薄层色谱法标准操作规程

文件编 SOPZL2002/06 号 文 件名 称 审核 人 审核日 期 生效日 期 薄层色谱法标准操作规程 批准人 批 准日 期 制 定部 门 序页/总页 1/5 制定人 质量部 制定日 期 发布日 期 颁发部 质量部，QC,QA 门 1、目的

规范薄层色谱检测方法。 2、范围

适用于药品主要成分与杂质通过薄层层析后能够相分离的药品。 3、责任人

QC人员对本规程实施负责。 4、程序 4.1简述

薄层色谱法（中国药典2005年版二部附录ⅤB），系将供试品溶液点样于薄层板上，经展开、检视所得的色谱图，与适宜的对照药物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描。用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。

4.2、仪器与材料 4.2.1、薄层板

4.2.1.1、自制薄层板 除另有规定外，玻板要求光滑、平整、洗净后不附水珠，晾干。薄层涂布，一般可分为无黏合剂和含黏合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻板上，反者系在固定相中加入一定量不得黏合剂，一般常用10%~15%煅石膏（CaSO4.H2O在140℃加热4小时），混匀后加水适量使用，或用0.2%~0.5%羧甲基纤维素钠水溶液（取羧甲基纤维素钠适量，加水适量，加热煮沸至完全溶解）适量，调成糊状，均匀涂布于玻板上。使用涂布器应使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。

4.2.1.2、市售薄层板 分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶GF2

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文件编号 SOPZL2002/06 文 件 名 称 薄层色谱法标准操作规程 序页/ 总页 2/5 薄层板、聚酰胺薄膜和铝基片薄层板等。

4.2.2、点样器 有手动、半自动或自动点样器，一般采用微量注射器或定量毛细管。

4.2.3、展开容器 应使用适合薄层板大小的专用薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，底部应平整光滑，或有双槽。

4.2.4、显色剂 按各品种项下规定。可采用喷雾显色、浸渍显色或置碘蒸气中显色，检出斑点。

4.2.5、显色装置 喷雾显色可使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器皿或适宜的玻璃缸代替，碘汽熏碘显色可用双槽玻璃缸或适宜大小的干燥器代替。

4.2.6、检视装置 为装有可见光、短波紫外光（2nm）、长波紫外光（365nm）光源及相应滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱图用，暗箱内光源应有足够的光照度。 4.3、操作方法 4.3.1 薄层板的制备

4.3.1.1自制薄层板 除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度0.25～0.5mm）取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视），表面应均匀、平整、光滑，无麻点，无气泡，无破损及污染。

4.3.1.2、市售薄层板 临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板的底边的硅胶层不得有破损，如在储放期间被空气中杂质污染，使用前可用适宜的溶剂在展开容器中上行展开预洗，110℃活化后，放在干燥器中备用。

4.3.2、点样：除另有规定外，在洁净干燥的环境下，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，应能使点样位置正确、集中。点样基线距底边2.0cm（高效薄层板一般为0.8~1.0cm），样点直径2～4mm（高效薄层板一般不大于2mm）,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般为1.0～2.0cm（高效薄层板一般不

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文件编号 SOPZL2002/06 文 件 名 称 薄层色谱法标准操作规程 序页/ 总页 3/5 少于0.5cm），点样时勿损伤薄层表面。

4.3.3 展开 层析缸如需先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，并在壁上贴两条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封缸顶的盖，使系统平衡或按品种规定操作。

将点好样品的薄层板迅速放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点0.5~1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封盖顶，待展开至规定距离（一般为10~15cm），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。

展开可以向一个方向进行，即单向展开；也可以进行双向展开，即先向一个方向展开，取出，待展开剂完全挥发后，将薄层板转动900，再用原展开剂或另一种展开剂进行展开；亦可多次展开。

4.3.4、显色与检视 荧光薄层板可用荧光淬灭法；普通薄层板，有色物质可在日光下直接检视；物色物质可用物理或化学方法检视。物理方法是检出斑点的荧光颜色及强度；化学方法一般用化学试剂显色后，立即覆盖同样大小的玻板，在日光下直接检视，无色物质可用物理或化学方法检视，物理方法是检出斑点的荧光颜色及强度；化学方法一般用化学试剂显色后。立即覆盖同样大小的玻板，在日光下检视。

