苦豆草中总生物碱含量测定

减羊药争荦奴第ｌ８卷第２　中圈分类号：Ｒ９２７　２　文献标识码：Ａ　文章编号：】Ｏ嗯一９９２６（２０Ｏ２）Ｏ２—０１１３一叩　苦豆草中总生物碱含量测定　辛海量①，赵玉海，林峰，朱卫海，王昌林　马兰８４１７００）　用ｐＨ＝５　６的醋酸一醋酸钠缓冲液提取苦豆草　测定结果表明提取完　ｆ中国人民第５４６医院，药械科摘要：目的寻求一种简便实用的苦豆草总生物碱含量测定方法　方法中的总生物碱．　生物碱在ｐＨ＝７　６的溶液中与滨麝香革酚蓝形成离子对，氯仿萃取后在４２２ｎｍ处用紫外分光光度法进行含　量测定：结果线形范围０—１３．砷　・ｎｄ～。苦参碱的平均回收率为９８　５７％．ＲＳＤ＝１．９２％。结论全、方法简便、重现性好、结果准确，优于药典采用的氰水碱化后氯仿提取总生物碱的含量测定方法　关键词　苦豆草；总生物碱；含量漫５定；酸性染料分光光度法　Ｄｅｔｅｒｍｉａｎｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｌｋａｌｏｉｄｓ　Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｆｒｏｍ　Ｓｏｐｈｏｒａ　ＡＪｏｐｅｃｕｒｏｉｄｅｓ　Ｌ　ＸＩＮ　Ｈａｌ—Ｌｉａｎｇ，ＺＨＡＯ　Ｙｕ—Ｈａｉ，ＬＩＮ　Ｆｅｎｇ，ＺＨＵ　Ｗｅｉ—Ｈａｉ，ＷＡＮＧ　Ｃｈａｎｇ－Ｌｉｎ　（Ｐｈａｍ￣ｃａｌ　ＤｅｐａＵａｅｎｔ　Ｔｈｅ　５４６　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　ＰＬＡ．Ｍａｌａｎ　８４１７００，Ｘｉｎｊｉａｎｇ）　ＡＢＳＩＲＡＣＴ：Ａｉｍ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｔｈｅ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　砌Ｓｏｐｈｏｒｏａ　ａｌｏｐｅｃｕｒｏｉｄｅｓ　Ｌ．　ＭｅｔｈｏｄｓＴｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｌｋａｌｏｉｄｓｆｒｏｍ　Ｓｏ口ｈｏｒｏａ　ａｌｏｐｅｃｕｒｏｉｄｅｓＬ　ｗｉｔｈ　ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄｂｕｆｆｅｒ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｗｈｉｃｈ　ｐｌ：１　ｗａｓ　５　６．１１ｌｅｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ａｎｄ　Ｂｒｏｍｔｈｙｍｏｌ　ｂｌｌ　ｒｏｍｐｓ　ｉｏｎ　ｒｓ　ｉｎ　ｓ０ｌｕｔｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｉｏｎ　ｐａｉｒｓ　ｗａｓ　ｅｘｓｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｉｌｌ　ａｎｄ　ＷＤ．Ｓ　ｄｅｔｅｍａｉｎｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ａｃｉｄ　ｄｙｅ　ｓｐｅｃⅡ。ｐｈ０１０眦Ⅱｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ１１　ｌｉｎｅｒ　ａｒｒａｎｇｅｉｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　０～１３．００＃ｇ。ｍｌ＿。．Ｔｈｅ『ｒＩｅａｎＩ＿ｅｃ　ｖ　ｒｙ　ｏｆｍａ—　ｔｒｉｎｃ　ｗ￣ｌｔｓ　９８．