外周血中CD44～+CD24_～low乳腺癌干细胞对化疗药物反应性的临床研究

Original Research

外周血中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞对化疗药物反应性的临床研究＊

韦伟１　　李朋１　　聂李平２　　胡慧１　　韩斌１　　于志强１

１．北京大学深圳医院乳腺外科，　　广东　　深圳　　５１８０３６；　　２．检验科

【摘要】　目的　探讨乳腺癌患者外周血中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞对化疗药物的反应性。　方法　分别采集３０例健康志愿者

＋

和３０例初治乳腺癌患者化疗前后的外周静脉血液各１０ｍｌ，流式细胞术（ＦＣＭ）检测ＣＤ４４ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞含量，比较　⑴健康志愿者与乳腺癌患者ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞数量的差异；⑵乳腺癌患者化疗前后ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞数量的变化。结果　⑴３０例健康志愿者外周血中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞为０～２１个／１０５，中位数为１３个／１０５；⑵　３０例初治乳腺患者化疗前、后，其外周血中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞比例和中位数，分别为５～３５个／１０５和２１个／１０５、２～４８个／１０５和３３个／１０５　；⑶健康志愿者与乳腺癌患者，以及乳腺癌患者化疗前后，外周血中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞数量的差异皆有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。　结

＋－／ｌｏｗ＋

论　　⑴乳腺癌患者外周血中ＣＤ４４ＣＤ２４乳腺癌干细胞比例高于健康志愿者；⑵化疗药物可使乳腺癌患者外周血中ＣＤ４４ＣＤ２４－／ｌｏｗ

乳腺癌干细胞比例升高；⑶乳腺癌患者外周血中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞比例可能会成为一项临床治疗效果的判断指标。【关键词】　乳腺癌；ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞；化疗；外周血【中图分类号】Ｒ７３７．９【文献标识码】Ａ

【文章编号】　１００９－３２５７（２００９）０５－０００１－０４＊【基金项目】深圳市卫生局重点项目（编号２００６２７）

The clinical research for the reaction of CD44+CD24-/low breast cancer stem cells to the chemo-therapeutics in peripheral blood

ＷＥＩ　Ｗｅｉ，　ＬＩ　Ｐｅｎｇ，　ＮＩＥ　Ｌｉ－ｐｉｎｇ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｒｅａｓｔ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，　Ｐｅｋｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｓｈｅｎｚｈｅｎ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，　Ｓｈｅｎｚｈｅｎ　５１８０３６

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　　Ｔｏ　　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ　ｉｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ．　　Ｍｅｔｈｏｄｓ　　Ｃｏｌｌｅｃｔ　３０　ｂｌｏｏｄ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ　ａｎｄ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ；ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）；ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗｃｅｌｌｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ　ａｎｄ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ，　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．　　Ｒｅｓｕｌｔｓ　　Ｉｎ　ｔｈｅｂｌｏｏｄ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｆ　３０　ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ，　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ　ｃｅｌｌｓ　ｉｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｎｕｌｌ　ａｎｄ　２１／１０５，　ｔｈｅ　ｍｅｄｉａｎ　ｉｓ　１３／１０５．　Ｉｎｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｆ　３０　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｂｅｆｏｒｅ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ　ｃｅｌｌｓ　ｉｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　５　ａｎｄ　３５／１０５，　ｔｈｅ　ｍｅｄｉａｎ　ｉｓ　２１／１０５．　Ｉｎ　ｔｈｅ　３０　ｂｌｏｏｄ　ｓａｍｐｌｅｓ　ａｆｔｅｒ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，　ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ　ｃｅｌｌｓ　ｉｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　２　ａｎｄ　４８／１０５，　ｔｈｅｍｅｄｉａｎ　ｉｓ　３３／１０５　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ　ｔｅａｍ　ａｎｄ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｅａｍ　ｂｅｆｏｒｅ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｔｅａｍ，ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ　ｃｅｌｌｓ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｈａｖｅ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　　Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ’　ｉｓ　ｌｅｓｓ　ｔｈａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ，　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｃｏｕｌｄｉｎｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ．　Ｉｔ　ｉｓ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｔｈａｔ　ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ　ｃｅｌｌｓ　ｃｏｎｔｅｎｔｉｎ　ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ　ｗｉｌｌ　ｂｅｃｏｍｅ　ａ　ｖａｌｕａｂｌｅ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｉｎｄｅｘ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｕｔｕｒｅ．［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ；　ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ　ｃｅｌｌｓ；　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｔｙ；　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ

