任国强等右美托咪定对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤心肌组织炎症反应和氧化应激损伤的影响第１１期 右美托咪定对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤心肌组织炎症反应和 氧化应激损伤的影响 任国强 陈 萍．于金贵 （山东大学齐鲁医院麻醉科山东省精神卫生中心，山东 济南 ２５００１４） ［摘方法要］ 目的探讨右美托咪定（Ｄｅｘ）对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤（Ｉ／Ｒ）心肌组织炎症反应和氧化应激损伤的影响。 将３０只ｓＤ大鼠随机分为对照组、Ｉ／Ｒ组和Ｄｅｘ组，采用Ｌａｎｇｅｎｄｏｆｆ灌流系统构建心脏Ｉ／Ｒ模型。观察Ｉ／Ｒ期间心功能各项 指标，测定心肌组织中炎症因子细胞肿瘤因子一 （ＴＮＦ— ）和白细胞介素＿６（ＩＬ－６）含量以及氧化应激指标超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活 性和丙二醛（ＭＤＡ）含量。蛋白质印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ）和半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）法检测心肌组织中核转录因子．ｃＢ ｐ６５（ＮＦ．ＫＢ ｐ６５）和血红素加氧酶１（ＨＯ．１）蛋白和ｍＲＮＡ表达情况。结果与Ｉ／Ｒ组相比，Ｄｅｘ组可改善Ｉ／Ｒ所致的心功能损伤， 减少心肌组织中ＴＮＦ—ｄ、ＩＬ－６、ＭＤＡ产生和ＮＦ—ＫＢ ｐ６５表达，增强ＳＯＤ活性和ＨＯ－１表达，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论 右美托咪定对离体心脏Ｉ／Ｒ损伤有一定的保护作用，其作用机制可能与下调ＮＦ—ＫＢ ｐ６５炎症通路及上调ＨＯ一１抗氧化有关。 ［关键词］右美托咪定；离体心脏Ｉ／Ｒ损伤；心肌组织；炎症反应；氧化应激 ［中图分类号］Ｒ４１６ ［文献标识码］Ａ ［文章编号）１００５－９２０２（２０１８）１１－２７０９－０４：ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－９２０２．２０１８．１１．０５８ 近年来，急性心肌梗死的发病人数和年龄有着明 显升高和年轻化的趋势¨ 。目前，心肌血运重建术 是临床上急性心肌梗死治疗的主要手段，而缺血再灌 注损伤（Ｉ／Ｒ）是影响治疗过程中常见生理病理因素。 右美托咪定（Ｄｅｘ）是一种在血管疾病围术期起到麻醉 和镇痛作用的常用药物。已有大量文献证实，Ｄｅｘ对 Ｉ／Ｒ有一定的改善作用，但其具体的作用机制尚不明 确 －６１。本研究从炎症和氧化应激反应出发，探讨 Ｄｅｘ改善Ｉ／Ｒ的相关机制。 １材料与方法 １．２．１大鼠实验分组及离体心脏Ｉ／Ｒ模型的制备 实验分组：将３０只大鼠随机分为对照组、Ｉ／Ｒ组、Ｄｅｘ． Ｍ组（２．３ ｎｇ／ｍ１），每组１０只。对照组大鼠在心脏离 体平稳３０ ｒａｉｎ后，持续灌注１５０ ｍｉｎ，Ｉ／Ｒ组、Ｄｅｘ．Ｌ 组、Ｄｅｘ—Ｍ组和右美托咪定－Ｈ组大鼠均在心脏离体平 稳３０ ｍｉｎ后，停罐３０ ｒａｉｎ，再灌注１２０ ｍｉｎ。离体心脏 Ｉ／Ｒ模型制备：将大鼠以１０％水合氯醛进行腹部麻醉 后，迅速取出心脏，主动脉插管后，将心脏固定在Ｌａｎ． ｇｅｎｄｏｆｆ灌流装置上。常温下，以含５％ＣＯ２和９５％Ｏ２ 的Ｋ．Ｈ溶液进行恒温恒压灌流，连通生理信号采集处 理系统，心脏稳定３０ ｍｉｎ后，在心肌张力和心率恢复 正常时，停灌３０ ｒａｉｎ，根据实验分组进行加药，灌注 １２０ ｍｉｎ。记录并收集心功能心率（ＨＲ）、左心室舒张 压（ＬＶＤＥＰ）、冠脉流量（ＣＦ）、室内压最大上升速率 （＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ）和室内压最大下降速率（一ｄｐ／ｄｔｍａｘ）等 指标。 １．２．