(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 110927316 A(43)申请公布日 2020.03.27
(21)申请号 201911246596.2(22)申请日 2019.12.09
(71)申请人 广东一方制药有限公司
地址 528000 广东省佛山市南海区里水镇
旗峰工业开发区(72)发明人 童培珍 李振雨 曹斯琼 何嘉莹
潘礼业 魏梅 孙冬梅 陈向东 程学仁 (74)专利代理机构 广州一锐专利代理有限公司
44369
代理人 杨昕昕 董云(51)Int.Cl.
G01N 30/88(2006.01)G01N 30/06(2006.01)G01N 30/34(2006.01)
权利要求书1页 说明书12页 附图13页
G01N 30/72(2006.01)G01N 30/86(2006.01)
CN 110927316 A(54)发明名称
一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法
(57)摘要
本发明涉及中药鉴定领域，提供一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法，用于建立白
本发明提供的一茅根及其标准汤剂的特征图谱。
种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法，包括：S11.取白茅根或其标准汤剂的其中一种，处理后加入溶剂进行提取，得到供试品溶液；S12.取绿原酸，加入溶剂制成对照品溶液；S13.取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱中，获取特征图谱。本发明同时以白茅根对照药材、绿原酸对照品为参照物，配合合适的色谱条件，通过对白茅根药材和白茅根标准汤剂图谱的比较确定白茅根药材UPLC特征图谱。该特征图谱不仅能用于定性、定量分析白茅根药材的质量，而且能够确保采用该药材制备的白茅根传统汤剂的质量，也适用于检测汤剂的质量。
CN 110927316 A
权 利 要 求 书
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1.一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法，其特征在于，包括：S11.取白茅根或其标准汤剂的其中一种，处理后加入溶剂进行提取，得到供试品溶液；S12.取绿原酸，加入溶剂制成对照品溶液；
S13.取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱中，获取特征图谱。2.根据权利要求1所述的一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法，其特征在于，所述S11步骤中的标准汤剂包括但不限于白茅根标准汤剂。
3.根据权利要求2所述的一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法，其特征在于，所述溶剂为10~50%的甲醇。
4.根据权利要求1所述的一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法，其特征在于，所述S11步骤中，取白茅根或其标准汤剂的其中一种的粉末，过筛后称量0.1~1g，加入10~50%的溶剂20~30mL，定量后加热回流30~90min，冷却，用溶剂补足减失的重量，摇匀后过滤，滤液即为供试品溶液。
5.根据权利要求1所述的一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法，其特征在于，所述S11步骤中，取白茅根或其标准汤剂的其中一种的粉末，过筛后称量0.01~1g，加入5~50%的溶剂10~20mL，定量后超声处理15~45min，冷却，用溶剂补足减失的重量，摇匀后过滤，滤液即为供试品溶液；所述超声处理的功率为300W，频率为40kHz。
6.根据权利要求1所述的一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法，其特征在于，所述S13步骤中液相色谱的色谱条件为：色谱柱，ACQUITY UPLC BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm）；进样量，1~5μL；流速，0.1~0.5ml；柱温，30~50℃；检测波长，320~330nm；甲醇为流动相A，以0.05~0.2%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱。
7.根据权利要求6所述的一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法，其特征在于，所述色谱条件中进样量为2μL；流速为0.32ml/min；柱温为40℃；检测波长为325nm。
