油菜种质资源遗传多样性的研究方法

★本刊支持单位　安徽省中东种业有限公司瑟　斋篙臻盏　舞　场总￣经理，‘０５嗣５守１－４年２３４ｌ７９　种质资源遗传多样性的研究方法　刘兵　郭家保　２４１１Ｏ０）　（安徽省芜湖县种子公司　安徽芜湖贡是遗传育种的物质基础。世界育种史上，关键性基因种　拘发现往往伴随着品种改良的突破性进展，如２Ｏ世纪６ｏ　胡波兰甘蓝型油菜品种Ｂｒｏｎｏｗｓｋｉ低硫苷源的发现，７Ｏ年　野败雄性不育和油菜Ｐｏｌ　ＣＭＳ的发现和利用等。对油菜种　宣传多样性的合理评价是有效利用的前提，而且遗传多样　泣唷利于制定正确的种质资源收集和保存的策略及鉴定　４．１　ＲＦＬＰ　１９８０年Ｂｏｓｔｅｉｎ提出了ＲＦＬＰ标记方法。其基本原理是由于　ＤＮＡ存在不同，或ＤＮＡＪ￣＇ｉ］发生插入、缺失、易位等结构变化，从　而造成性内切位　发生改变当与性内切酶相互作用后，　便会产生不同长度性片段通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ吸印，ＤＮＡ探针的制　备、同位素标记及分子杂交等检测其多态性。Ｄｉｒｅ等（１９９４）采　用ＲＦＬＰ技术对８３个甘蓝型油菜品种进行了聚类分析，并将之分　为三大类型，即春油菜类群、冬油菜类群、及中国一日本油菜类　群，该分类结果与已知系谱大致相符。孟金陵等（１９９６）也运用　多样性中心，也为研究植物起源进化开辟了新的道路。　质资源作为品种改良的物质基础，其作用越来越为广　家所重视，对种质资源认识的广度与深度与亲本的选　交组合的配制有着至关重要的作用，因此对种质资源　也就成了育种工作不可或缺的重要一环，我国油菜种　的研究方法主要有以下几个方面：　莛种质资源的形态学研究　态学研究是根据生物特定的形态特征，利用数量遗传学　采用生物统计的方法对种质资源进行研究。形态学研究　资源研究的基础领域。为油菜种质资源的分类提供了基　，该技术进行了油菜遗传多样性的研究，同样得到了类似的结果。　Ｔｅｒｏｓｅｒ等（１９９５）采用ＲＦＬＰ标记，对甘蓝型油菜控制硫甙含量　的基因进行了定位，结果将两个主要控制位点ＧｓＬ＿１，ＧＳＬ－２分别　定位于ＬＧＯ，ＬＧ１。Ｃｈｅｕｎｇ等（１９９７）用ＲＦＬＰ技术构建了３４３个　ＲＦＬＰ标记芥菜型油菜的遗传图谱，为辅助选择育种提供了主要　的理论参考。Ｌｅａｎ等（１９９７）找到了与Ｐｏｌ　ｃｍｓ恢复基因Ｒｆｐｌ紧　密连锁的一个ＲＡＰＤ标记和１Ｏ个ＲＦＬＰ标记，１９９８年他们又用ＲＦＬＰ　到目前为止，油菜形态学研究已积累了大量资料。　标记和ＲＡＰＤ标记将Ｐｏｌ　ｃｍｓ的恢复基因Ｒｆｐｌ进行了定位。　ＲＦＬＰ标记的优点是不受环境条件和发育阶段的影响，无　蹇种质资源的细胞学研究　胞学研究是利用生物所具有的染色体数目、核型和带　胞学特征。根据细胞遗传学原理采用显微镜技术，对种　进行研究。２Ｏ世纪３Ｏ年代中后期随着细胞遗传学的迅　，．表型效应，结果稳定，重复性强，缺点是该技术对ＤＮＡ要求较　高，要求ＤＮＡ纯度较高，使用的同位素标记对人体有害，所花　费的人力、物力较大。　４．２　ＡＦＬＰ　●　日本学者盛永俊太朗和禹长春在总结他们研究成果　上，完成了芸薹属植物中主要种的染色体组成的分析，　‘薹属植物染色体组的亲源关系假说。禹长春把这个假　：化为三角形图即禹氏三角，用以表明芸薹属植物中与　关的各个物种之间的亲缘关系。　种质资源多样性的同工酶研究　工酶是生物体内所具有的功能相同，而分子结构和理　不同的酶类。