*CN102973802A*
(10)申请公布号 CN 102973802 A(43)申请公布日 2013.03.20
(12)发明专利申请
(21)申请号 201210482712.2(22)申请日 2012.11.23
(71)申请人王恩瀚
地址515000 广东省汕头市金平区东墩街道
金墩园四十三幢北座206房(72)发明人王恩瀚(51)Int.Cl.
A61K 36/898(2006.01)A61K 8/97(2006.01)A61P 17/00(2006.01)A61Q 19/00(2006.01)A61Q 19/10(2006.01)
权利要求书 1 页 说明书 10 页权利要求书1页 说明书10页
(54)发明名称
治疗敏感性皮肤的药物组合物及其制备方法(57)摘要
本发明提供了一种治疗敏感性皮肤的药物组合物及其制备方法，所述具有治疗敏感性皮肤作用的药物组合物是由下述重量配比的原料制成的：苦参1～60份、荆芥1～60份、青天葵1～60份、鱼腥草1～60份、金银花1～60份。本发明治疗敏感性皮肤效果显著，安全，对皮肤无刺激性和致敏性。
CN 102973802 ACN 102973802 A
权 利 要 求 书
1/1页
1.一种治疗敏感性皮肤的药物组合物，其特征在于：是由下述重量配比的原料制成的：
苦参1～60份荆芥1～60份青天葵1～60份鱼腥草1～60份金银花1～60份。
2.根据权利要求1所述的治疗敏感性皮肤的药物组合物，其特征在于：是由下述重量配比的原料制成的：
苦参1～50份荆芥1～50份青天葵1～50份鱼腥草1～50份金银花1～50份。
3.根据权利要求1-2所述的治疗敏感性皮肤的药物组合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
第一步：将上述中药组方用体积浓度为20％～80％的乙醇浸泡，浸泡用的乙醇用量为中药组方总重量的10～200倍，得浸泡液；
第二步：浸泡液浓缩至原重量的2～5％，浓缩液用大孔树脂吸附，再用体积浓度5％～95％的乙醇多次洗脱，收集洗脱液，洗脱液中包括中药提取物的组合物。
4.根据权利要求3所述的治疗敏感性皮肤的药物组合物的制备方法，其特征在于：第一步中，所述的乙醇浸泡时间为2～48小时；或中药组方先用乙醇浸泡2～48小时，残渣再用乙醇浸泡2～48小时，合并浸泡后的溶液，得浸泡液。
5.根据权利要求3所述的治疗敏感性皮肤的药物组合物的制备方法，其特征在于：第二步中，所述洗脱用乙醇的体积浓度为40％～95％。
6.根据权利要求3-5所述方法制得的治疗敏感性皮肤的药物组合物的用途，其特征在于：用于制备皮肤护理化妆品，包括霜剂、乳液、化妆水、凝胶剂、面膜、涂搽剂和洗剂。
7.根据权利要求6所述的治疗敏感性皮肤的药物组合物的用途，其特征在于：将制得的药物组合物经减压浓缩至原重量的10％～50％，得到组合物浓缩液，用于制备皮肤护理化妆品，其中，所述组合物浓缩液占化妆品总重量的5％～10％。
2
CN 102973802 A
说 明 书
治疗敏感性皮肤的药物组合物及其制备方法
1/10页
技术领域
本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，特别是一种具有治疗敏感性皮肤作用
的化妆品用药物组合物及其制备方法和应用，适用添加于膏类、霜类、乳类、液类(香水除外)的化妆品。
[0001]
背景技术
敏感性肌肤作为常见的困扰肌肤状态普遍存在，虽然敏感性皮肤的确切定义尚
未达成一致，但对其皮肤临床症状和体征的描述逐渐一致，即不适，多数患者的不适几乎都表现在面部，包括主观的感觉症状，如灼热、刺痛、瘙痒、发麻，这些症状可伴有或不伴有红斑。(ProkschE，Weidinger S.New insights into the pathogenesis of sensitive skin.Hautarzt，2011，62(12)：900-5)敏感性皮肤虽然不是皮肤疾病，但它引起的皮肤不适直接影响着人们的生活质量。随着社会的进步，人们对美的追求，越来越多的人关注自己的皮肤健康和生活质量，敏感性皮肤这一问题也日益突出，特别是在上海这样的一线城市。(余玲玲、王学明.上海地区敏感性皮肤的流行病学调查.临床皮肤科杂志，2011，40(7)：403-406)中国的最新的一项流行病学研究表明，北京、上海、广州三大城市敏感肌肤的平均发病率为13％，北京的平均发病率为17.12％，上海的平均发病率为9.10％，而广州的平均发病率是最高的22.39％，其中男性敏感肌肤的发病率为8.62％，女性敏感肌肤的发病率为15.93％。