8.根据权利要求6所述的一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱为：0~4min，4%流动相A，96%流动相B；4~12min，4%→7%流动相A，96%→93%流动相B；12~15 min，7%→10%流动相A，93%→90%流动相B；15~30 min，10%→18%流动相A，90%→82%流动相B；30~30.1min，18%→90%流动相A，82%→10%流动相B；30.1~37 min，90%流动相A，10%流动相B；37~37.1 min，90%→4%流动相A，10%→96%流动相B；37.1~44 min，4%流动相A，96%流动相B。
9.根据权利要求1所述的一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法，其特征在于，还包括：
S14. 所述供试品溶液和所述对照品溶液经液相色谱分离后，注入质谱中，所述质谱的条件为氮气作为质谱离子源的雾化和干燥气；电喷雾电离正、负离子模式；喷雾电压，2.5~3.5 KV；Lens电压，49~51 V；脱溶剂气温度，350~450℃；鞘气压力，39~41Arb；辅助气压力，11~13Arb；质荷比范围，100~1000；数据采集模式，centroid。
10.根据权利要求1所述的一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法，其特征在于，所述对照品溶液中绿原酸的浓度为5~20μg/mL。
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说 明 书
一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法
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技术领域
[0001]本发明涉及中药鉴定领域，具体涉及一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法。
背景技术
[0002]白茅根为禾本科植物白茅Imperata cylindrica Beauv. var. major（Nees）C. E. Hubb. 的干燥根茎。具有凉血止血，清热利尿的功效，用于血热吐血、尿血、衄血、热病烦渴、黄疸、水肿、热淋涩痛，急性肾炎水肿等症。[0003]白茅根的药用活性成分有多种，主要成分为绿原酸。作为常用的药材质量的衡量指标，绿原酸具有多种生物活性，包括、抑菌、消炎、抗肿瘤以及抗氧化作用等。其具有较强的临床应用价值，市场需求广阔，被开发成中药配方颗粒及相关复方制剂广泛用于临床。中药的临床使用多以传统汤剂为主。中药汤剂的物质基础，是中医理论指导下防治疾病的基础。现阶段研究大部分停留在针对单一成分进行定量控制，量效关系不能全面反映中药成分的整体作用。在现阶段，中药绝大多数有效成分未明确的情况下，中药指纹图谱/特征图谱的建立能大大提高中药质量控制的技术水平及科技含量。在2015年版的药典中，没有对白茅根药材进行质量方面的控制，只是就性状和鉴别进行了描述，无指标成分的含量测定。因此，建立白茅根药材特征图谱和检测方法对白茅根药材质量控制有重要意义。[0004]目前，已存在一些HPLC法测定白茅根药材中绿原酸的含量及其指纹图谱，其方法复杂，难以做到高效、快速分离。因此，本发明通过采用超高效液相色谱法建立白茅根药材特征图谱和检测方法。
发明内容
[0005]本发明解决的技术问题为建立白茅根及其标准汤剂的特征图谱，提供一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法。[0006]为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：
一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法，包括：S11.取白茅根或其标准汤剂的其中一种，处理后加入溶剂进行提取，得到供试品溶液；S12.取绿原酸，加入溶剂制成对照品溶液；
S13.取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱中，获取特征图谱。
[0007]通过建立特征图谱的方式来检测白茅根药材或标准汤剂的质量可以准确对指标成分进行含量检测。
[0008]通过简单的方法实现了白茅根药材中指标成分的高效、快速分离。[0009]优选地，所述S11步骤中的标准汤剂包括但不限于白茅根标准汤剂。白茅根的标准汤剂，尤其是白茅根标准汤剂，可以用特征图谱的方式进行品质检测。[0010]优选地，所述溶剂为10~50%的甲醇。甲醇可以最大限度的从白茅根药材或其标准汤剂中提取成分。
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说 明 书
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优选地，所述S11步骤中，取白茅根或其标准汤剂的其中一种的粉末，过筛后称量
