ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ　ｐｌａｑｕｅ，Ｔ．Ｂ　嘶ｐｒｏｌｆｉｅｒａｔｉｏｎ．　ｙｔｅ　灵芝多糖锗是利用生物工程技术，将无机锗　（Ｇｅｏ２）加入到灵芝菌深层发酵培养浪中，通过菌丝体　内物质大系代谢转化，将Ｇｅ元素结合大于分子多糖　上，成为灵芝多糖锗络合物，研究表明灵芝多糖锗能　一９４７０　３ｔｔｅｎｅ￣；小牛血清，天津生化制品厂；二甲基亚　砜，上海试剂一厂Ｈａｍｋｓ液，绵羊红细胞（ｓＲＢｃ）。　健康昆明种小鼠、纯系ＢＡＬＡ小鼠，雄性，１８—　２２ｇ，河南省实验动物中心提供。　抑制￥１８ｏ肉瘤小鼠的肿瘤生长，明显升高ｓＩ∞肉瘤小鼠　腹腔巨噬细胞的活性ｓ】。本文报告灵芝多糖锗对小　鼠溶血形成、溶血空斑形成的影响和对ｅｏｎＡ、ＩＰＳ诱　导小鼠Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖的影响。　１实验材料　灵芝多塘锗，发酵液浓缩２倍，河南省医药工业　２方法与结果　２．１对小鼠溶血素形成的影响　取昆明种小鼠５０　只，随机分为５组。即正常对照组（生理盐水）、香菇　菌多糖组（１ｏ０ｎ　）、灵芝多糖锗小剂量组（４ｏｍ￣／　ｋｇ）、中剂量组（８０ｍｇ／ｋｇ）和大剂量组ｔ１６０￣ｋｇ）。以　１０％ＳＲＢＣ　０．５ｍＬ腹腔注射致敏，６小时后分组灌胃给　药０．２ｍ］／１ｏｇ体重，连续给药５天。按文献方法ｒ　于　末次给药后１小时，经眼眶取血，分离血清测定溶血　素的吸收度（ＯＤ）值。结果见表１。　由表１可知，当给小鼠灵芝多塘锗连续５天，对小　研究所提供：香菇菌多糖，开封制药厂生产。　ＲＭ１—１６４０合成培养基，美国Ｓｉｇｍａ公司；刀豆素　Ａ（陆　），美国Ｓｉｇｍａ公司；脂多糖（Ｉ２Ｓ），美国ＤＩＦＣＯ　ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ公司；胛ｒ，瑞士ＦＦＯＲａ　Ｃｏｎｅ￣ａｉｅ　ＡＧＣＨ　［作者单桩】１．河南崔开封市药品格验所，开封市，４７５ＯＯ１。２．河南省医药工业研克所．开封市．４７５００３　维普资讯 http://www.cqvip.com

ｎ¨素Ｊ　成均　ｆ　Ｙｔ高　门Ｊ，虻以－｛一、人制量世　…Ｊ　，　表２灵芝多糖锗对Ｃｏ．Ａ、ＬＰＳ诱导　ｊ　知『的香精　多怖　ｊＩＬ；尤ｌＪｆ］　差异　表　ｌＪｌ　芝　Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖的影响（　±ＳＤ）　多糖锗对小鼠的体液免疫有兴奋作用。　表１灵芝多糖锗对小溶血素形成　和溶血空斑形成的影响（　±ＳＤ）　与对照组　Ｅ较　Ｐ＞０晒，。。Ｐ＜０　０５，…Ｐ＜０．Ｏｌ　３讨论　中药化学物质经基础的认识和可控质量标准的　研究以及在药效学指导下的现代生产工艺研究，是中　与对照组比较　Ｐ＞０　０５，　Ｐ＜０．０５，…Ｐ＜０，０ｌ　药现代化的关键和核心问题。灵芝多糖锗是应用生　物发酵技术，对灵芝［Ｇａｎｏｄｅｒｍｓ　Ｉｕ￣ｉｄｍｎ（Ｌｅ）￣ｓｓ．ｅｘ　ＦＴ）　２．２对溶血空斑形成的影响　取昆明种小鼠５０只，　分组与剂量同２．１．以１０％ＳＲＢＣ０．５ｍＬ腹腔注射致敏，　Ｋａｒｓｔ．］菌深层发酵培养过程强化锗，得到的一种多糖　锗络合物，研究表明对小鼠８１８０肉瘤具有抑制作用，能　明显增强Ｓｉｓ０肉癌小鼠腹腔巨噬细胞的活性，且以上　６小时后分组灌胃给药０．２ｍｌ／１０ｇ体重，连续给药５　天。