２心肌组织中炎症因子和氧化应激指标的测定 在灌流结束后，收集各组大鼠的心肌组织，于４℃下 制成匀浆（浓度１０％），离心取上清液，根据试剂盒操 作步骤测定各组大鼠心肌组织中ＴＮＦ．Ｏｔ、ＩＬ－６、ＭＤＡ含 量及ＳＯＤ活性。每组重复检测３次。 １．２．３心肌组织中ＮＦ－ＫＢ ｐ６５和ＨＯ一１蛋白的测定 灌流结束后，将各组大鼠心肌组织剪碎后，加人蛋白 裂解液提取总蛋白，并采用ＢＣＡ试剂盒检测其浓度。 将蛋白样品与ｌｏａｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ混匀后，置于１００ｏＥ水浴 中变性。将蛋白样品６Ｏ ｇ滴加到十二烷基硫酸钠聚 丙烯酰胺凝胶孔中，开始以７０ Ｖ电压，后改用９Ｏ Ｖ电 １．１实验材料健康ＳＰＦ级雄性ＳＤ大鼠３０只，体 质量２２０～２５０ ｇ，购于昆明医科大学实验动物中心， Ｄｅｘ购于江苏恒瑞医药有限公司。超氧化物歧化酶 （ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）一 、白细 胞介素（ＩＬ）－６试剂盒和二喹啉甲酸（ＢＣＡ）蛋白检测 试剂盒购于杭州四季青公司。放射免疫沉淀法（ＲＩ— ＰＡ）蛋白裂解液、逆转录试剂盒和总ＲＮＡ提取试剂盒 购于碧云天生物技术研究所，核转录因子（ＮＦ）－ＫＢ ｐ６５和血红素加氧酶（ＨＯ）．１蛋白、Ｂ肌动蛋白（Ｂ—ａｅ． ｔｉｎ）和辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的二抗购于美国 Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司。Ｋ．Ｈ灌流液配方参照郑凌云等 ７１研 究。Ｌａｎｇｅｎｄｏｆｆｆ灌流系统和张力换能器连接多道生理 信号采集系统购于成都仪器厂。 １．２方法 基金项目：国家科技重大专项项目（２０１２ＺＸ０９３０３０１ ６－００３） １ 山东省血液中心血液科 通信作者：于金贵（１９６３一），男，主任医师，主要从事围术期心肌保护和 麻醉药对循环系统的影响等方面的研究。 第一作者：任国强（１９８１一），男，硕士研究生，主治医师，主要从事麻醉中 的心脏保护研究。 压电泳分离。待电泳结束后，以２５０ ｍＡ的电流将蛋 白样品转至聚偏二氟乙烯膜上，再置于含有脱脂奶粉 的封闭液中处理２．ｈ。于４℃下加入一抗（ＮＦ．ＫＢ ｐ６５、 ＨＯ一１和１３－ａｃｔｉｎ）反应过夜。次日，以封闭液洗涤后， 室温下加入二抗反应１ ｈ。洗涤后，于避光条件下，加 空崮垄 堂 查 至 笙 鲞 入电化学试剂显色，以凝胶成像系统采集图片，图像软 件分析各目的蛋白的表达水平。每组实验重复３次。 １．２．４心肌组织中ＮＦ—ＫＢ ｐ６５和ＨＯ一１ ｍＲＮＡ的测定 在灌流结束后，收集各组大鼠的心肌组织，剪碎，以 ｅｈＲＮＡ提取试剂盒提取总ＲＮＡ，并参照逆转录试剂 一、ｔ￣，为５ 一ＴＣＣＧＡＴＧＧＧＴｃｃｒｒｒＡｃＡＣＴＣ一３ ，下游引物为５ 一 ＡＡ（；ＧＡＡＧＣＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡ．－３ 、 １．３统汁学分析应用ＳＰＳＳ２１．０软件对数据进行分 析，计量资料以（ ±ｓ）表示，多组问采用 Ｌ大Ｊ素方筹分 析，两组问采用独立样本ｔ检验比较，以Ｐ＜Ｏ．０５为蓐 异有统计学意义。 ２ 结 果 盒合成ＤＮＡ。将２０ 反应体系按照设定的扩增条件 上ＰＣＲ仪，以Ｉ３一ａｃｔｉｎ作内参，２ ’法测定ＮＦ—ＫＢ ｐ６５ 和ＨＯ一１ ｍＲＮＡ的相对表达水平。扩增条件：９４℃预 变性５ ｒａｉｎ，９５℃变性１５ Ｓ，５６℃退火１５ Ｓ，７２℃延伸 ３０ Ｓ，３２个循环。Ｂ—ａｃｔｉｎ上游引物为５ ．ＧＧＡＣＣＴ— ＧＡＣＴＧＡＣＴＡＣＣ．－ＴＣ一３ ，下游引物为５ ．．ＴＡＣＴＣＣＴＧＣＴ— ＴＧＣＴＧＡＴ一３ 。其中ＮＦ－ＫＢ ｐ６５上游引物为５ 一ＣＧＧ— ＧＡＴＧＧＣＴＡＣＴＡＴＧＡＧＧＣＴＧＡＣ一３ ，下游引物为５ ＧＡＴＩ＂ＣＧＣＴＧＧＣＴＡＡＴＧＧＣＴＩ＇ＧＣ—Ｔ一３ ；ＨＯ—ｌ上游弓Ｉ物 ２．