0.1~1g，加入10~50%的溶剂20~30mL，定量后加热回流30~90min，冷却，用溶剂补足减失的重量，摇匀后过滤，滤液即为供试品溶液。对药材或者标准汤剂进行前处理，可以更高效的提取有效成分。
[0012]优选地，所述S11步骤中，取白茅根或其标准汤剂的其中一种的粉末，过筛后称量0.01~1g，加入5~50%的溶剂10~20mL，定量后超声处理15~45min，冷却，用溶剂补足减失的重量，摇匀后过滤，滤液即为供试品溶液；所述超声处理的功率为300W，频率为40kHz。对药材或者标准汤剂进行前处理，可以更高效的提取有效成分。[0013]优选地，所述S13步骤中液相色谱的色谱条件为：色谱柱，ACQUITY UPLC BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm）；进样量，1~5μL；流速，0.1~0.5ml；柱温，30~50℃；检测波长，320~330nm；甲醇为流动相A，以0.05~0.2%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱。对色谱条件进行优选，可以提高分离效率，得到更为清晰的特征图谱。[0014]优选地，所述色谱条件中进样量为2μL；流速为0.32ml/min；柱温为40℃；检测波长为325nm。对于白茅根药材，可以通过优化色谱条件，提高分离效果。[0015]优选地，所述梯度洗脱为：0~4min，4%流动相A，96%流动相B；4~12min，4%→7%流动相A，96%→93%流动相B；12~15 min，7%→10%流动相A，93%→90%流动相B；15~30 min，10%→18%流动相A，90%→82%流动相B；30~30.1min，18%→90%流动相A，82%→10%流动相B；30.1~37 min，90%流动相A，10%流动相B；37~37.1 min，90%→4%流动相A，10%→96%流动相B；37.1~44 min，4%流动相A，96%流动相B。梯度洗脱可以更高效的分离供试品溶液中各种组分，增加灵敏度。
[0016]优选地，还包括：
S14. 所述供试品溶液和所述对照品溶液经液相色谱分离后，注入质谱中，所述质谱的条件为氮气作为质谱离子源的雾化和干燥气；电喷雾电离正、负离子模式；喷雾电压，2.5~3.5 KV；Lens电压，49~51 V；脱溶剂气温度，350~450℃；鞘气压力，39~41Arb；辅助气压力，11~13Arb；质荷比范围，100~1000；数据采集模式，centroid。通过质谱分析，明确分离出的各物质的是哪种物质，提高检测结果的准确性。[0017]优选地，所述对照品溶液中绿原酸的浓度为5~20μg/mL。[0018]与现有技术相比，本发明具有的有益效果为：本发明同时以白茅根对照药材、绿原酸对照品为参照物，配合合适的色谱条件，通过对白茅根药材和白茅根标准汤剂图谱的比较确定白茅根药材UPLC特征图谱。该特征图谱不仅能用于定性、定量分析白茅根药材的质量，而且能够确保采用该药材制备的白茅根传统汤剂的质量，也适用于检测汤剂的质量。[0019]具体地，本发明在构建白茅根药材UPLC特征图谱的过程中：通过合适的色谱条件，在构建白茅根药材UPLC特征图谱时引入白茅根标准汤剂的特征图谱进行比较分析，针对其汤剂与药材共有的水溶性成分特征成分进行研究，并作为白茅根药材特征图谱特征峰确定的依据，并且水溶性成分色谱峰实现较好分离，特征图谱信息丰富，色谱峰形好。附图说明[0020]图1 为21批次白茅根标准汤剂UPLC特征图谱。[0021]图2 为白茅根标准汤剂UPLC对照特征图谱。
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说 明 书
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图3 为21批白茅根药材UPLC特征图谱。
[0023]图4 为白茅根药材UPLC对照特征图谱。[0024]图5 为白茅根标准汤剂和药材UPLC对照特征图谱对比图。[0025]图6 为白茅根标准汤剂供试品溶液测定结果图（ESI+离子流图/ESI-离子流图/UV325nm 色谱图）。[0026]图7 为图6中峰1离子流图。[0027]图8 为图6中峰1一级质谱图（ESI+模式）。[0028]图9 为图6中峰1二级质谱图（ESI+模式）。[0029]图10 为图6中峰2离子流图。[0030]图11 为图6中峰2一级质谱图（ESI+模式）。[0031]图12 为图6中峰2二级质谱图（ESI+模式）。[0032]图13 为图6中峰3离子流图。[0033]图14 为图6中峰3一级质谱图。[0034]图15 为图6中峰3二级质谱图。[0035]图16 为图6中峰4离子流图。[0036]图17 为图6中峰4一级质谱图（ESI+模式）。[0037]图18 为图6中峰4二级质谱图（ESI+模式）。[0038]图19 为图6中峰5离子流图。[0039]图20 为图6中峰5一级质谱图（ESI+模式）。[0040]图21 为图6中峰5一级质谱图（ESI+模式）。[0041]图22 为图6中峰5二级质谱图（ESI+模式）。[0042]图23 为图6中峰6离子流图。[0043]图24 为图6中峰6一级质谱图（ESI+模式）。[0044]图25 为图6中峰6二级质谱图（ESI+模式）。[0045]图26 实施例7中的白茅根药材样品特征图谱。具体实施方式