按文献方法＿３　于末次给药后１小时，颈椎脱臼处　死动物取脾，加入少量Ｈａｎｋｓ液匀浆，经处理后，分离　上清液测定溶血空斑的ＯＤ值，结果见表１。　由表１可见当以不同剂量的灵芝多糖锗给于小　鼠时，对小鼠的溶血空斑形成除小剂量组外，均有明　作用比灵芝多糖和ｃｅｏ２强…，显示出了现代工艺较　传流工艺的优势　多糖体已在肿瘤免疫治疗中显示促胸腺体液反　应，具“宿主中介作用”，刺激网状内皮系统，提高宿主　对癌细胞的特异抗原免疫反应力。灵芝多糖使Ｔ淋　巴细胞增多，加强网状内皮系统吞噬功能，明显增加　抗原结合细胞（玫瑰花结形成细胞，ｉｏｓｅｔｔｅ　ｆ０Ｉ血Ｉ１ｇ　ｃｅｌｌ　ＲＴｃ）数　Ｊ。本实验研究表明灵芝多糖锗对小鼠溶血　素形成和溶血空斑形成有显著的升高作用，对ｃ０以、　ＬＰＳ诱导体外小鼠Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖有明显的兴奋作　用，有明显的体液免疫和细胞免疫增强作用，与文献　报导一致。有关灵芝多糖锗的结合形态有待进一步　研究。　显的升高作用，且与已知的香菇菌多糖相比无明显差　异．表明灵芝多糖锗在本方式作用下，对小鼠的体液　免疫有兴奋作用。　２．３对Ｃｏｒｋ＆、Ｉ　诱导Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖的影响　取ＢＡＬＢ小鼠５０只，分组与剂量同２．１，分组灌胃给药　０．２ｍｌ／１咄体重，连续给药５天。采用胛ｒ比色分析　法－４．５】。于末次给药后１小时取脾制备脾细胞悬液　（浓度６×１　）。在４０微孔培养板分别加入Ｃｍ，Ａ或　ＬＯＳＳ０ｍｌ，及不同组别的脾细胞悬液５０　ｍＪ、完全培养　ｌＯＯｍｌ，置５％Ｃ０２培养箱中，３７。ｃ饱和湿度下培养４８　参考文献　小时，离心，各孔弃去上清液１００ｍｌ，加入ＭＴＩ＇１０ｍｌ，加　入Ｍ＇ＩＴ１０ｒａｌ继续培养４　６小时，各孔分别加入１００ｒａｌ　二甲基亚砜，选择测定波长５７０ｒｉｍ，参考波长６３０ｒｉｍ，　［１］牛建伟．谢平灵芝多藉错的抗肿瘤及免疫增强作用研究中国生　化药物杂志，２０［ｘｊ，２１（４）；１８９　［２］徐学瑛．李元．许津．一个改进的体渣免疫测定方法——溶血素测　定法药学学报，１９７９，１４（７）：４４３　用酶标分光光度计测定各孔的ＯＤ值，结果见表２。　灵芝多糖锗对ＣｏｎＡ、ＬＰＳ诱导体外小鼠Ｔ、Ｂ淋巴　细胞增殖反应，小剂量对ＧｏｒＡ诱导的Ｔ淋巴细胞增　殖没有兴奋作用，对Ｉ　诱导的Ｂ淋巴细胞增殖也没　有兴奋作用；而当给小鼠中、大剂量时则对ｃｏ以、ＬＰＳ　［３］攘淑云，卞如濂，胨修药理实验方法学．北京：人民卫生出版杜，　１９８２：９４６．　【４］Ｍｏ￣＇ｒ．，ａｎｎ　Ｔ　ｄ　ｏｏｔ￣ｉｒｎｃＣｆｉｃ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｍｄ　ｓｕｒｖｉｖａｌ；ａｐｐｌｉｅ￣ｔｌｏｎ　ｌｏ　ｐ　ｅｒ　０ｒＬ　ａｎｄ　ｅ卅０　ａ哼ａｓ．ｓｎｙｇ．Ｊ　ｌｍｍｕｎｄ　Ｍｅ￣ｔｈｏｄｓ　１９８３；６５：５５　［５］薛彬．介绍一种用颜色显示法畏Ｉ定细胞的生长及增殖．北京医科大　学学报，１９８７；１９：１２５．　诱导的Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖均有兴奋作用，且呈量效关　系，该作用亦略强于已知的香菇菌多糖。　［６］李广勋＿中药药理毒理与临床．天津；天津科技翻译出版公司，１９９２；　４６３．　《垃稿　∞　一９—１７）　≮