4.4、系统适用性试验

按各品种项下要求对检测方法进行系统适用性试验，检测斑点的检测灵敏度、比移值（Rf）和分离效能应符合规定。

4.4.1、检测灵敏度 用于杂质检查时，采用对照溶液经稀释若干倍的溶液与供试品溶液和对照溶液在规定的色谱条件下，在同一块薄层板上点样、展开、检视，前者应显示清晰的斑点。

4.4.2、比移值（Rf计算从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂前沿的距离的比值），按下式得出个斑点的Rf值。

从基线至展开斑点中心的距离

Rf=—————————————

从基线至展开剂前沿的距离

可用计算供试品溶液主要斑点与对照品溶液主要斑点的比移值进行比较，或用比移值来说明主斑点或杂质斑点的位置。

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文件编号 SOPZL2002/06 文 件 名 称 薄层色谱法标准操作规程 序页/ 总页 4/5 4.4.3、 分离效能 鉴别时，对照品与结构相似的药物对照溶液按规定方法展开后，应显示两个清晰分离的斑点。杂质检查时，杂质对照品与主要成分制成的混合对照溶液按规定方法展开后，应显示两个清晰分离的斑点，或待测成分与相邻的斑点应清晰分离。 4.5、测定法

4.5.1、鉴别 可采用与用浓度的对照品溶液，在同一块薄层板上点样、展开与检视，供试品溶液所显主要斑点的位置（Rf）与颜色（或荧光）应与对照品溶液的主要斑点一致，而且主斑点的大小、颜色的深浅也应大致相同。或采用供试品溶液与对照品溶液等体积混合，应显示单一、紧密的斑点；或选用与供试品化学结构相似的药物对照品与供试液的主斑点比较，两者Rf值应不同；或将上述两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点。

4.5.2、杂质检查，可采用杂质对照品法、供试品溶液的自身稀释对照法或杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用。供试品溶液除主斑点外的其他斑点应与相应的对照品溶液或系列对照品溶液的主斑点比较，或与供试品溶液的自身稀释对照溶液或系列自身稀释对照溶液的主斑点比较，不得更深。

通常应规定杂质的斑点数和单一杂质质量，当采用系列自身稀释对照溶液时，也可规定估计的杂质总量。 4.6、注意事项

4.6.1、薄层板的活化与保存 自制薄层板和市售薄层板在使用前均应进行活化，活化后的薄层板应立即置于有干燥剂的干燥器中保存，保存时间不宜过长，最好随用随制，放入干燥箱中保存仅作为使用前的一种过渡。

4.6.2、供试液的制备 溶剂选择是否适当影响点样原点及分离后斑点的形状，一般应选择极性小的溶剂；只有在供试品极性较大，薄层板的活性较大时，才选择极性大的溶剂。除特殊情况外，试液的浓度要适宜，最好控制在使点样量不超过10uL。

4.6.3、点样 薄层板上样品容积的负荷量极为有限，普通薄层板的点样量最好在10uL以下，高效薄层板在5uL以下。点样量过多可造成原点“超载”，展开剂产生绕行现象，使斑点拖尾。点样速度要快，在空气中点样以不超过10分钟为宜，以减少薄层板和大气的平衡时间。点样时必须注意勿损坏薄层表面。

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文件编号 SOPZL2002/06 文 件 名 称 薄层色谱法标准操作规程 序页/ 总页 5/5 4.6.4、点样环境 实验环境的相对湿度和温度对薄层分离效果有着较大的影响（实验室一般要求相对湿度在65%以下为宜），因此应保持实验环境的相对恒定。对温、湿度敏感的品种必须按品种项下的规定，严格控制实验环境的温、湿度。 4.6.5、展开 展开缸预先饱和可避免边缘效应，展开距离不宜过长，通常为10~15cm。

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