５７％．脚＝１．９２％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ１１ｌｅ　ｒｅｓｕｌｔｉｎｄｉｃａｒｅｓ山ａｔｔｈｅｍｅｔｈｏｄ　ｐｅｒｆｏｍｌｅｄｉｓ　ａｃｃｕｒａｔｅｍａｄ　ｓｉｍｐｉｅ．　１１ｌｅ　ｒｅｐｒｄｕｃｉｏｂｉｌｉ￣ａｎｄ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｒｅ　ａｌＳＯ　ｄｅｓｉｒａｂｌｅ．ｆｒｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｉｓ　ｍｔｈｅｒ　ａｄｖｉｓｅｒｂｌｅ　ｈａｎｔｔｈａｔ　ｏｆ　ｐｈａｎｎａｅｏｐｏｅｉａ．　ＫＥＹＷＯＲＤＳ：Ｓｏｐｈｏｒｏａ　ａｆｏｐｅｅｕｒｏｉｄｅｓ　Ｌ．；Ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｏｆ　Ｓｏｐｈｏｒｏａ　ａｌｏｐｅｅｕｒｏｉｄｅｓ　Ｌ．；Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；Ａｃｉｄ—ｄｙｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　苦豆草（Ｓｏｐｈｏｒａ　ａｌｏｐｅｃｕｒｏｉｄｅｓ　Ｌ．）是豆科槐属植　物，又称苦甘草、苦豆根，我国西北地区分布很广，资　源丰富　其化学成分主要有喹诺里西啶类生物碱和　黄酮两大类，其生物碱有广泛的药理作用。关于其　生物碱的提取分离、结构分析、含量测定…、药理研　究、制剂研制等多见报道，也得到了较为广泛的临床　应用　特别是其所含生物碱的抗肿瘤、抗放射损　伤＿２　作用，更令其倍受关注。目前其总生物碱的含　量测定有重量法、酸碱滴定法、酸性染料分光光度　型酸度计（上海分析仪器厂）　苦参碱由中国药品生　物制品检定所提供。试剂均为分析纯　２实验方法　２．１试液配制（１）ｐＨ＝７．６缓冲液的配制：取０．　１ｍｅｌ・Ｌ　的磷酸二氢钾溶液５００ｍ１．加０．１ｍｏｌ・Ｌ　氢　氧化钠溶液４２２ｍｌ，蒸馏水７６ｍ１．用酸度计校正为ＤＨ　＝７．６，即得。（２）２　ｘ　１０Ｉ４ｔｏｏｌ・Ｌ　的溴麝香草酚蓝　法，因其所含喹诺里西啶类生物碱，有一定的水溶　性，用氯仿难以提取完全，使测定结果偏低。有文献　报道　Ｊ，用ｐＨ＝５．６的醋酸一醋酸钠缓冲液提取，　然后用酸眭染料分光光度法定量，本文就采取此法　进行总生物碱定量．并在运用中作了改进。　１仪器试剂　ｐＨ＝７．６缓冲液的配制：精密称取溴麝香草酚蓝０．　０６２５ｇ，置５（Ｘ）ｍｌ量瓶中，加上述ｐＨ：７．６缓冲液至　刻度，摇匀即得。（３）苦参碱标准液配制：精密称定　苦参碱标准品５．１９ｍｇ，置５ｍｌ量瓶中，加无水己醇　溶解并稀释至刻度，摇匀即得。　２．２苦参碱线性试验取已配好的上述苦参碱标　准液ｌＯ、２Ｏ、３０、４ｏ、５０、６０、７０、８ｏ、９０、１００￣１分别置于　２５　ｍＩ的磨口锥形瓶中，挥尽乙醇，加溴麝香草酚蓝　ｐＨ＝７．６缓冲液６．（Ｄｍｌ，氯仿６．０Ｏ　，密塞，剧烈振　７５１型紫外分光光度计（上海分析仪器厂），２５　①作者简朴：辛海量（１９７６一），男，内蒙古赤峰』、，理学学士，药师　研究方向：医院信息。Ｔｅｌ：（０９９６）２３５９８２　维普资讯 http://www.cqvip.com