[0046]以下实施列是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。[0047]实施例1
一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法， 包括：S11.取白茅根0.5g，加入30%的甲醇25mL，定量后加热回流60min，冷却，用溶剂补足减失的重量，摇匀后过滤，取滤液，即得到供试品溶液；
S12.取绿原酸，加入30%的甲醇制成对照品溶液，绿原酸的含量为10μg/mL；S13.取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱中，色谱条件为：色谱柱，ACQUITY UPLC BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm）；进样量，2μL；流速，0.32ml；柱温，40℃；检测波长，325nm；甲醇为流动相A，以0.05~0.2%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0~4min，4%流动相A，96%流动相B；4~12min，4%→7%流动相A，96%→93%流动相B；12~15 min，7%→10%流动相A，93%→90%流动相B；15~30 min，10%→18%流动相A，90%→82%流动相B；30~30.1min，18%→90%流动相A，82%→10%流动相B；30.1~37 min，90%流动相A，10%流动相B；
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37~37.1 min，90%→4%流动相A，10%→96%流动相B；37.1~44 min，4%流动相A，96%流动相B；获取特征图谱；
S14. 所述供试品溶液和所述对照品溶液经液相色谱分离后，注入质谱中，所述质谱的条件为氮气作为质谱离子源的雾化和干燥气；电喷雾电离正、负离子模式；喷雾电压，3.0KV；Lens电压，50 V；脱溶剂气温度，400℃；鞘气压力，40Arb；辅助气压力，12Arb；质荷比范围，100~1000；数据采集模式，centroid。
[0048]通过建立特征图谱的方式来检测白茅根药材或标准汤剂的质量可以准确对指标成分进行含量检测。通过简单的方法实现了白茅根药材中指标成分的高效、快速分离。白茅根的标准汤剂，尤其是白茅根标准汤剂，可以用特征图谱的方式进行品质检测。甲醇可以最大限度的从白茅根药材或其标准汤剂中提取成分。对药材或者标准汤剂进行前处理，可以更高效的提取有效成分。对药材或者标准汤剂进行前处理，可以更高效的提取有效成分。对色谱条件进行优选，可以提高分离效率，得到更为清晰的特征图谱。对于白茅根药材，可以通过优化色谱条件，提高分离效果。梯度洗脱可以更高效的分离供试品溶液中各种组分，增加灵敏度。通过质谱分析，明确分离出的各物质的是哪种物质，提高检测结果的准确性。[0049]实施例2
一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法， 包括：S11.取白茅根标准汤剂，研细后取0.1g，加入10%的甲醇15mL，定量后超声处理30min，冷却，用10%甲醇补足减失的重量，摇匀后过滤，滤液即为供试品溶液；所述超声处理的功率为300W，频率为40kHz；
S12.取绿原酸，加入30%的甲醇制成对照品溶液，绿原酸的含量为10μg/mL；S13.取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱中，色谱条件为：色谱柱，ACQUITY UPLC BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm）；进样量，2μL；流速，0.32ml；柱温，40℃；检测波长，325nm；甲醇为流动相A，以0.05~0.2%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0~4min，4%流动相A，96%流动相B；4~12min，4%→7%流动相A，96%→93%流动相B；12~15 min，7%→10%流动相A，93%→90%流动相B；15~30 min，10%→18%流动相A，90%→82%流动相B；30~30.1min，18%→90%流动相A，82%→10%流动相B；30.1~37 min，90%流动相A，10%流动相B；37~37.1 min，90%→4%流动相A，10%→96%流动相B；37.1~44 min，4%流动相A，96%流动相B；获取特征图谱；
