白芨组培苗的播种技术研究

1 材料和方法

1.1 试验材料

白芨蒴果，采自宜章县御仙农业生态有限公司；MS培养基，由实验室自行配制；活性炭粉、面粉、琼脂粉，市售。

1.2 仪器

YXQ-LS-50G型立式压力蒸汽灭菌锅；SW-CJ- 2F型超净工作台；AUY200型电子天平。

1.3 试验方法

1.3.1 MS培养基的配制

配方：1/2MS+1.0 mg/L NAA+30 g/L白砂糖+ 6.0 g/L琼脂粉，pH值5.8。

1.3.2 种子灭菌

选用未开裂的白芨蒴果，首先用流水冲洗白芨蒴果约30 min，用洗衣粉水刷洗白芨蒴果表面，用蒸馏水冲洗2～3遍。在超净台中用75%乙醇消毒30 s，无菌水冲洗1次，再用0.1%的HgCl2水溶液浸泡5 min，期间不停地摇动，使其消毒彻底，用无菌水冲洗5～ 6次，然后置于干燥的灭菌滤纸上吸尽水分，用解剖刀切开白芨蒴果，取出种子（为避免由于种子选择不同造成结果误差，试验采取将使用的10颗白芨蒴果一起切开后在灭菌培养皿中全部混匀）。

1.3.3 选用不同的材料和比例进行种子稀释

将取出的白芨种子在无菌操作台分为大致相等的10份，放入已灭菌的培养皿中。在无菌操作室内根据种子的质量，按照种子∶分散材料= 1∶1，1∶2，1∶3的比例逐个称取活性炭粉、面粉、琼脂粉，在培养皿中与相对应的种子充分混匀。

1.3.4 撒种

将种子分别按1∶1，1∶2，1∶3不同比例与活性炭粉、面粉、琼脂粉混合均匀，定量接种，使每管混合物中种子数量大致相当，每个培养瓶撒1管种子（为避免撒种环节因操作者不同引起的误差，本环节由1人操作。）

1.3.5 培养条件

种子播种后移至组培室中培养，培养温度24± 2 ℃，光照12 h/d，光照强度2 000～3 000 LX。

2 试验结果

2.1 对照组的种子萌发

种子播种于培养基15 d后观察到有萌发的迹象，种子吸胀，由黄褐色变成绿色；20 d时便可观察到种子变为绿色小球体状，即原球茎；26 d后原球发出绿色的芽尖；60 d后有种子继续萌发，有些原球茎再培养，长出了幼叶，同时少数原球茎则会继续长大但并不分化出幼叶。

2.2 与活性炭粉混匀稀释的种子萌发

种子在培养基上培养25 d，比例1∶3的率先观察到有萌发的迹象，比例1∶2和1∶1的随后才有萌发迹象；30 d后萌发较早的种子在顶端产生1个小突起，形成1枚子叶，继续培养则顶端伸长并长出1～2枚叶片。

2.3 与面粉混匀稀释的种子萌发

经过10 d的培养种子开始萌发，但伴随着大部分的种子造成感染，未感染的23 d后长成原球茎。

2.4 与琼脂粉混匀稀释的种子萌发

种子在培养基上进行培养，13 d后种子开始萌发，20 d后原球茎形成，27 d后原球茎逐渐发育 2片子叶，60 d后长成株高7～8 cm的幼苗。

不同比例混匀稀释对种子萌发时间的影响见图1，不同比例混匀稀释对植物幼苗生长的影响见图2。

3 分析讨论

由上述结果可以看出，混合不同的物质对种子进行稀释播种，对种子的萌发率和萌发时间都有一定影响。混合材料为面粉或琼脂粉的，种子萌发时间较短；混合材料为活性炭粉的，种子萌发时间最长。但面粉为混合材料比例1∶2和1∶3的组大部分造成了感染，而琼脂粉播种的几乎无感染现象。原因可能是面粉与琼脂粉本身含有一定营养，促进了白芨种子的萌发；而活性炭粉可能是吸附了培养基中种子萌发的诱导剂和有机质，从而对种子萌发具有一定的抑制作用。面粉混合物的感染率高，因为它的高营养不仅带给种子，也给细菌和真菌带去了营养，造成感染，这种种子较难萌发，而且对失误率也是考验。60 d后种子萌发成幼苗，对照组的幼苗紧挨在一起不好分离；混合材料为面粉的长时间后长成坨状，幼苗也不好分离。而琼脂粉的小苗分散的最好，比例为1∶3分散效果最好，这样再进行根的诱导时更容易。通过固体稀释法把白芨种子按1∶1，1∶2，1∶3的比例混合面粉、活性炭粉和琼脂粉再进行播种和无菌培养，发现1∶3的白芨种子和琼脂粉比例白芨瓶苗的生产效果最好，可以减少白芨种子培育时的转接次数，甚至可以达到一次成苗的效果。

总之，通过对传统的白芨种子无菌播种育苗技术进行了改进和简化，减少了移瓶次数，最大限度降低了生产过程中的污染率，减少了种子的萌发时间，提高了萌发率。使用改进后的技术，白芨种子到炼苗只需要120 d左右，节约了生产成本，对促进白芨人工栽培产业发展以及保护野生资源都具有重要的意义。