(Xu F，Yan S，Wu M，et al.Self-declared sensitive skin in China：a community-based study in three top metropolises.J EurAcad Dermatol Venereol，2012，Epub ahead of print)因此研究新的治疗敏感性皮肤方法和手段，已经成为目前皮肤科学界和化妆品企业的研究热点。(Bornkessel A，Flach M，Arens-Corell M，et al.Functional assessment of a washing emulsion for sensitiveskin：mild impairment of stratumcorneum hydration，pH，barrier function，lipid content，integrity and cohesion in a controlledwashing test.Skin Res Technol，2005，11(1)：53-60)如专利申请号200510079622.9，该申请中公开了一种用于预防和/或治疗敏感和/或干性皮肤的美容处理办法，具体包括口服施用至少有效量的至少一种微生物，特别是益生微生物，并且联合有效量的至少一种二价无机阳离子。如专利申请号200680028396.4，该申请中公开了一种用于预防和/或治疗敏感和/或干性皮肤的化妆用和/或皮肤学组合物，具体包含有效量的至少一种特别益生菌微生物和/或其片段或代谢物，其与有效量的至少一种多不饱和脂肪酸和/或多不饱和脂肪酸酯和/或其盐或衍生物在生理学上可接受的载体中相结合。如专利申请号200810147597.7，该申请中公开了一种用于处理敏感皮肤的双歧杆菌属(Bifidobacterium)种裂解物的用途，具体包括有效量的双歧杆菌属(Bifidobacterium)种的至少一种微生物的至少一种裂解物，和/或部分用于预防和/或处理敏感皮肤情况下皮肤障碍的美容用途。中药提取物对敏感皮肤亦有良好的治疗作用，如专利申请号02826321.9，该申请中公开了筛选通过抑制干细胞因子的生成和/或释放而改善瘙痒、皮肤粗糙或皮肤敏感或发挥增白效果的活性成分的方法，以及含有这些活性成分、
[0002]
3
CN 102973802 A
说 明 书
2/10页
用于改善皮肤粗糙或皮肤敏感和/或增白的药物。一些临床试验报道采用含温泉水的医学护肤品可以减轻敏感性皮肤的症状和体征。(潘炜华、廖万清.雅漾舒护活泉水对1050例敏感性皮肤和炎症性皮肤病辅助治疗作用的初步观察.临床皮肤科杂志，2005，34(7)：473-474；王珊珊、梁虹、胡英姿等.功能性化妆品对敏感性皮肤的防护作用.中国美容医学，2009，18(10)：1486-1489)有学者发现含马齿笕及甘草提取物护肤品对敏感性皮肤有辅助治疗作用(何黎、温海、徐丽敏等.含马齿笕及甘草提取物护肤品对敏感性皮肤辅助治疗作用的临床观察，临床皮肤科杂志，2009，38(6)：364-366)[0003] 敏感性皮肤的概念提出迄今不过短短20余年，人们还缺乏治疗敏感性皮肤的有效手段。中医药是一个伟大的宝库，它为国人几千年的生息繁衍做出了巨大的贡献，对这一宝库进行深入研究，探索新的治疗敏感性皮肤有效方法十分必要。发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种具有治疗敏感性皮肤作用的药物组合物及制备方法和用途。
[0005] 本发明所述的具有治疗敏感性皮肤作用的药物组合物，是以苦参、荆芥、青天葵、鱼腥草和金银花为原料制备的，且是以如下重量份数的原料制备的：[0006] 苦参1～60份[0007] 荆芥1～60份[0008] 青天葵1～60份[0009] 鱼腥草1～60份
[0004]
金银花1～60份
[0011] 优选的，所述具有治疗敏感性皮肤作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的：
[0012] 苦参1～50份[0013] 荆芥1～50份[0014] 青天葵1～50份[0015] 鱼腥草1～50份[0016] 金银花1～50份