S14. 所述供试品溶液和所述对照品溶液经液相色谱分离后，注入质谱中，所述质谱的条件为氮气作为质谱离子源的雾化和干燥气；电喷雾电离正、负离子模式；喷雾电压，3.0KV；Lens电压，50 V；脱溶剂气温度，400℃；鞘气压力，40Arb；辅助气压力，12Arb；质荷比范围，100~1000；数据采集模式，centroid。[0050]实施例3
一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法， 包括：S11.取白茅根，研细后取0.1g，加入10%的甲醇20mL，定量后加热回流30min，冷却，用溶剂补足减失的重量，摇匀后过滤，滤液即为供试品溶液；
S12.取绿原酸，加入30%的甲醇制成对照品溶液，绿原酸的含量为50μg/mL；S13.取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱中，色谱条件为：色色谱柱，ACQUITY UPLC BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm）；进样量，1μL；流速，0.1ml；柱温，30℃；检测
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波长，320nm；甲醇为流动相A，以0.05%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0~4min，4%流动相A，96%流动相B；4~12min，4%→7%流动相A，96%→93%流动相B；12~15 min，7%→10%流动相A，93%→90%流动相B；15~30 min，10%→18%流动相A，90%→82%流动相B；30~30.1min，18%→90%流动相A，82%→10%流动相B；30.1~37 min，90%流动相A，10%流动相B；37~37.1 min，90%→4%流动相A，10%→96%流动相B；37.1~44 min，4%流动相A，96%流动相B；获取特征图谱；
S14. 所述供试品溶液和所述对照品溶液经液相色谱分离后，注入质谱中，所述质谱的条件为氮气作为质谱离子源的雾化和干燥气；电喷雾电离正、负离子模式；喷雾电压，2.5 KV；Lens电压，49 V；脱溶剂气温度，350℃；鞘气压力，39Arb；辅助气压力，11Arb；质荷比范围，100~1000；数据采集模式，centroid。[0051]实施例4
一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法， 包括：S11.取白茅根，研细后取1g，加入50%的甲醇30mL，定量后加热回流90min，冷却，用溶剂补足减失的重量，摇匀后过滤，滤液即为供试品溶液；
S12.取绿原酸，加入30%的甲醇制成对照品溶液，绿原酸的含量为200μg/mL；S13.取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱中，色谱条件为：色谱柱，ACQUITY UPLC BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm）；进样量，3μL；流速，0.5ml；柱温，50℃；检测波长，330nm；甲醇为流动相A，以0.05~0.2%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0~4min，4%流动相A，96%流动相B；4~12min，4%→7%流动相A，96%→93%流动相B；12~15 min，7%→10%流动相A，93%→90%流动相B；15~30 min，10%→18%流动相A，90%→82%流动相B；30~30.1min，18%→90%流动相A，82%→10%流动相B；30.1~37 min，90%流动相A，10%流动相B；37~37.1 min，90%→4%流动相A，10%→96%流动相B；37.1~44 min，4%流动相A，96%流动相B；获取特征图谱；
S14. 所述供试品溶液和所述对照品溶液经液相色谱分离后，注入质谱中，所述质谱的条件为氮气作为质谱离子源的雾化和干燥气；电喷雾电离正、负离子模式；喷雾电压，3.5 KV；Lens电压，51 V；脱溶剂气温度，450℃；鞘气压力，41Arb；辅助气压力，13Arb；质荷比范围，100~1000；数据采集模式，centroid。[0052]实施例5
一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法， 包括：S11.取白茅根标准汤剂，0.01g，加入5%的溶剂10mL，定量后超声处理15min，冷却，用溶剂补足减失的重量，摇匀后过滤，滤液即为供试品溶液；所述超声处理的功率为300W，频率为40kHz；
