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化学发光检测梅毒特异性抗体反应性结果分析

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676 医学2011年8月第22卷第8期Med J Chin PAPF,Vo1.22,No.8,Au sl' ! 化学发光检测梅毒特异性抗体反应性结果分析 顾春瑜,刘 刚,赵乔妹,李少增,于 勇 【摘要】 目的分析梅毒特异性抗体(treponema pallidnm antibody,TP)的有反应性结果,尤其是COI值较低的标本,为 选取129例用化学发光法检测梅毒特异性抗体有反应性的术前筛查标本,用梅毒螺旋体 当切点S/CO值为5时, 减少假阳性的发生提供依据。方法血凝试剂盒(treponema pallidum hemaglutination assay,TPHA)进行复检,分析比对两者的结果。结果Syphilis TP阳性为96例,阴性为33例,两种方法差异无统计学意义(P>0.05)。结论少了假阳性的发生,降低了医疗纠纷的可能。 当TP有反应性时(尤其是S/CO值为 1.0—5.0的标本),要综合考虑患者的年龄、病史,以及临床表现,可再用TPHA做复检,如两者均为阳性再报阳性,这样大大减 【关键词】 梅毒特异性抗体;反应性;假阳性 【中国图书分类号】 R466 Reactive results of Treponema pallidum antibody in chemiluminescent assay GU Chunyu,LIU Gang,ZHAO Qiaomei,LI Shaozeng,and YU Yong.Department of Clinical Laboratory,the First Afilfiated Hos— pital of the PLA General Hospital,Beijing 100048,China. 【Abstract】Objective To find the cause of false positive results during the detection of Treponema pallidum antibody(TP)in chemiluminescent assay.Methods We put 129 TP reactive samples to chemiluminscent assay.reexamined them by treponema palli— dum hemaglutination assay(TPHA)before comparing them.Results When cut—off S/CO was 1,the difference was signiifcant,but there was no significant difference when cut一0ff S/CO was 5.Conclusions When anti—TP iS reactive.especially in the samples of low S/CO value(I.0—5.0),multiple factors should be taken into consideration,such as age,histoy rof disease,and clinical syrup— toms,followed by re—examination of the sample by other means.In this way,the chance of false positivity will be reduced. 【Key words】treponema pallidum antibody;reactive;false positive 目前,化学发光技术在检验医学领域的应用越 来越广泛,利用此法检测梅毒特异性抗体也逐渐应 用于临床。由于化学发光技术灵敏度的增加,确保 了血站用血及有创检查的安全,但假阳性的现象也 随之增多。笔者对2010年初我院开展化学发光检 (ARCHITECT i2000),由美国雅培公司生产,AR— CHITECT Syphilis TP配套试剂由雅培公司提供。 TPHA由英国Omega诊断试剂有限公司提供。 1.3 Syphilis TP检测 利用化学发光技术对人血 清中梅毒螺旋体抗体进行定性分析,实验在ARCHI— TECT i2000全自动免疫分析系统上进行。按照说 明书判定结果:当S/CO≥1为阳性。 1.4 TPHA检测 梅毒螺旋体血凝试剂盒利用血 球凝集的原理,将待测血清倍比稀释后分别加人致 敏粒子和非致敏粒子,充分混匀后室温加盖静置,具 体步骤按说明书操作,当滴度≥1:80被视为TPHA 阳性。将所有Syphilis TP检测阳性的标本用TPHA 进行复检。 测梅毒特异性抗体以来假阳性的标本进行初步分 析,以期减少假阳性率,以避免医疗纠纷。 1材料与方法 1.1材料标本来源:为2010年初我院开展用化 学发光技术检测梅毒特异性抗体有反应性标本129 例,患者为有创检查和手术前准备者,无临床表现。 其中男76例,女53例,年龄19~95岁,平均(53.5 ±18.8)岁。 1.5 统计学处理 使用SPSS11.5统计学软件进 仪器为雅培全自动免疫分析仪 行配对四格表 检验,以P<0,05为差异有统计学 意义。 1.2仪器和试剂作者简介:顾春瑜,女,1976年出生。硕士,主管技师。主要从事临床 检验工作。 