[0017] 本发明所述的具有治疗敏感性皮肤作用的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：
[0018] (1)将上述的各个原料置于体积浓度为20％～80％的乙醇中浸泡2～48小时，浸泡用的乙醇用量为各个原料总重量的10～200倍，过滤，得浸泡液；[0019] 优选的，过滤残渣再用体积浓度为20％～80％的乙醇浸泡2～48小时，合并浸泡后的溶液，得浸泡液。
[0020] (2)浸泡液浓缩至原重量的2～5％，浓缩液用大孔树脂吸附，再用体积浓度5％～95％的乙醇多次洗脱，收集洗脱液，即为所述的具有治疗敏感性皮肤作用的药物组合物；[0021] 优选的，洗脱用乙醇的体积浓度为40％～95％；
[0022] 所述大孔树脂采用日本三菱化学公司以聚苯乙烯-二乙烯基苯为基体的HP20型大孔树脂；浸泡液浓缩的方法为常规的减压浓缩。
[0010]
4
CN 102973802 A[0023]
说 明 书
3/10页
试验证明，本发明的具有治疗敏感性皮肤作用的药物组合物，具有多重作用，能够
用于制备敏感性肌肤皮肤保养的化妆品和皮肤的治疗性药物。[0024] 本发明还涉及一种皮肤保养化妆品，包括所述具有治疗敏感性皮肤作用的药物组合物和化妆品领域使用的辅料。
[0025] 本发明还涉及一种皮肤的治疗性药物，包括权利要求所述的具有治疗敏感性皮肤作用的药物组合物和医学上可接受的载体。[0026] 尤其可以用于制备皮肤护理化妆品，包括霜剂、乳液、化妆水、凝胶剂、面膜、涂搽剂或洗剂。
[0027] 制备皮肤护理化妆品时，可将制得的提取液组合物，经减压浓缩至原重量的10％～50％，得到组合物浓缩液，与已知的化妆品以及药品的基质或者辅料、载体、添加剂相混合，按照常规的方法进行制备，其中，所述组合物浓缩液占化妆品总重量的5％～10％。
[0028] 本发明根据中药理论，从大量的天然药物中，选用了苦参、荆芥、青天葵、鱼腥草和金银花为原料，制备获得了所述的具有治疗敏感性皮肤作用的组合物，其中，所述的苦参选用豆科植物Sophora flavescens Ait.的根；荆芥选用裂叶荆芥属植物裂叶荆芥Schizonepetatenuifolia(L.)Briq.的全草；青天葵选用兰科植物芋兰属中的Nervilia fordii(Hance)Schltr.的全草；金银花选用忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花；鱼腥草选用三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的新鲜全草或干燥地上部分。[0029] 根据《中国药典》和文献记载：
[0030] 苦参为豆科植物Sophora flavescens Ait.的根，苦参是我国传统中药之一，具清热燥湿、杀虫、利尿等功效，用于治疗热痢，便血，黄疸尿闭，赤白带下，阴肿阴痒，湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风；外治滴虫性阴道炎等各种疾病。苦参含有多种化学成分并分别具有不同的化学活性，其主要的有效成分是生物碱类和黄酮类化合物。现代研究表明，苦参有抗肿瘤、抗病毒、抗肝损伤、抗心律失常、抗肝纤维化、中枢抑制、抗生育、平喘等广泛药理作用。
[0031] 荆芥为裂叶荆芥属植物裂叶荆芥Schizonepeta tenuifolia(L.)Briq.的全草，荆芥是临床常用中药，性温、味辛，生品具有祛风解表、宣毒透疹、散瘀止血之功效，主治风寒感冒、咽喉肿痛及多种皮肤病，为中医临床常用药物。荆芥炒炭后专功止血，可用于吐血、衄血、便血、崩漏、产后血晕等。
[0032] 青天葵为兰科植物芋兰属中的Nervilia fordii(Hance)Schltr.的全草，又名独叶莲、珍珠草、独脚莲、珍珠叶、坠千斤、铁帽子、山米子、天葵、入地珍珠、假天麻、独脚天葵、猪乸草、磨地沙、半边伞、小胖药、提心吊胆等，主要分布在广西、广东、云南、四川等地，在香港、泰国也有分布。青天葵主要生长在海拔400～600米的石山疏林下，石山山脚或密林阴湿处，田边或肥沃的地方，其味甘凉、性寒、无毒，可清热润肺、解毒消肿，主治肺痨咯血、肺热咳嗽、口疮、咽喉肿痛、瘰疠、疮疡肿痛、跌打损伤。在我国两广地区和东南亚地区，青天葵为民间习用的凉茶，是我国传统出口的名贵药材。
[0033] 鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的新鲜全草或干燥地上部分。鱼腥草又称蕺菜，属多年生草本植物。它广泛生长于我国南方各省区，西北、华北部