近年来蛋白质和同工酶模式在芸薹属中　该技术是Ｖｏｓ等于１９９２年发明的一项选择性扩增ＤＮＡ片　段的方法，其基本原理是将ＤＮＡ用可产生粘性末端的性内　切酶消化产生大小不同的酶切片段，与含有共同粘末端的人　工接头连接，作为进一步扩增的模板。实验中，根据需要通过　选择在末端上分别增加了１～３个选择性核苷酸的不同引物，　这样使得引物能选择性识别具有特异配对顺序的内切酶片段，　然后把扩增的酶切片段在高分辨率的的顺序分析胶上电泳，　产生扩增片段长度不同的多态性带型。ＡＦＬＰ标记实际是ＲＦＬＰ　来进行分类研究、鉴别种间关系和种质资源的多样性　利用蛋白质和同工酶技术进一步证实了盛永俊太郎和　：的结论，因为蛋白质和同工酶是基因表达密切联系的　可以作为很好的遗传标记．　胃分子标记技术研究油菜种质资源的多样性　－子标记是以ＤＮＡ多态性为基础的遗传标记，２Ｏ世纪８Ｏ　、和ＰＣＲ相结合的一种产物，所需的ＤＮＡ量少，不需Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　杂交，实验结果稳定可靠，重复性强呈典型的孟德尔遗传，每　个ＡＦＬＰ反应可以检测的位点多达５０￣１００个，多态性很强，非　常适合遗传多样性分析、种质鉴定、基因定位、快速构建遗传　图谱等研究，如在ＲＦＬＰ多态性很差的大麦中进行ＡＦＬＰ分析，　只用１６个引物就定位了１１８个位点。美国的Ｂｌａｉｒ利用ＡＦＬＰ　来在种质资源的遗传多样性研究方面得到了广泛的应　示出了独特的特点。其特点是直接以ＤＮＡ的形式存在，　：量无限，遍布于整个染色体组，标记位点非常丰富，性　，技术研究５４份水稻品种的系统发育和分类，并用同工酶研究　得出的结果进行比较，认为二者不仅结论一致，并且ＡＦＬＰ多　，不受环境条件影响，许多标记是共显性标记，分子标　研究水稻的遗传变异和构建基因组图谱十分理想。　ＡＦＬＰ技术的缺点是需要同位素检测，费用昂贵，对操作　：据不同的研究手段分为以下类型。　维普资讯 http://www.cqvip.com

本刊支持单位　安徽远程喷码科技有限公司耄　Ｉ高　盏　｜！鑫　ｆ　一　ｇ；Ｊ２赭。２；赢。　怀宁县无公害优质水稻　标准化生产栽培技术　陈彦楼　刘立中２　（　安徽省怀宁县公岭农技站安徽怀宁　２４６１Ｏ０。怀宁县农技推广中心　）　近年来，随着高产优质品种的推广、粮食产量逐年提高，　元素丰富、平衡。　粮食买方市场的形成，粮食生产已从量的扩张转入质的提高，　１．３　示范基地的选择　城乡居民对食用稻米，不仅要求优质，而且要求安全卫生。为　示范基地要选择无废气、无废水、无污染或污染轻的地　此，无公害优质稻米越来越受到市场的青睐。　区。基地周围必须远离砖瓦厂、磷肥厂等有污染源的工矿企　无公害稻米是指栽培过程中经过一些相应措施，即对农　业。灌溉用水以自然积水如山涧水、天然水库等水源为主，从　药、施肥和环境污染进行控制，使稻米中不含有有害物质或把　而防止废气、废水污染。　它控制在某些规定的允许范围内，从而达到食用安全标准。　２　品种选择　１　自然生态条件的选择　高产优质抗病是无公害优质水稻的首选品种。这样生产　１．１　气候条件　出来的米价值高。无公害稻米以食为主，应选择米质软硬适　无公害优质稻米的生产要求阳光充足，雨量充沛，后期温　中、口感好、风味佳，稻谷质量应符合ＧＢ／Ｔ１７８９１—１９９９的一、　度不宜过高，昼夜温差较大的气候条件，尤其是水稻抽穗扬花　二级优质稻谷标准，且产量、抗性等综合性状好的水稻品种，　期与灌浆实期的温度条件。水稻抽穗扬花最适温度２４－－．－２８。Ｃ，　同时，品种选择也要考虑本地的气候条件和土壤条件。我县根　灌浆结实最适宜温度２２～２８。