１ｌ４．　斗董丰药学学报２Ｏ０２年４月第ｌ８卷第２期　／：％ａｒｍ　Ｊ‰Ｐ／Ａ　１８　牖２　ａ．ｏｒ　２ＯＯ２　摇２ｍｉｎ提取，静置２ｈ，分取氯仿层，以未加苦参碱液　管为空白，于４２２ｎｍ处测定提取液的吸收度。以氯　仿提取液浓度　对吸收度Ａ回归，方程为：　Ａ＝０　０１１　８４＋Ｏ．Ｏ７７　３４７　Ｃ．ｒ＝Ｏ．９９２　９　线性范围０—１３．６０，ｕｇ－ｍｌ～。　２．３稳定性试验果见表１　ｔｅｓｔ　取苦参碱标准液柏ｍ，按２．２项　方法每隔１ｈ测定吸收度，表明样品在９ｈ内稳定，结　衰１苦参碱稳定性试验ｆ　＝９）　Ｔａｂ１　ｍ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆｔ　Ｉ脚２．４加样回收率试验精密称取已知含量的苦豆　３．２项“加入溴麝香草酚蓝”依法测定，结果见表４。　衰３样品耆量测定结果　子根粉末样品，加入ｌｏｏ￣ａ的苦参碱标准液（０．　１０３８ｍｇ），依法进行含量测定，计算回收率，结果见表　２　Ｔａｂ　３　Ｔｈｅ　０ｆ　嘶　寰２苦参碱加样回收辜试验ｆ　＝５）　Ｔａｂ　２　Ｔｈｅ　０ｆｔｈｅｍｅｄ　∞　寰４药典｛击测定各部位的生袖碱耆量　Ｔ曲４　Ｄ曲　血瞻吐ｌｅＩｄｋａｌｏｉｄｓ∞ｎｔ哪ｔｓ　ｂ　吐ｌｅｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｐｌ－瑚埔∞　由　２．５精密度试验用根同一份样品提取液，依法平　行测定５次，ＲＳＤ为２．９１％，表明精密度较好　３实验结果　３　１样品总生物碱的提取取苦豆子根、茎、种子　４讨论　１　生物总碱的含量测定药典采用氨水碱化后氯　各约０．１ｇ，精密称定，分别置２５ｍｌ量瓶中，加ｐＨ＝５．　４．６的醋酸一醋酸钠缓冲液适量，充分振荡，放置过夜，　仿提取，因其所含生物碱属喹诺里西啶类，有一定的　水溶性，用氯仿难以提取完全，使测定结果偏低，对　定容，滤过，续滤液作提取液。　３．２总生物碱的含量测定用微量注射器吸取各　比数据说明了这一点。本法采用ｐＨ＝５．６的醋酸一　提取完全，结果准确，操作简便，　提取液适量（相当于总生物碱４５／．￣ｇ），置２５ｍｌ量瓶　醋酸钠缓冲液提取，中，加人溴麝香草酚蓝ｐＨ＝７．６缓冲液６．００ｍｌ，氯仿　易于推广　２在含量测定项，如果用吸管吸取下层氯仿层．　６．００ｍｌ，密塞振摇２ｍｉｎ，注入酸式滴定管中，静置２ｈ，　４．水一氯仿混溶以至乳化，会严重　分取氯仿层．以ｐＨ＝５．６的醋酸一醋酸钠缓冲液　必然破坏两相界面，２５ｍｌ，６．００ｍｌ溴麝香草酚蓝ｐＨ＝７．６缓冲液和氯仿　影响测定结果。本文采用酸式滴定管分离，简便易　很好地解决了这个问题。　６．００盯ｄ同比操作，为空白进行测定，用回归方程算出　行，含量。结果见表３　４．３由于条件所限，本文测定使用７５１型紫外分光　３．３与药典生物碱测定方法的比较取苦豆子根、　光度计，仪器稳定性稍差，并且为延长氢卤钨灯寿　茎、种子各约０．１ｇ，精密称定，分别置２５ｍｌ量瓶中，　命，在处理样品期间关机．在样品处理完毕后，重新　加浓氨水约２ｍｌ混匀，密塞放置３０ｍｉｎ加氯仿，充分　开机进行初始化的情况不尽相同，带来了误差，致线　振摇，放置２ｈ，加氯仿至刻度，放置过夜，滤过，续滤　形回归实验回归系数ｒ＝０．９９２　９稍微偏低。因此必　液作提取液。用微量注射器吸取各提取液适量（相　须合理处理长时间开机与卤钨灯的寿命的同题，尽　当于总生物碱４５ｐｇ），置２５ｍｌ量瓶中，挥干氯仿，从　量作好仪器的预热等初始化工作，降低系统误差。　维普资讯 http://www.cqvip.com