S12.取绿原酸，加入30%的甲醇制成对照品溶液，绿原酸的含量为10μg/mL；S13.取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱中，色谱条件为：色谱柱，ACQUITY UPLC BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm）；进样量，3μL；流速，0.5ml；柱温，50℃；检测波长，330nm；甲醇为流动相A，以0.2%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0~4min，4%流动相A，96%流动相B；4~12min，4%→7%流动相A，96%→93%流动相B；12~15 min，7%→10%流动相A，93%→90%流动相B；15~30 min，10%→18%流动相A，90%→82%流动相B；30~30.1min，18%→90%流动相A，82%→10%流动相B；30.1~37 min，90%流动相A，10%流动相B；37~
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37.1 min，90%→4%流动相A，10%→96%流动相B；37.1~44 min，4%流动相A，96%流动相B；获取特征图谱；
S14. 所述供试品溶液和所述对照品溶液经液相色谱分离后，注入质谱中，所述质谱的条件为氮气作为质谱离子源的雾化和干燥气；电喷雾电离正、负离子模式；喷雾电压，3.5 KV；Lens电压，51 V；脱溶剂气温度，450℃；鞘气压力，41Arb；辅助气压力，13Arb；质荷比范围，100~1000；数据采集模式，centroid
实施例6
实一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法， 包括：S11.取白茅根标准汤剂，过筛后称量1g，加入50%的溶剂20mL，定量后超声处理45min，冷却，用溶剂补足减失的重量，摇匀后过滤，滤液即为供试品溶液；所述超声处理的功率为300W，频率为40kHz；
S12.取绿原酸，加入30%的甲醇制成对照品溶液，绿原酸的含量为10μg/mL；S13.取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱中，色谱条件为：色谱柱，ACQUITY UPLC BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm）；进样量，1μL；流速，0.1ml；柱温，30℃；检测波长，320nm；甲醇为流动相A，以0.05%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0~4min，4%流动相A，96%流动相B；4~12min，4%→7%流动相A，96%→93%流动相B；12~15 min，7%→10%流动相A，93%→90%流动相B；15~30 min，10%→18%流动相A，90%→82%流动相B；30~30.1min，18%→90%流动相A，82%→10%流动相B；30.1~37 min，90%流动相A，10%流动相B；37~37.1 min，90%→4%流动相A，10%→96%流动相B；37.1~44 min，4%流动相A，96%流动相B；获取特征图谱；
S14. 所述供试品溶液和所述对照品溶液经液相色谱分离后，注入质谱中，所述质谱的条件为氮气作为质谱离子源的雾化和干燥气；电喷雾电离正、负离子模式；喷雾电压，2.5 KV；Lens电压，49 V；脱溶剂气温度，350℃；鞘气压力，39Arb；辅助气压力，11Arb；质荷比范围，100~1000；数据采集模式，centroid。[0053]实施例7
一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法， 包括：S11.取白茅根0.5g，加入30%的甲醇25mL，定量后加热回流60min，冷却，用溶剂补足减失的重量，摇匀后过滤，取滤液，即得到供试品溶液；
S12.取绿原酸，加入30%的甲醇制成对照品溶液，绿原酸的含量为10μg/mL；S13.取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱中，色谱条件为：色谱柱，ACQUITY UPLC BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm）；进样量，5μL；流速，0.32ml；柱温，40℃；检测波长，325nm；甲醇为流动相A，以0.05~0.2%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0~4min，4%流动相A，96%流动相B；4~12min，4%→7%流动相A，96%→93%流动相B；12~15 min，7%→10%流动相A，93%→90%流动相B；15~30 min，10%→18%流动相A，90%→82%流动相B；30~30.1min，18%→90%流动相A，82%→10%流动相B；30.1~37 min，90%流动相A，10%流动相B；37~37.1 min，90%→4%流动相A，10%→96%流动相B；37.1~44 min，4%流动相A，96%流动相B；获取特征图谱；