Ｃ，相对湿度７５％左右。根据怀　据安徽沿江地区的生态特点及稼仙米业订单种植对品种的选　宁县历年气候特点，早稻抽穗扬花期安排在６月中旬，灌浆结　择要求是：早稻选用生育期１ｌＯｄ左右的品种。香两优６８、早　实期安排在６月下旬比较适宜；中、单晚稻抽穗扬花期期应安　杂协优９４７（三系）、嘉育９４８、浙９２４８等；中、单、晚选用　排在８月２Ｏ日前后，灌浆结实期应安排在８月底至９月初比较　生育期１４０ｄ左右的品种两优培九、协优组合和粤优９３８等；双　适宜；双季稻抽穗扬花期应安排在９月１ｏ日左右，灌浆结实　晚选用生育期１３０ｄ左右的培两优２８８、皖稻４８（７ｏ优双九）和　期应安排在９月２Ｏ日前后比较适宜。　金优组合等。　１．２土壤条件　３播种与育秧　无公害水稻生产的土壤条件要求相对较高：一般土壤有　生产无公害优质稻米播种期的选择至关重要，要根据当地　机质含量在２．５％以上，氮、磷、钾含量中等以上，其他营养　的气候特　，结合茬口安排，并保证在当地最佳季节抽穗结实。　＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠＠　人员素质及ＤＮＡ质量要求较高　样性进行了分析，结果显示，２２条引物在１０６份白菜型油菜中　４．３　ＲＡＰＤ　共扩增出了２３６条带，多态性位点比率为８９％；２４条引物在５ｏ　Ｐ＆ＰＤ技术由ＷｉＩＩｉａｍｓ和Ｗｅｌｓｈ首先提出，是利用一个随　份芥菜型油菜扩增出２７６条带，多态性位点比率为９４％。　机引物（一般８～１ｏ个碱基）非定点地扩增ＤＮＡ片段。与一般　通过ＵＰＧＭＡ聚类分析，将白菜型油菜分为两个类群；芥菜　的ＰＣＲ扩增相比，ＲＡＰＤ有以下特点：（１）ＲＡＰＤ引物是１个１０ｂｐ　型油菜分为四个类群。品种吉西肥，既不属于白菜型油菜又不　的随机引物，常规ＰＣＲ需用２个２０　ｂｐ左右的特定设计引物；　属于芥菜型油菜，可能属于芸薹属的另一类。　（２１　ＲＡＰＤ反应退火温度较低，一般在３６。Ｃ左右，一方面保证　ＲＡＰＤ标记为显性标记，不能有效鉴别杂合子；易受反应　引物与模板的稳定配对，同时允许适当的错误配对，提高检出　条件的影响，稳定性较差。但如果把条件标准化，还是可以获　率。ＲＡＰＤ标记检测灵敏、方便、多态性强，可以检测出ＲＦＬＰ　得重复结果。　标记不能检测的重复顺序区，可填补ＲＦＬＰ图谱的空缺，适用　５参考文献　于种质资源鉴定和分类、目标性状基因的分子标记、遗传图谱　【ｌ】胡志昂．检测植物ＤＮＡ扩增多态性方法的比较和改进　的快速构建等研究。如：１９９７年伍宁等，对我国７省市和国外　【Ｊ】．植物学报．１９９７，３９（２）：１４４—１４８　引进的总计４ｏ份甘蓝型油菜品种的遗传多样性进行了研究。　【２】刘旭泽．种质资源鉴定的一种分子遗传技术标准：随机　结果表明，４Ｏ个品种的甘蓝型油菜着广泛的遗传变异，ＲＡＰＤ　扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）【Ｊ】．生物技术通报．１９９７，５：３７－４１　指纹图谱通过在ＤＮＡ分子水平上的聚类分析可以将他们分为３　【３】安贤愿等．芥菜型油菜种质资源遗传多态性及其起源　大类群，反映出这些品种之间的亲缘关系，并对如何引进甘蓝　进化的初步研究【Ｊ】．华中农业大学硕士论文，１９９９　型油菜资源进行了探讨。２００３年，旦巴等采用ＲＡＰＤ分子标记，　【４】汪小金等．ＲＡＰＤ应用于遗传多样性和系统学研究的问　对地区部分白菜型油菜和芥菜型油菜资源进行的遗传多　题【Ｊ】．植物学报．１９９６，３８（２）：９５６—９６２　３５