2 结 果 作者单位:100048北京,总医院第一附属医院检验科 通讯作者:于勇,E—mail:hnyuhnyu@sohu.com 在129例TP有反应性的标本中,TPHA阳性9O 例(化学发光法和TPHA均为阳性,简称阳性组), 医学2011年8月 第22卷第 塑Med J c PF . : 垒 g 677 阴性39例(化学发光法阳性而TPHA阴性,简称假 阳性组)。但当将切点的S/CO值提高到5时, Syphilis TP阳性为96例,阴性为33例,两种方法比 较差异无统计学意义(P=0.070,表1)。 39例假阳性组中,平均59.9岁,55岁以上的 在这些健康筛查的患者中,笔者发现老年患者梅毒 特异性抗体阳性率较高(2%~3%),与文献[1,2]报 道一致。从本研究数据来看,患者的平均年龄在50 岁以上。究其原因主要有两方面:一方面以往梅毒 抗体的检测方法敏感度较低,使一些梅毒感染者未 被检测出,由于患其他疾病服用抗生素后致梅毒自 愈或感染,但梅毒螺旋体特异性抗体仍在体内 长期存在甚至终身携带,而查RPR往往是阴性或滴 26例,55岁以下13例。这39例中患心血管疾病l6 例、肿瘤9例、妊娠3例、肝炎4例、糖尿病2例、外 伤2例、其他疾病3例。假阳性组S/CO值大于5 只有7例,大部分的S/CO值都小于5,而所有的阳 度很低;另一方面,老年人梅毒特异性抗体有一部分 性组的标本S/CO值都大于5。 表1 不同方法及不同CUTOFF值梅毒螺旋 体特异性抗体检测结果 (n;%) 3讨 论 目前,实验室检测梅毒抗体分为两大类:梅毒特 异性抗体和梅毒非特异性抗体。现有的梅毒特异性 抗体检测方法临床应用的有荧光梅毒螺旋体抗体吸 收试验(fluorescent treponema antibody—absorption assay,FTA—ABS)、TPHA、梅毒螺旋体被动颗粒凝 集试验(treponema pallidum particle agglutination as— say,TPPA)、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验、化学发 光法等。 化学发光法是新近用于临床的方法。它以其方 便快捷以及灵敏度、特异性高等特点已逐渐被广泛 应用。化学发光法的反应原理:将重组TP抗原 (TpN15、TpN17和TpN47)包被微粒子与样本中存 在的抗一TP抗体结合洗涤后再加入发光物质标记 结合物,再一轮洗涤之后,在反应混合物中加入预激 发液和激发液,最后测定得到化学发光反应物的相 对光单位(relative light units,RLUs)。样本中存在 的抗一TP抗体量与RLUs成正比。试验通过对比 反应测定的化学发光信号与事先校准确定的临界信 号的比值(S/CO)以确定样本中是否存在抗一rrP抗 体。如果S/CO≥1,则该样本可视为抗一TP阳性。 笔者总结129例Syphilis TP阳性的标本,对其作了 相应的归纳和分类,发现以下几个问题。 3.1 年龄因素 所有标本全部来自临床手术、输 血(供、受血者)及各种创伤性检查前准备的患者, 是假阳性。在假阳性组患者的年龄大于55岁的占 65%,尤其是S/CO值较高的几个患者平均年龄在 75岁左右(数据文中没有提供)。这是由于老年患 者由于生理功能逐步退化,容易m现免疫功能上的 异常,易产生一些异常蛋白质而干扰了检测的结果 出现假阳性l3 ;同时老年患者体内存在由非梅毒螺 旋体诱导产生抗属、群或科特异抗原的交叉反应抗 体 ,产生交叉反应导致假阳性。 3.2 疾病与梅毒特异性抗体检测的假阳性密切相 关恶性肿瘤、心血管疾病、肝炎、自身免疫性疾病、 妊娠等,这些疾病可使患者体内含有某些治疗性抗 体、类脂嗜异性抗体、自身抗糖尿病体、类风湿因子、 甲胎蛋白等 ,。 ,这些物质会与试剂中的抗原成分 非特异结合,从而发生假阳性。文中笔者可以看到 假阳性组心血管疾病患者占了41.6%,其次是肿瘤 占23.5%。老年患者是这些疾病的高发人群,这也 正是老年患者假阳性率高的另一个原因。 3.3 S/CO值切点的设定对实验结果的评判十 分重要,可以避免假阳性和假阴性的发生。Carva1. h0 研究小组将Syphilis TP与FTA—ABS、联合性 病研究实验室试验(venereal disease research labora. tory,VDRL)比较,发现假阳性标本的S/CO值一般 为1.0~5.0,建议临床实验室可以将S/CO的切点 值定在5.0以提高特异性。本实验阳性组的标本 S/CO值全部都大于5.0,假阳性组患者S/CO的值 不高,72.1%小于5.0。因此,我实验室试着将切点 S/CO值定在5.0,假阳性组的梅毒特异性抗体实验 的结果呈阴性,这样Syphilis TP与TPHA的结果比 较差异无统计学意义(P>0.05)。 3.4判定标准与检验程序 本实验选取TPHA作 为标准,并不认为其为梅毒特异性抗体的金标准,只 是将TPHA相对标准作为参照。目前,TPHA的金 标准应是荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA— ABS)L 8 3,但由于试验过程繁琐,技术要求高,需要荧 光显微镜等诸多因素,临床常不开展此项检测。围 678 医学2011年8月 第22卷第8期Med J Chin PAPF.Vt 1.22,N c,.8 内大多数实验室都是以TPPA、TPHA作为确认实 mong homosexually active 验,两者的敏感性和特异性相似 。因此,假阳性 组的似阳性也只是相对的。文献[10]报道化学发 2005,183(4):179—1 83. [2] 鹿新红,札敏.