S14. 所述供试品溶液和所述对照品溶液经液相色谱分离后，注入质谱中，所述质谱的条件为氮气作为质谱离子源的雾化和干燥气；电喷雾电离正、负离子模式；喷雾电压，
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3.0KV；Lens电压，50 V；脱溶剂气温度，400℃；鞘气压力，40Arb；辅助气压力，12Arb；质荷比范围，100~1000；数据采集模式，centroid。[0054]实施例8
一种白茅根及其标准汤剂的特征图谱构建方法， 包括：S11.取白茅根标准汤剂，研细后取0.1g，加入10%的甲醇15mL，定量后超声处理30min，冷却，用10%甲醇补足减失的重量，摇匀后过滤，滤液即为供试品溶液；所述超声处理的功率为300W，频率为40kHz；
S12.取绿原酸，加入30%的甲醇制成对照品溶液，绿原酸的含量为10μg/mL；S13.取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱中，色谱条件为：色谱柱，ACQUITY UPLC BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm）；进样量，5μL；流速，0.32ml；柱温，40℃；检测波长，325nm；甲醇为流动相A，以0.05~0.2%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱为：0~4min，4%流动相A，96%流动相B；4~12min，4%→7%流动相A，96%→93%流动相B；12~15 min，7%→10%流动相A，93%→90%流动相B；15~30 min，10%→18%流动相A，90%→82%流动相B；30~30.1min，18%→90%流动相A，82%→10%流动相B；30.1~37 min，90%流动相A，10%流动相B；37~37.1 min，90%→4%流动相A，10%→96%流动相B；37.1~44 min，4%流动相A，96%流动相B；获取特征图谱；
S14. 所述供试品溶液和所述对照品溶液经液相色谱分离后，注入质谱中，所述质谱的条件为氮气作为质谱离子源的雾化和干燥气；电喷雾电离正、负离子模式；喷雾电压，3.0KV；Lens电压，50 V；脱溶剂气温度，400℃；鞘气压力，40Arb；辅助气压力，12Arb；质荷比范围，100~1000；数据采集模式，centroid。[0055]实验例
本发明针对现有的方法对于白茅根药材特征图谱和检测方法存在的不足，提供一种白茅根药材UPLC特征图谱的构建方法。该构建方法获得的UPLC特征图谱不仅能定性、定量分析白茅根药材的质量优劣，还能以此为参照反映白茅根标准汤剂的质量。[0056]本发明通过以下方式来实现：
白茅根药材的UPLC特征图谱构建方法和检测方法，通过超高效液相色谱法来实现，其特征图谱构建方法如下：
1.色谱条件色谱柱，ACQUITY UPLC BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm）；进样量，1~3μL；流速，0.1~0.5ml；柱温，30~50℃；检测波长，320~330nm；梯度洗脱；甲醇为流动相A，以0.1%磷酸水溶液为流动相B，按梯度洗脱（0~4min，4%A；4~12，4%→7%A；12~15 min，7%→10%A；15~30 min，10%→18%A；30~30.1 min，18%→90%A；30.1~37 min，90%A；37~37.1 min，90%→4%A；37.1~44 min，4%A）。
[0057]白茅根标准汤剂的制备
取白茅根饮片100g，加水煎煮两次，第一次煎煮加9倍量水，浸泡30分钟，武火煮沸后改文火再煎煮30分钟，用200目筛趁热过滤，滤液迅速用冷水冷却；第二次煎煮加7倍量水，武火煮沸后改文火再煎煮25分钟，用200目筛网趁热过滤，滤液迅速用冷水冷却；合并两次滤液，减压浓缩至200mL，分装至西林瓶中，每瓶分装2mL，真空冷冻干燥，取出，轧铝盖，即得。[0058]白茅根药材、标准汤剂特征图谱共有峰的确定
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（1）21批白茅根标准汤剂的制备：取21批不同产地白茅根饮片，按照“2”项下确定白茅根标准汤剂的制备方法，制备21批白茅根标准汤剂。[0059]（2）样品测定：取21批白茅根标准汤剂，按实施例1和2的色谱条件，获得21批次白茅根标准汤剂UPLC特征图谱（见图1），并进行共有峰标识，建立白茅根标准汤剂UPLC对照特征图谱(图2)。取21批白茅根药材，按实施例1和2的确定的供试品溶液制备方法与色谱条件，获得21批白茅根药材UPLC特征图谱（图3），并进行共有峰标识，建立白茅根药材UPLC对照特征图谱（图4）。[0060]（3）实验结果：选择分离度较好，色谱峰较纯的共有峰为白茅根标准汤剂特征图谱的特征峰，21批白茅根标准汤剂具有6个特征峰（见图1），且6个特征峰均能从白茅根药材特征图谱中找到，说明6个特征峰均能从白茅根药材稳定转移到白茅根标准汤剂中，具体见白茅根标准汤剂和白茅根药材UPLC对照特征图谱之间的比较（图5）；因此选择白茅根标准汤剂UPLC特征图谱的上述6个共有峰作为白茅根药材UPLC特征图谱的特征峰，并以峰3（绿原酸）为参照峰进行标准研究。