5
CN 102973802 A
说 明 书
4/10页
分地区也有分布。因其有一种特有的鱼腥气味，故称鱼腥草。鱼腥草是三白草科蕺属植物。蕺属植物在我国只有1种即鱼腥草。其干品、鲜品茎叶均可入药，是常用中草药之一。它具有清热解毒、利尿消肿等功效，主要应用于痰喘咳、痈肿疮毒等病症。鱼腥草的精油对过敏性哮喘有明显保护作用。鱼腥草精油还有增强免疫活性。另外，鱼腥草有镇痛止咳，止血，抑制浆液分泌，促进组织再生等活性。因鱼腥草的挥发性物质具有显著的药效，制药行业用鱼腥草水蒸汽蒸馏得到的精油饱和水溶液制成鱼腥草注射液，广泛应用于上呼吸道炎症等。[0034] 金银花为忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花。金银花是我国常用的传统珍贵药材，同时也是制作清凉饮料的重要原料，具有“清热解毒、凉散风热”之功效，主治痈肿疗疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等症。[0035] 目前，国内外尚未见将苦参、荆芥、青天葵、鱼腥草和金银花提取物的组合物用于治疗敏感性皮肤的相关报道。[0036] 综上所述，目前敏感性皮肤缺乏有效的治疗手段，本发明的有益效果在于根据敏感性皮肤的病因和病理机制，大量筛选了一千多种中草药，终于筛选出能够有效治疗敏感性皮肤的药物组合物。本发明的药物组合物经临床试验证实效果显著，安全性好。所涉及的成分具有效果明确、安全性好、无任何副作用和在化妆品配方中稳定的特点；与现有同类产品相比，具有效果显著的特点，是一种新型治疗敏感性皮肤的有效天然药物提取物的组合物。
具体实施方式[0037] 实施例1[0038] 在室温下，取苦参、荆芥、青天葵、鱼腥草和金银花各10公斤(共50公斤)，用体积浓度70％的乙醇600公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度70％的乙醇600公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后，减压浓缩20倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度50％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。[0039] 实施例2[0040] 在室温下，取苦参8公斤、荆芥8公斤、青天葵12公斤、鱼腥草12公斤和金银花12公斤(共52公斤)，用体积浓度50％的乙醇1200公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度50％的乙醇1200公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后，减压浓缩40倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度40％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。实施例3[0042] 在室温下，取苦参8公斤、荆芥8公斤、青天葵15公斤、鱼腥草15公斤和金银花15公斤(共61公斤)，用体积浓度80％的乙醇1000公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度80％的乙醇1000公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩25倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度60％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。[0043] 实施例4[0044] 在室温下，取苦参10公斤、荆芥10公斤、青天葵12公斤、鱼腥草12公斤和金银花
[0041]
6
CN 102973802 A
说 明 书
5/10页