１ Ｄｅｘ对心功能的影响 与对照组相比，Ｉ／Ｒ组巾 ＨＲ、ＣＦ、＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ和一ｄｐ／ｄｔｍａｘ指标均明 降低， ＬＶＤＥＰ指标明显升高，心功能减弱；在Ｉ／Ｒ挂础卜给 予Ｄｅｘ后，ＨＲ、ＣＦ、＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ和一ｄｐ／ｃ：ｈｍａｘ指标明 升高，而ＬＶＤＥＰ指标明显降低，心功能有所改善．差 异具有统汁学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）． 表１。 表１ Ｄｅｘ对心功能的影响（ｉ ，，ｌ＝１０） 与对照组相比：１）Ｐ＜０．０５；与Ｉ／Ｒ组相比：２）Ｐ＜０．０５；下表同 ２．２ Ｄｅｘ对心肌组织中炎症反应的影响 与对照组 相比，Ｉ／Ｒ组和Ｄｅｘ组大鼠心肌组织中ＩＩ －６和ＴＮＦ—Ｏｒ． Ｄｅｘ组中ＳＯＤ活性升高，而ＭＤＡ含量下降。提示Ｄｅｘ 明显改善大鼠离体心脏Ｉ／Ｒ损伤引起的氧化应激损 伤，差异均有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５） 见表２ 、 ２．４ Ｄｅｘ对心肌组织中ＮＦ—ＫＢ ｐ６５和ＨＯ一１蛋白的影 响 ＿Ｉｊ对照组相比，Ｉ／Ｒ组和Ｄｅｘ组ｒｆ】ＮＦ—ＫＢ ｐ６５和 含量均明显升高，但Ｄｅｘ组中两种因子的含量又明显 低于Ｉ／Ｒ组，差异均有统计学意义（， ＜０．０５）。表明 Ｄｅｘ明显改善大鼠离体心脏Ｉ／Ｒ损伤引起的炎症反 应 见表２ 表２ Ｄｅｘ对心肌组织中ＩＬ－６、ＴＮＦ－ｏｔ含量及 ＨＯ一１蛋白的表达水平均明显升高；Ｄｅｘ组中Ｎ ＫＢ ｐ６５的表达水平下降，而ＨＯ一１蛋白的表达升高，与Ｉ／Ｒ 组相比，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。见图ｌ、表 肘照组 Ｉ／Ｒ组Ｄｅｘ组 ＳＯＤ活性和ＭＤＡ含量的影响（ 蜘。ｎ＝１０） Ｉ１ ＿６ Ｍ１）１、 组别 对照组 Ｉ／Ｒ组Ｄｅｘ组（ １） （ＩＩ１￣１·１１／ＩｌＩ Ｉ｝ｒｉ ｝１ ７．２±（】．＾ ｌ５．８ ：ｌ ２ ｌ０．２ ０ ｑ㈠ ７９．８－＋４．５ ２２５．２±ｌ１．２。 １ ３８．７－＋８．６ ） ＨＯ．１ ＩＳ－ａｃｌｌｎ ２．３ Ｄｅｘ对心肌组织氧化应激反应的影响 与对照 组比较，Ｉ／Ｒ组和Ｄｅｘ组大鼠心肌组织中ＳＯＤ活性均 明显降低，而ＭＤＡ含量均明显升高；与Ｉ／Ｒ组相比， 图１ Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测结果 任国强等右美托咪定对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤心肌组织炎症反应和氧化应激损伤的影响第１１期 ２．５ Ｄｅｘ对心肌组织中ＮＦ－ＫＢ ｐ６５和ＨＯ一１ ｍＲＮＡ表 达的影响ＲＴ－ＰＣＲ检测各组大鼠心肌组织中ＮＦ—ＫＢ ｐ６５和ＨＯ．１ ｍＲＮＡ的表达。Ｉ／Ｒ组和Ｄｅｘ组中ＮＦ— ＫＢ ｐ６５和ＨＯ．１ ｍＲＮＡ的表达水平均明显升高，与对 照组相比，差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）；与Ｉ／Ｒ组相 比，Ｄｅｘ组中ＮＦ－ＫＢ ｐ６５ ｍＲＮＡ的表达水平下降，而 ＨＯ．１ ｍＲＮＡ的表达升高，差异有统计学意义（Ｐ＜ 氧、炎性因子和细胞因子等的产生和分泌过程中扮演 着重要角色 １３）。ＨＯ．１是一种血红素降解的限速酶， 在阻止炎症过程和氧化性组织损伤中发挥着重要的保 护作用¨ ’ 。Ｗａｎｇ等ｕ 指出，Ｄｅｘ可通过抑制 ＮＦ．ＫＢ表达减弱炎症反应，进而发挥了保护脑缺８／再 灌注损伤的作用。王宇恒等 研究发现，Ｄｅｘ能够上 调细胞中ＨＯ一１蛋白的表达，发挥抗氧化应激损伤的 ０．０５）。见表３。 表３各组大鼠心肌组织中ＮＦ－ＫＢ ｐ６５和 Ｈｏ－１蛋白及ｍＲＮＡ的相对表达量（ ，，ｌ＝１０） 组别 ｓ Ｎ Ａｌ 对照组０．５４＿＋０．０５ ０．１５±Ｏ．０２ １．００＿＋０．１９ １．００＿＋０．１５ Ｉ／Ｒ组０．８５＿＋０．０８ ０．３６＿＋０．０３“２．３８＿＋０．