[0061]白茅根药材供试品溶液稳定性考察
取白茅根药材按实施例1确定的方法制备供试品溶液，按照实施例1色谱条件，分别在0，2，4，6，8，10，12小时进样，进样体积2μl。以绿原酸色谱峰为参照峰S，计算各特征峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表1和表2。[0062]表1 白茅根药材特征图谱稳定性结果（相对保留时间）
表2 白茅根药材特征图谱稳定性结果（相对峰面积）
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实验结果表明，12小时内各特征峰的相对保留时间RSD值均小于2.0%，该供试品溶液在12小时内稳定良好。
[0063]白茅根药材特征图谱的确定
对21批白茅根草药材特征图谱进行分析，以3号峰绿原酸峰为参照峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表3和表4。[0064]表3 21批白茅根药材特征图谱（相对保留时间）
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表4 21批白茅根药材特征图谱（相对峰面积）
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将21批白茅根药材特征图谱通过匹配，使用《中药色谱特征图谱相似度评价系统2012版》生成对照图谱，建立白茅根药材的对照特征图谱。[0065]结果分析与讨论：21批白茅根药材的特征图谱有6个共有特征峰，与标准汤剂特征图谱共有特征峰一致。以峰3为参照峰S峰，21批白茅根药材其余5个特征峰相对于S峰的相对保留时间RSD值在0.09%~0.55%范围内，均小于2.0%，符合特征图的建立要求；21批白茅根药材其余5个特征峰与S峰的相对峰面积RSD值在25.39%~35.31%范围内，结果表明不同产地的白茅根草药材各特征峰所代表的化学成分差异较大；其中峰1的相对峰面积范围为0.098
峰2相对峰面积范围为0.035~0.100，峰4相对峰面积范围为0.118~0.367，峰5的相
~0.251，
对峰面积范围为0.037~0.181，峰6的相对峰面积范围为0.128~0.263。[0066]因此，白茅根药材的特征图谱标准为：供试品色谱中应呈现6个特征峰，与绿原酸参照物峰相对应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应该在
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规定值的±10％之内，规定值为0.45（峰1）、0.48（峰2）、1.07（峰4）、1.12（峰5）、1.17（峰6）。[0067]白茅根特征图谱特征峰指认
（1）试药试剂甲醇、乙腈（色谱纯，康科德公司）；水为超纯水（实验室自制）；甲酸等其它试剂均为分析纯。白茅根标准汤剂（广东一方制药有限公司）
（2）色谱及质谱条件
参照实施例1的质谱条件；进样量为5μl。[0068]质谱条件：氮气作为质谱离子源的雾化和干燥气；电喷雾电离正、负离子模式；喷雾电压：3.0 KV；Lens电压：50 V；脱溶剂气温度：400 °C；鞘气压力：40Arb；辅助气压力：12Arb；质荷比范围：100–1000；数据采集模式：centroid。[0069]（3）供试品制备
取白茅根标准汤剂冻干粉适量，研细，取约0.1g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入10%甲醇15ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）30 分钟，放冷，再称定重量，用10%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。[0070]（4）色谱峰的明确指认
采用上述色谱和质谱分析条件，分别对供试品溶液进行检测。通过化合物的色谱峰保留行为、精确分子量及二级质谱信息，共确定了6个化合物。其中绿原酸与对照品指认结果进行了比对验证。其他相关色谱峰推测见表5。[0071]表5 相关色谱峰的推测
上列详细说明是针对本发明可行实施例的具体说明，以上实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本案的专利范围中。
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