并寰军药母母　２Ｏ０２年４月第１８卷第２期Ｐｈｏｒｍ』ｃｈ　ＰＬＡ　ｉ９９ｉ，２２（１ｏ）：４４４　１Ｂ　舳２＾　２。０　４．４在样品的处理过程中要避免样品乳化，否则会　给测定带来较大的偏差，因此必须仔细观察，氯仿层　分取的时机要尽量把握一致。　４．５从稳定性试验的数据来看，测定结果在８ｈ内　２’夏交斌，翟所迪，棣文采，等苦豆子总生物碱制荆治疗放射性　皮肤损伤的临床观察［Ｊ］中华放射医学与防护杂志，Ｉ９９９，１０　（１）：４６　：３］张建华，乌云苦豆子中总生物碱的吉量测定方｛击额探ＬＩＪ．中　是稳定的，但考虑到氯仿的挥发以及仪器的寿命因　素，测定最好在１ｈ内完成。　参考文献：　：１］束学华，宋党明苦豆草中总生物碱的古量测定：Ｊ：中草药　草药，１９９７，２８（８）：４６５　（收稿１３期：２００Ｏ—ｏ５—１５；修回日期：２００１—１２—１２）　（本文编辑魏萍）　ｆ上接１１２页）　裹３葛根和柴葛晨粒中葛根素的音量测定结果　ｌａｂ　３　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　０ｆｄｅｈ叫ａｎｄ０ｍ妇３６％醋酸一水（２５：３：７２），采用Ｃ１ＲＯＤＳ色谱柱，结果　ｐⅡ　￣Ｕｌｔｌ１］ｅ　￣ｏｎｔｃｌｌｔｉｎＧ　∞　峰形与滞留时间还行，但重复性差，即重新换Ｉｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ一３柱、ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ一２柱和Ｋｌｏｍａｓｉ｜柱试验．其　结果重复极差；随后选用０．０５ｍｏｌ・Ｌ－　磷酸二氢钠一　甲醇一乙腈（６７：３０：３），结果峰形宽，改进后滞留时　间长　引用文献　的流动相，用冰醋酸调ｐＨ２～３　后、峰形不佳。我们从离子强度、流动相的配比、不　同柱子的对比作了系统的研究，经摸索确定葛根素　的流动相为：乙腈一甲醇一水（１０：５：８５），此流动相　乙腈浓度若增加５％滞留时间缩短，峰形不对称，乙　腈浓度缩小２％滞留时间延长３～５ｍｌｎ峰形变宽．甲　醇浓度增加峰形改变拖尾峰出现　此比例的流动相　不需梯度洗脱，室温下能很好的分离葛根素，且峰形　对称，重复性稳定。　参考文献　３讨论　中华＾民共和国药典（一部）ｓ’北京：［１　国家药典委员台，化学　．３．１本试验对照品选用５０％甲醇配制，日间与日内　的峰面积测定值分别为１３８　７９６±５　６９６，１３８　０８９±２　工业出版社，２００ｏ　２７３　章育中，扬凡高欢藏相色谱法测定葛根｛盟其片荆中异黄酮　的音量　Ｊ．药物分析杂志，Ｉ９８４，４（２ｊ：６７　Ｍｊ北京：人民卫生出　０６０，两者元明显差异，稳定性好。柴葛样品制备曾　［３：　胨发奎常用中草药有效成分音量测定［版杜版．１９９７，７２０　用７５％甲醇提取，挥去甲醇，乙醚萃取数次后醚液挥　干，残渣用甲醇溶解的供试品液，因溶媒与流动相不　同导致测定浑浊，测定干扰大，且易堵柱。即而选用　粱文法，闭业范，简毓琴．等薄层一紫外分光光度法测定葛根　中葛根素的含量［Ｊ＿．中成药，１９９１．１３（１２）：３３　昊正红，朱延勤，严覆英，等葛根紊滴眼剂的处方筛选及稳定　乙酸乙酯萃取，挥去乙酸乙酯后，残渣用５０％甲醇溶　性研究［Ｊ＿．中成药，１９９８．２ｏ（９ｊ：６　解，溶液澄清，且乙酸乙酯能将样品中的葛根素的有　：６］　江渡，侯世祥，孙毅毅．等．药藏紫卦吸收作为中药提取工艺　效成分提取完全。　评价指标的可行性考寨［Ｊ：中草药．２ｏ００，３ｌ（３）：１８８　张立坤，陈新旺，邹安庆ＨＰＬＥ法同时测定根痛平片中葛根索　和芍药苷［Ｊ＿中草药，１９９７．２Ｓ（１）：２２　（收稿日期　２∞Ｂ一】Ｏ—ｌ３；修回日期：２９ｏｌ—ｏ１—１５）　３．２曾按文献，　的色谱条件与系统适用性试验，其　分离效果不佳，蜂形不对称，继而选用进口ｌｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ一３　Ｃｌｓ色谱柱、ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ一２　Ｃ１Ｂ色谱柱，峰形　也不佳，故此放弃。按文献　选用流动相为：甲醇一　（本文编辑梁爱君）