12公斤(共56公斤)，用体积浓度30％的乙醇2000公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度30％的乙醇2000公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩50倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度50％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。[0045] 实施例5[0046] 在室温下，取苦参8公斤、荆芥8公斤、青天葵10公斤、鱼腥草10公斤和金银花15公斤(共51公斤)，用体积浓度60％的乙醇1200公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度60％的乙醇1200公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩30倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度80％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。[0047] 实施例6
[0048] 将实施例1所获得的液体采用减压浓缩，浓缩至原重量的10％～50％，得药物组合物浓缩液，用于制备治疗敏感性皮肤的精华液，组分的重量百分比如下：
[0049]
生产工艺：将透明质酸钠加入水中搅拌分散均匀，然后依次加入其它成分，70℃情况下搅拌均匀即可。[0051] 实施例7
[0052] 药物组合物治疗敏感性皮肤的临床试验研究报告：下述实验中，所用的药物提取物的组合物为实施例6的化妆品配方制备的治疗敏感性皮肤的精华液。[0053] 1.材料与方法
[0054] 1.1敏感性皮肤患者的病例选择
[0055] 总共纳入60名24～42岁的敏感性皮肤症女性患者，纳入标准：受试者自愿签署知情同意书。通过敏感性皮肤问卷进行筛选(对17个问题，至少回答5个“是”，可以纳入)。临床表现：面部易出现红斑、丘疹、脱屑、毛细血管扩张等客观症状，或瘙痒、刺痛、灼热、紧绷感等主观症状；乳酸刺激试验分值≥3者诊断为敏感性皮肤，受试前15天和整个观察期间未接受过其他抗过敏治疗。排除标准：已知对受试产品中的成分过敏者；精神病患者；处于怀孕期、哺乳期或分娩后半年内者；有严重肝肾疾病、自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎)、HIV感染者：近12个月内被诊断为皮肤肿瘤并接受治疗者；正在使用
[0050]
7
CN 102973802 A
说 明 书
6/10页
和/或在试验前14天内口服或外用了试验禁用的药物(糖皮质激素、免疫抑制剂及抗过敏药)；正在使用或试验前1个月使用过其他同类产品者。
[0056] 1.2治疗方法治疗组的含有本发明药物组合物的精华液由众合国际科技有限公司提供，按日常方法清洁面部后，每日早晚两次将含有本发明药物组合物的精华液涂抹于整个面部，可以化妆，但回访之日除外。使用期间不得更换该样品，且禁止使用如保湿霜、剥脱剂、面膜、抗衰老面霜等皮肤保健产品。2次就诊时间：使用样品前和使用样品8周后，评价样品的使用效果。
[0057] 1.3.效果评价：乳酸刺激实验评价受试者使用样品前后皮肤的敏感性。受试者鼻唇沟两侧同时分别用2mL 10％乳酸和2ml生理盐水涂抹10次。乳酸刺激侧和生理盐水侧由随机表决定。涂抹后1、2、3、4、5min评价受试者刺痛程度，评分尺度为0～4分，0分为无痛，4分为刺痛强烈。临床评价由同一皮肤科医师进行。观察部位：前额和面颊。由随机表决定评估左侧或右侧。根据临床红斑、干燥、鳞屑、弹性、光滑的程度判定为0～3分：0分，不干燥、弹性差、光滑差、鳞屑极少、无红斑；3分，代表很干燥、弹性好、光滑、鳞屑多、红斑很明显；1分和2分，介于0分和3分之间。[0058] 1.4.皮肤生物学参数的定量评价：(1)皮肤红斑评价：由分光测色计[0059] (Spectrophotometer-CM2600 Minolta，日本)测定皮肤α值，该值反映皮肤红色到绿色的饱和水平，间接反映皮肤红斑改善程度；(2)皮肤角质层水含量评价：由Corneometer(R)-CM825(Courage+Khazaka，德国)测量；(3)皮肤鳞屑评价：由活体皮肤表面分析系统Skin-Visiometer(R)SV600(Courage+Khazaka，德国)测定。所有检测均在温度为23℃～25℃、湿度为50％～60％房间进行，每次在同样部位均测量3次，取平均值。最后由受试者自评其皮肤敏感性的改善程度和对该产品的接受程度。