罕少疾病杂志　　２００９年１０月　第１６卷　第５期　　１

乳腺癌是一种全身性疾病的观点已被广泛接受。有关乳腺癌细胞在血液中发生微转移灶的研究也日益增多。基于上述观点，作者利用流式细胞术（Ｆｌｏｗ　Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ），通过检测外周血中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞的含量，来比较健康志愿者和初治乳腺癌患者化疗前后该类细胞的数量差异与变化。现汇报如下：１　　资料和方法

１．１　临床资料　　北京大学深圳医院乳腺外科２００８年４月～２００９年４月，经空芯针穿刺活检明确病理诊断的初治乳腺浸润性导管癌患者共３０例，均为女性，年龄２１岁～５２岁，中位年龄３８岁。手术前均行了３次新辅助化疗，方案为环磷酰胺（５００ｍｇ／ｍ２）＋表柔比星（９０ｍｇ／ｍ２）＋多西他赛（１５０ｍｇ／ｍ２），每２１天为一疗程。对照组为健康女性志愿者３０名，年龄１８岁～４５岁，中位年龄３５岁。

１．２　主要试剂和实验方法　　１．２．１主要试剂和仪器　　鼠抗人ＩｇＧ１－ＦＩＴＣ（商品编号：１１－４７１４）、ＩｇＧ２ｂ－ＰＥ－ＣＹ５（商品编号：１５－４０３１）、ＣＤ２４－ＦＩＴＣ（克隆号：ｅＢｉｏＳＮ３）、ＣＤ４４－ＰＥ－ＣＹ５（克隆号：ＩＭ７）和ＣＤ３２６－ＰＥ（克隆号：１Ｂ７），皆为美国ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ公司产品。流式细胞仪为Ｂｅｃｋｍａｎ　Ｃｏｕｌｔｅｒ公司生产的　Ｅｐｉｃｓ　ＸＬ型。

１．２．２血液标本的采集和淋巴细胞分离　　空芯针穿刺病理确诊的乳腺癌患者，在新辅助化疗前后，外周静脉穿刺（肘正中静脉）采血１０ｍｌ，肝素钠抗凝。取２０ｍｌ试管，加入淋巴细胞分离液４ｍｌ，１０ｍｌ吸管吸取抗凝血液缓慢从试管壁注入

淋巴细胞分离液管。静置分层后离心，２０００转／ｍｉｎ，２０ｍｉｎ。离心后可见血液分层，上层淡黄色为血清、粒细胞和血小板层，第二层白色为单个核细胞层，第三层为淋巴细胞分离液层，最下层红色为红细胞。吸管吸取单个核细胞层，注入１０ｍｌ试管，磷酸盐缓冲液（以下简称ＰＢＳ）清洗两次，再加入ＰＢＳ　１００ｕｌ，重悬备用。健康志愿者采血和处理方法与以上步骤基本相同。

１．２．３细胞标记和流式细胞仪检测　　同型对照管加入ＩｇＧ１－ＦＩＴＣ　１０ｕｌ，ＣＤ３２６－ＰＥ　１０ｕｌ，ＩｇＧ２ｂ－ＰＥ－ＣＹ５　１０ｕｌ和５０ｕｌ细胞悬液；测定管加入ＣＤ２４－ＦＩＴＣ１０ｕｌ，ＣＤ３２６－ＰＥ１０ｕｌ，ＣＤ４４－ＰＥ－ＣＹ５１０ｕｌ和５０ｕｌ细胞悬液。室温避光孵育１５ｍｉｎ，ＰＢＳ清洗一次，加入ＰＢＳ５００ｕｌ重悬。同型对照管调节电压，用ＣＤ３２６－ＰＥ／ＳＳＣ设门，检测ＣＤ３２６阳性细胞群中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞所占的比例。

