Transwell-细胞迁移

Transwell-细胞迁移

1. 细胞被干预后（药物处理，转染，电转，感染）适当时间点（考虑上述处理因素起作用的时间，Transwell检测时间窗口为16-24小时），作活细胞计数（台盼蓝染色），把细胞（100 ul 无血清培养基，1-3万）接种至Transwell孔中，下室加入600ul完全培养基；注意细胞接种一定要均匀；

2. 如果是药物处理，要考虑是否继续加药处理，如果是转染，电转，感染，不再进行第二次处理；

3. 37度 5%CO2培养16-24小时；

4. 用棉签擦去上室内的细胞，用PBS把上室内的细胞残留；结晶紫染色10min,洗涤残留的染液；把膜剪下，晾干后，用中性树脂封闭于载玻片，拍照，随机拍至少6个视野，用软件对图片进行细胞计数，然后对数据进行统计分析；

注意事项：

1. 选择合适直径（Transwell的大小，常用的6.5mm,为24孔格式，上述实验适用的是常用格式）和孔径（膜的孔径，一般有0.3um(用于细胞间接共培养), 4um（用于血细胞分析）, 8um（用于肿瘤细胞和其他组织细胞分析））的Transwell；

2. 何时把处理后的细胞接种至Transwell？决定于处理因素起作用的时间；

3. 细胞接种的数量？细胞的大小和侵袭速度，考虑通过预实验确定；

4. 为何要把细胞接种均匀？如果接种不均匀，后面无法用软件对图片进行细胞计数；

5. 细胞接种至Transwell是否继续进行细胞干预？决定于处理因素起作用的时间；

6. Transwell检测时间窗口如何确定？接种至Transwell后，定时观察，随时根据细胞侵袭的情况结束实验；

7. 注意上室和下室加入培养的量和种类；

8. Transwell使用前进行平衡：上下室各加入100ul，600ul无血清的培养基，37度再平衡12小时