[0060] 1.5.安全性评价在复诊时对受试者进行不良反应评价，询问受试者靶部位原症状是否加重或出现新的皮损，如瘙痒、干燥、脱屑、刺痛、红肿、脱屑等症状及是否妨碍日常生活。重度：不良反应妨碍日常活动，受试者自觉症状显著，不能忍受，需要停用；中度：不良反应妨碍日常生活，受试者自觉症状明显，但可忍受，无须停用受试产品；轻度：可耐受不良反应，受试者偶能感受到。对出现不良反应的受试者，医生对其进行斑贴试验.以确定不良反应和试验产品的因果关系。负责医生认为受试者不适合继续试验，或受试者要求停止，即停止该受试者的试验，并记录停止原因和时间。
[0061] 1.6.统计学处理生物学参数和乳酸刺激分数采用SSPS 11.5软件进行自身前后配对t检验。[0062] 2.结果
[0063] 本实验的所有受试者均具有敏感性皮肤的特征性表现，乳酸刺激均呈阳性(均值7.21)经过3周治疗后，受试者的乳酸刺激分数从治疗前7.21±2.53下降到治疗后2.37±2.01(P＜0.01，表1)。
[0064] 表1治疗前后乳酸刺激实验和皮肤生物学参数比较(n＝60)
8
CN 102973802 A
说 明 书
7/10页
[0065]
皮肤生物学参数检测的结果显示：使用过本发明的药物组合物8周后，患者皮肤
的Corneometer读数显著增加(P＜0.01)，鳞屑指数明显下降(P＜0.05)，皮肤α值则无显著性变化(P＞0.05)，这提示敏感性皮肤患者的皮肤干燥情况减轻，皮肤有更好的水合作用，更少的鳞屑，这样皮肤就会有更好的屏障功能，可以保护皮肤感觉神经免受过度的刺激，从而有助于改善皮肤症状。[0067] 产品安全性评估：治疗前后均未发生不良反应，无1例患者脱落。整个研究过程未发生与该试验产品相关的不良反应事件。
[0068] 采用其它实施例的具有治疗敏感性皮肤作用的药物组合物进行临床试验，结果也证明具有相同的作用。
[0066]
实施例8
[0070] 治疗敏感性皮肤的药物组合物的皮肤刺激性实验研究报告：通过动物试验，来观察本发明的治疗敏感性皮肤药物组合物对家兔皮肤的刺激性。下述实验中，所用的药物提取物的组合物为实施例1的药物组合物。[0071] 1动物
[0072] 16只普通级成年健康新西兰兔，雌雄各半，2.5kg～3.5kg，购买于广东省医学实验动物中心，实验动物生产许可证号为SCXK(粤)2008-0002，动物合格证号：粤2012A008。饲养于新南方药物安全性评价中心普通区动物房F4房(实验动物房合格证号：0060590。)，试验期间，室温20℃～22℃，湿度40％～67％，照明12h/12h昼夜明暗交替。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例1的药物组合物，浓度为1.0g生药/mL。[0073] 2方法
[0074] 依据中华人民共和国卫生部《化妆品卫生规范(2007年版)》，采用同体自身左右侧对比法，左侧给予空白基质(生理盐水)，右侧给予1.0g/mL的药物组合物。给药前准备：给药前24h，采用剃毛法去除家兔背部脊柱两侧被毛，去毛范围左、右各约3cm×3cm，涂抹面积2.5cm×2.5cm，勿损伤皮肤。给药：取受试物约0.5mL涂抹在右侧皮肤上，左侧涂生理盐水作为对照，每天涂抹1次，连续14d。从第二天开始，每次涂抹前要被毛。将药液0.5mL浸透2.5cm×2.5cm的双层医用纱布片，覆盖于已去毛的皮肤，覆盖一层硫酸纸，再用无刺激性胶布和固定带固定。固定约4h后去除受试物，用温水清除残留受试物。一小时后观察结果。
[0075] 3结果
[0076] 在本实验条件下，连续涂抹1.0g/mL的药物组合物14天对家兔皮肤无刺激性反应(具体见表2)。
[0077] 表2 1.0.g/mL药物组合物对家兔多次皮肤刺激性试验结果
[0069] [0078]
9
CN 102973802 A
说 明 书
8/10页
实施例9
[0080] 治疗敏感性皮肤的药物组合物的皮肤致敏性实验研究报告：通过动物试验，来观察本发明的治疗敏感性皮肤药物组合物对Hartley豚鼠皮肤的致敏性。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例1的药物组合物。[0081] 1动物