１．２．４统计学方法　　将乳腺癌患者化疗前、化疗后和健康志愿者各３０例血液标本分为Ａ、Ｂ和Ｃ组。计算各组算术均数和其９５％的可信区间，用方差齐性检验，检验各组方差是否整齐。如齐，用ｔ检验比较各组间均数差别是否有统计学意义；如果方差不齐，用非参数统计中ＫｒｕｓｋａｌＷａｌｌｉｓ法（Ｈ检验），比较各组间均数差别是否有统计学意义。Ｐ＜０．０５视为有统计学意义。２　　结　　果

Ａ组　ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞比例在５～３５个／１０５之间，中位数为２１个／１０５；Ｂ组ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞比例在２～４８个／１０５之间，中位数为３３个／１０５，Ｃ组ＣＤ４４＋ＣＤ２４－

表１　健康志愿者与乳腺癌患者化疗前后外周血中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞含量的比较　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞含量　　　　　　　　　　　　　　　中位数　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｘ±ｓ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（ｎ／１０５）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（ｎ／１０５）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（ｎ／１０５）健康志愿者（Ｃ）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０～２１　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５　　　　　　　　　　　　　　　　　１４．８２±２．６８乳腺癌患者化疗前（Ａ）　　　　　　　　　　　　　　　５～３５　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２１　　　　　　　　　　　　　　　　　２５．０４±３．４２乳腺癌患者化疗后（Ｂ）　　　　　　　　　　　　　　　２～４８　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３３　　　　　　　　　　　　　　　　　３６．３８±３．８３

２

JOURNAL OF RARE AND UNCOMMON DISEASESVol.16 No.5 2009

1a1b1c1d1e1f图１　健康志愿者和乳腺癌患者化疗前后外周血中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞含量　　图１ａ，图１ｂ　为健康志愿者，血液中未检测到ＣＤ３２６阳性的细胞，也无ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞　　图１ｃ，图１ｄ　为乳腺癌患者化疗前，血液中检测到ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞含量为２８个／１０５　　　图１ｅ，图１ｆ　为此乳腺癌患者化疗后，血液中检测到ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞含量为４２个／１０５

乳腺癌干细胞在０～２１个／１０５，中位数为１３个／１０５。Ａ组和Ｂ组、Ａ组和Ｃ组之间算术均数的差异皆有统计学意义（Ｐ＜０．０５）（表１和图１）。

／ｌｏｗ

３　　讨　　论

１９８９年，Ｆｉｓｈｅｒ等［１］首先提出：乳腺癌是一种全身性疾病，治疗的重点也由局部病灶彻底清除向加强术后全身辅助治疗（辅助化疗、内分泌治疗等）转变。Ｓｏｒｉａ等［２］将端粒酶作为分子标志物，通过检测端粒酶活性来检测外周血中的乳腺癌细胞；Ｗｉｔｚｉｇ等［３］利用免疫磁珠（ＩＭＢ）技术与数字电镜结合来检测乳腺癌外周血中的肿瘤细胞。上述实验从一些角度验证了Ｆｉｓｈｅｒ的观点，也提示乳腺癌外周血中的肿瘤细胞水平与治疗效

果和预后密切相关。

自从Ａ１　Ｈａｊｊ等［４］在乳腺癌组织中分离出表面标志为ＥＳＡ＋ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗＬＩＮ－的细胞，关于乳腺癌干细胞，特别是关于ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞与临床相关性研究日益增多。作者采集健康志愿者和初治乳腺癌患者化疗前后的外周静脉血液，利用ＦＣＭ检测ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞的含量，比较健康志愿者与乳腺癌患者血液中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞数量的差异，并观察化疗前后血液中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞比例的变化。

３．１乳腺癌治疗效果的判断指标　　在手术后辅助化疗药物的选择上，虽然可以根据乳腺癌患者的风险分级，选择一线的化疗药物，但是由于人体的内环境具有个体差异，所以不同患者的乳腺

罕少疾病杂志　　２００９年１０月　第１６卷　第５期　　３

癌细胞对化疗药物的敏感性差异较大。比较可靠的标准应该是化疗后原发肿瘤变小变软，但是对于手术后病人，原发癌肿已经切除，无法根据此项标准来判断患者乳腺癌细胞是否对化疗药物敏感，目前临床上也缺乏特异性指标在短期内评价手术后辅助化疗药物的有效性。