抗梅毒螺旋体抗体…性 ‘卜人什 光敏感度高于TPHA,尤其是诊断I期梅毒和隐性 梅毒。化学发光检测梅毒特异性抗体还有待进一步 的研究,但在日常工作中将Syphilis TP检测作为梅 毒筛查的检测,避免了TPHA耗时长,结果判定难以 自动化,须依靠肉眼判断且不易保存等缺点,适用于 中的价值分析[J].rrl目误诊杂志,2008,8(25):6094 —6095. TP—ELISA法检洲老年人梅毒抗体 l 3] 工柳溪.阳性原冈分析[J].医学理沦 j实践,2008,(21)9: 1805一l806. [4] 武建围.老年人抗梅毒螺旋体抗体测定的似…件 高[J].临床检验杂志,2006,24(4):241—243 大规模标本的筛查。当Syphilis TP为阳性(尤其是 S/CO值为l1.0~5.0的标本)要综合考虑患者的年 龄、病史,以及临床表现,可再用TPHA做复检,如两 者均为阳性再报阳性,这样大大减少了假阳性的发 生,降低了医疗纠纷的可能。 目前,梅毒检验程序缺少标准化操作规程,对于 检测阳性的老年患者也无法去深究其病史。国内并 [7] [5] 廖朝晖,陈民,黄逊华,等. 性肿 协 施 体抗体生物学似l}】性分析 j . 川预防 、 .2004, 11(1):63—64. l 6] Augenbraun M.Frem h A.Glesby~I.f,£n .}|epatii>f,( virus infection and biological thlse—positive phil b- tests[J].Sex Transm Infect,2010,86(2):97—98 Cmwalho I .Largura A.Santanna J,‘ £a1. ,Xut()jlia r< (1 未 一个系统的检测流程,尤其是本研究中此类 [8] cheiniluminescent assay for screening tJf syptiflls J .( I 术前筛查的患者(患者大多数都是既往感染,无临 床症状)。这就对梅毒检测的标准化提出了要求。 目前梅毒抗体检测的众多方法中仍没有一个权威的 金标准,不同文献中用以比对的标准方法各有不同, Chem Lab Med,2008,46(1):[>pSI一¥859 Marangoni A,M()r(mi A.Accar(h)S,rl Hf.I cIl}{mj[Ol、 diagnosis of syphilis with autonlatc(1_IIlInunoa:ssays J .j Clin Lab Anal,2009,23(1):1—6. 任何一种方法都有一定的局限性。化学发光法的灵 敏度较高,而特异性相对较低。笔者认为,当Syphi— [9] 程艳杰,工广杰, (19)8:503—504. 旭,等.桁蓐螺旋体 消 、 :协川 疗法的实验室 价l J].叶lH皮肷性病 杂志,2005, l l0] lis TP为弱阳性时,应用另外的一种梅毒特异性抗 体的检测方法复检,若两者均为阳性,即可报阳性, 若两者的结果不一致,可用第3种方法检测,并结合 临床,对患者作出诊断。 Young H,Pryde J,1)uncan I ,f,£“』.T A J’chitet:t ph ills assay for antibodies to_rreport( ̄llla pallidum:ali ̄l/l[O— mated screening assay with high sensitivity in IJrinun’ syphilis[J].Sex Transm Infect,2(X)9,85(1):19—23. (201 一()2—07收稿201,一D5一,9修I- 1) ( 仟编辑 建 ) 【参考文献】 [1]Jin F,Preslage G P,Kippax S C.Epidemic syphilis a (上接675页) [3 j 兴半,夏隆庆.痤疮患者痤疮丙酸杆菌耐药性的研 究进展[J].国外医学皮肤性病学分册,2004,30(3): l52. 病杂志,2006,22(10):840 842. [8] Arakane K,Ryu A,Hayashi C,et a1.Singlet.() y f1(1 deltag)generation from coproporphyrin in propioo Jbacl rium acnes on ivvadiation J.Biochen1 BioI3hys th・ [4] Faub A F.Procedural treatments fUr acne vulgaris[J]. Dermatol Surg,2007,33(9):1005—1026. Commum.1996,223(3):578. [9] 张志礼.实用巾医外科学[M .f 海:科 、 技术…版 社,1987:535. [5] Barolet D.Light—emitting diodes(LEDs)in dermatology [J].Semin Cutan Med Surg,2008,27(4):227—238. [6] E丹妮,杨舂俊,张学军.痤疮的光学治疗[J].中国美 容医学,2008,17(11):1700—1702.  M].北 :人i : [10] 张志礼.张志礼医话验案精选l出版卒十,2009:154. (2011—02—13收稿2011—04 30修【, j) (贵仟编辑粱秋野) [7]林彤,周展超.痤疮的光学治疗[J].中国麻风皮肤 

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