３２”１．８３＿＋０．２８ ） Ｄｅｘ组０．６８￣０．Ｏ６ ） ０．５０￣０．０５ ） １．５７￣０．２８ ） ２．５７￣０．３０１） ） ３讨论 Ｉ／Ｒ是影响急性心肌梗死治疗的重要因素。ＨＲ、 ＬＶＤＥＰ、ＣＦ、＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ和一ｄｐ／ｄｔｍａｘ指标的改变是反 映Ｉ／Ｒ的重要表现。本研究发现，与对照组相比，Ｉ／Ｒ 组和Ｄｅｘ组中ＨＲ、ＣＦ、一ｄｐ／ｄｔｍａｘ和一ｄｐ／ｄｔｍａｘ指标 降低，ＬＶＤＥＰ指标升高，表明Ｉ／Ｒ模型构建成功。同 时，与Ｉ／Ｒ组相比，Ｄｅｘ组中ＨＲ、ＣＦ、＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ和 一ｄｐ／ｄｔｍａｘ指标升高，ＬＶＤＥＰ指标下降。表明Ｄｅｘ可 以改善离体心脏Ｉ／Ｒ。这一结果与陈雪君等 得到 Ｄｅｘ后处理能够改善缺血再灌注左心室功能，减轻心 肌缺血再灌注损伤的结论相吻合。 心肌ＶＲ是一个复杂的过程，炎症和氧化应激是 其形成和发展的重要机制 ’ｍ Ｊ。ＴＮＦ 仅是机体受到刺 激后，发挥关键始动作用、激活细胞因子级联反应的重 要物质，反映了炎症反应的程度；ＩＬ．６是由巨噬细胞、Ｔ 细胞和单核细胞等产生，反映组织损伤早期情况的物 质，两者均在炎症反应中起促进作用，是常用的炎症检 测指标。ＭＤＡ是脂质过氧化反应过程中产生的一种 具有生物毒性的代谢产物，可反映自由基的损伤程度； ＳＯＤ是一种具有清除自由基功能的抗氧化酶，可反映 机体清除氧自由基的能力；两者是常用的氧化应激指 标。张玉辉等¨ 研究指出，Ｄｅｘ通过抑制促炎因子 ＴＮＦ—ｏｔ和ＩＬ．６的释放，减轻了心脏瓣膜置换术患者心 肌缺血再灌注引起的损伤。Ｚｅｎｇ等¨纠发现，在糖尿病 大鼠短暂脑缺血再灌注诱导的氧化应激和炎症反应 中，Ｄｅｘ可通过下调ＭＤＡ、ＮＯＸ２、ＴＮＦ—ｏｒ．和ＩＬ－６等减 弱氧化应激和炎症反应。本研究结果发现，在Ｉ／Ｒ基 础上，给予Ｄｅｘ处理后，心肌组织中ＩＬ－６、ＴＮＦ—ｏｔ和 ＭＤＡ含量下降，而ＳＯＤ活性升高。表明Ｄｅｘ能够减 轻离体心脏缺血再灌注损伤中的炎症反应和氧化应激 损伤。 ＮＦ－ＫＢ是炎症反应的重要转录因子，在调控活性 作用。本研究发现，与Ｉ／Ｒ组相比，Ｄｅｘ组中ＮＦ—ＫＢ ｐ６５蛋白和ｍＲＮＡ的表达下降，而ＨＯ．１蛋白和ｍＲＮＡ 的表达升高。提示Ｄｅｘ可能通过下调ＮＦ—ＫＢ ｐ６５和 ｎｏ．１表达，抑制离体心脏缺血再灌注损伤过程中的炎 症和氧化应激过程。 综上所述，右美托咪定可减轻离体心脏Ｉ／Ｒ损伤， 其作用机制可能与下调ＮＦ—ＫＢ ｐ６５炎症通路及上调 ＨＯ．１抗氧化通路，改善心肌组织的炎症和氧化应激水 平有关。这为离体心脏Ｉ／Ｒ的发生和发展提供了新的 线索，也为右美托咪定改善离体心脏Ｉ／Ｒ损伤提供了 新的依据。 ４参考文献 １ Ｗｒｉｔｉｎｇ ＧＭ，Ｍｏｚａｆｆａｒｉａｎ Ｄ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ ＥＪ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｅｃｕｔｉｖｅ ｓｕｍｍａｒｙ：ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｓｔｒｏｋｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ－２０１６ ｕｐｄａｔｅ：Ａ ｒｅｐｏｒｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２０１６；１３３（４）：４４７． ２黄振华，叶子，蒋鹏，等．ｍｉＲＮＡｓ在急性心肌梗死诊断中的研究 进展［Ｊ］．