３．２流式细胞仪术　　由于正常情况下，血液中不存在上皮细胞，所以流式细胞术方案设计思路是：利用上皮特异性标记物圈门，然后对门内的细胞群进一步分析。ＥＳＡ（ＣＤ３２６）又叫上皮特异性抗原（ＥｐＣＡＭ），是分子量为４０ＫＤａ的的细胞表面糖蛋白，属广谱的上皮细胞标记，大多数上皮细胞均为阳性反应，主要用于腺癌和鳞癌的诊断［５］

。所以作者采用ＣＤ３２６（ＥＳＡ）／ＳＳ代替ＦＳ／ＳＳ圈门，针对ＥＳＡ阳性的细胞进行研究，减少了淋巴细胞和单核细胞等的影响。检测方案建立后，可以用乳腺癌细胞株预检测，以便熟悉细胞群所在位置和初步确定各种参数。

３．３检测血液中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ细胞的含量与治疗相关性的现状　　根据干细胞假说，乳腺癌组织中的癌细胞之间存在异质性，常规治疗只能杀灭非干细胞，而耐药干细胞的残留成为复发的根源，所以目前关于干细胞研究的主要目的是设计出针对干细胞的靶向治疗药物，与现行的常规联合，有望彻底消灭肿瘤细胞。龚继芳等［６］曾用流式细胞仪检测健康志愿者、乳腺癌患者化疗前后血液中ＣＤ４５－ＣＤ４４＋／ＣＤ２４－／ＡＢＣＧ２－细胞的比例，结果提示：乳腺癌患者外周血中ＣＤ４５－ＣＤ４４＋／ＣＤ２４－／ＡＢＣＧ２－细胞高于健康志愿者，化疗似可使外周血中ＣＤ４５－ＣＤ４４＋／ＣＤ２４－／ＡＢＣＧ２－细胞比例下降；但是Ｘｉａｏｘｉａｎ　Ｌｉ等［７］研究表明乳腺癌干细胞对化疗药物是耐药的，但靶向治疗药物拉帕替尼可能有一定效果，关于有效性和作用机制还有待进一步研究。

３．４对试验结果的分析　　本试验提示乳腺癌患者血液中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞比例多于健康志愿者，考虑ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌细胞可能是富含干细胞的一群细胞，乳腺癌患者血液中含量较高符合乳腺癌是一种全身疾病，可以早期血液播散的观点。化疗可是乳腺癌患者外周血中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞比例升高，是由于

乳腺癌干细胞对化疗药物的耐药，在化疗结束后，非干细胞被有效的杀灭，所以乳腺癌干细胞的比例相对升高。

综上所述，本研究结果显示：健康志愿者血液中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞比例少于乳腺癌患者，化疗可使乳腺癌患者外周血中ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ

乳腺癌干细胞比例升高。与现行的乳腺癌细胞外周血标记物相比［８，９］，ＣＤ４４＋ＣＤ２４－／ｌｏｗ乳腺癌干细胞从分布和细胞功能上双重标记乳腺癌细胞血道微转移灶，随着乳腺癌干细胞的特性被逐渐阐明，血液中乳腺癌干细胞比例可能会成为一项有价值的临床治疗效果的判断指标，也将有助于干细胞的靶向治疗。

【参考文献】

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ｍＲＮＡ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｚｈｏｎｇ　ｈｕａ　ＷａｉＫｅ　Ｚａ　Ｚｈｉ，２００２，４０（３）：１６８－１７０．９．　Ｒｏｎｃｅｌｌａ　Ｓ，Ｆｅｒｒｏ　Ｐ，Ｂａｅｉｇａｌｕｐａ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｈｕｍａｎ　ｍａｍｍａｇｌｏｂｉｎ

ｍＲＮＡ　ｉｓ　ａ　ｒｅｌｉａｂｌｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｏｃｃｕｌｔｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ．Ｊ　Ｅｘｐ　Ｃｌｉｎ　ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００５，２４（２）：２６５－２７１．

【收稿日期】　２００９－０６－０６

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JOURNAL OF RARE AND UNCOMMON DISEASESVol.16 No.5 2009