南京林业大学森林培育学实验4

一、实验目的和要求

 了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。  测定方法：

由于各类种子的内含物不同，对试剂的反应也不相同，可分别选用不同的方法测定生活力。当前以四唑和靛蓝染色法为主，还有硒盐、碘化钾法。

 本实验采用四唑染色法。

二、测定原理

 四唑：2,3,5－三苯基氯(溴)化四唑（C19H15N4Cl(Br)）的简称为，为白色粉末，

水溶液无色。

 染色原理：种胚活细胞中的脱氢酶产生氢，与浸入种胚内的四唑发生作用，产生

红色稳定而不扩散的三苯基甲（TPF）。

 判断标准：凡种胚染成红色者表示有生活力，不染色的种子为无生活力的种子；

不染色的部位为坏死的部位，根据坏死组织出现的部位及其分布可以判断种子的生活力。

三、材料及器具

 材料：刺槐

 器具及药品：烧杯、解剖刀、解剖针、镊子、培养皿、量筒、滤纸、手持放大镜、

玻璃棒、取样匙、1%四唑等

四、方法及步骤

1. 测定样品的提取

从净度测定后的纯净种子中随机提取50粒种子（四分法）。3次重复。同时准备部分种子作为后备。

2. 种子预处理（浸种，同发芽测定） 3. 溶液配制

 溶液A：9.078g KH2PO4溶于1000mL水；

 溶液B：11.876g Na2HPO4·2H2O溶于1000mL水；  缓冲液配制：溶液A：溶液B以2:3比例混合;

 1%的四唑溶液配制：称取四唑1g溶于100mL的缓冲溶液，现配现用。 4. 取种胚、染色处理

 剥除外种皮和内种皮，取出种胚后放入盛有清水的玻璃皿；

 记录空粒、腐烂粒及病虫害感染种粒。如取胚时由于人为因素而破坏种胚，可从后

备种子中补取；

 种胚剥取结束后一起放入四唑溶液，使溶液淹没种仁，上浮者要压沉。置黑暗处，

保持30～35℃染色2～3h。 5. 结果鉴定

经过染色的种子分组放在潮湿的滤纸上，借助于手持放大镜或实体显微镜逐粒观察。

 有生活力：种胚和胚乳完全着色；  无生活力：种胚和胚乳完全不着色；

 根据种胚或胚乳上未着色的斑块的位置和大小判断种子有无生活力（种胚不染色的

最大面积不超过1/4子叶末端）。 6. 种子生活力计算

生活力的百分率根据3个重复组计算，不带小数，重复组间最大容许误差与发芽测定的规定相同，最后以3组生活力百分率的平均值为该种子批的生活力。

种子生活力测定记录表

树种 刺槐 样品号 1 样品情况 良

染色剂 四唑溶液 浓 度_ 1% _____ 测试地点___ 实验室 ___ 环境条件：温度 15 ℃ 湿度 50 ％ 重复 134 种子解剖结果测定种子腐涩病空粒数烂粒虫粒数害进行染色粒数染色结果无生活力粒数%有生活力粒数%平均生活力％备注2 平均测定方法 五、试验报告内容

1.进行种子生活力测定和计算，填写种子生活力测定记录表。 2.说明采用四唑染色法评价种子生活力的原理和判断依据。

原理：有生活力的种子活细胞内有脱氢酶，可与氧化还原反应指示剂：四唑（无色）反应而显色，被还原成为红色、稳定的三苯基甲腊。可根据四唑染成的颜色和部位，区分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。

判断依据：判断种子有无生活力，主要看胚和胚乳不染色坏死组织的部位及面积大小，而不完全取决于染色的深浅。染色的深浅可以区别健壮程度。即染色愈深，种子生活力愈旺盛。