[0082] 选用普通级Hartley豚鼠50只，雌雄各半，体重范围180～250g，购买于广东省医学实验动物中心，实验动物生产许可证号为SCXK(粤)2008-0002，动物合格证号：粤2012A016。饲养于新南方药物安全性评价中心普通区动物房F4房(实验动物房合格证号：0060590。)，试验期间，室温20℃～22℃，湿度40％～67％，照明12h/12h昼夜明暗交替。按编号对豚鼠进行皮肤染色，用饱和苦味酸溶液(黄色)染色标记个位数，用2％硝酸银溶液(咖啡色)染色标记十位数；按性别分开饲养，每一笼盒放5只豚鼠，笼盒外贴上标签，标示专题编号、动物类别、组别、性别、给药途径、笼号、动物编号及预计试验起止日期等信息。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例1的药物组合物，浓度为1.0g生药/mL。
[0079]
2方法[0084] 依据国家《药品注册管理办法》、《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导
[0083]
10
CN 102973802 A
说 明 书
9/10页
原则》。随机分为阴性对照组、阳性对照组、药物组合物组，其中阴性对照组10只豚鼠，其余各组20只豚鼠。各组豚鼠雌雄各半。先后进行诱导致敏和激发接触实验，两个实验之间相隔10天的洗脱期。诱导接触实验方法为前24h备皮，剪去豚鼠脊柱两侧各2cm×2cm区域的被毛。阳性对照组：取2.5％2，4-二硝基氯代苯的丙酮溶液0.2g，分别用两层纱布(2.5cm×2.5cm)和一层保鲜薄膜覆盖，以无刺激纱布覆盖6h，移去覆盖物，用温水清除残留受试样品，第7天和第14天，以同样方法重复一次；在阴性对照组动物相同部位涂蒸馏水0.4ml，药物组合物组涂0.5ml。按同样的步骤进行诱导接触。激发接触则是在末次给受试物致敏接触后14天(即实验第28天)，在实验组和阴性对照组豚鼠背部备皮处涂敷0.5ml，封包和固定，6h后去掉受试物，立刻观察，然后于24h、48h、72h再次观察皮肤过敏反应情况。阳性对照组用2.5％2，4-二硝基氯代苯的丙酮溶液0.2g，阴性对照组动物相同部位涂蒸馏水0.4ml。在致敏后1h、24h及激发后24h和48h观察给药局部皮肤红斑、水肿和其他异常反应。按皮肤过敏反应评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分，并计算各组的过敏反应发生率，按皮肤过敏性评价标准判断过敏反应发生程度。过敏反应发生率＝(组内出现皮肤红斑、水肿或全身过敏反应的动物数/该组动物总数)×100％。[0085] 3结果：
激发接触实验后24、48h，由不知道实验内容的专业人员根据《化学药物刺激性、
过敏性和溶血性研究技术指导原则》评判是否出现皮肤致敏反应(表3.7)，致敏反应评分≥2分时，判定该动物皮肤致敏反应阳性，计算致敏率(≥2分动物数/该组动物总数×100％)，并按《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》中皮肤致敏反应试验分级标准判定本发明的药物组合物对豚鼠皮肤的致敏强度(表3)。[0087] 表3皮肤致敏反应程度评分标准
[0086] [0088]
[0089]
11
CN 102973802 A
说 明 书
10/10页
首先计算每一观察时间点各组积分均值，然后计算观察期限内每天每只动物积分
均值，按《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》进行评价。按下列公式计算每天每只动物平均积分。
[0091] 表4皮肤致敏反应程度分级标准
[0090] [0092]
激发后24h、48h，阴性对照组、药物组合物组的豚鼠激发部位皮肤均未出现红斑、
水肿情况，也未出现其它异常反应，过敏反应发生率均为0，过敏反应评价均为未见皮肤过敏反应。
[0094] 激发后24h，阳性对照组豚鼠激发部位皮肤全部出现红斑，过敏反应发生率为100％，过敏反应评价为极强致敏。激发后48h，阳性对照组豚鼠激发部位皮肤仍全部有红斑，过敏反应发生率为100％，过敏反应评价仍为极强致敏。[0095] 4结论
[0096] 在本实验条件下，药物组合物对Hartley豚鼠皮肤进行3次致敏和1次激发后未见皮肤过敏反应。
[0093]
12
因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容