岭南心血管病杂志，２０１７；２３（３）：３４７－５０． ３ Ｓｕｎ Ｈ，Ｚｈｏｕ Ｍ，Ｚｈｏｎｇ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｘｍｅｄｅｔ０ｍｉｄｉｎｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｒｅｄｕｃｅｓ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｅｈｅｍｉａ ａｎｄ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｒａｔｓ ｂｙ ａｌｔｅｒｉｎｇ ＪＡＫ／ＳＴＡＴ ａｎｄ ＰＤＫ／Ａｋｔ ｌｅｖｅｌｓ（Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，２０１６；９（２）：３７８５－９． ４ Ｙｏｓｈｉｋａｗａ Ｙ，Ｈｉｒａｔａ Ｎ，Ｋａｗａｇｕｃｈｉ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅ ｍａｉｎｔａｉｎｓ ｉｔｓ ｄｉｒｅｃｔ ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ａｇａｉｎｓｔ ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｈｙ· ｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｅｄ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ［Ｊ］．Ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ，２０１８；１２６（２）： ４４３＿５２． ５ Ｃａｋｉｒ Ｍ，Ｐｏｌａｔ Ａ，Ｔｅｋｉｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅ ａｇａｉｎｓｔ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ａｎｄ ｔｕｂｕｌａｒ ｄａｍａｇｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｒｅｎａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎ ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｒｅｎａｌ Ｆａｉｌｕｒｅ，２０１５；３７（４）：７０４－８． ６ Ｃｈｅｎ Ｓ，Ｈｕａ Ｆ，Ｌｕ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｌｄｉｎｅ ｏｎ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓ— ｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，２０１５；８（１１）： ２１１６６． ７郑凌云，岑柏宏，梁燕玲，等．乌榄叶水提取物对大鼠离体心脏缺血 再灌注损伤的保护作用［Ｊ］．实用医学杂志，２０１７；３３（６）：８８５－９． ８陈雪君，雷凡，周芳．右美托咪啶后处理对大鼠离体心脏缺血 再灌注的影响［Ｊ］．现代中西医结合杂志，２０１３；２２（３３）：３６６０－２． ９ Ｈｕ Ｈ，Ｚｈａｉ Ｃ，Ｑｉａｎ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅ ＩＩＡ ｏｎ ｍｙｏ－ ｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ ｂｙ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ，ＨＭＧＢ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｅｅｕｔ Ｂｉｏｌ，２０１５；５３ （１２）：１７５２－８． １０ Ｙａｏ ＢＪ，Ｈｅ ＸＱ，Ｉ｜ｉｎ ＹＨ，ｅｔ ａ１．Ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｎｉｓｏｄａｍｉｎｅ ａｇａｉｎｓｔ ｍｙｏｃａｒｄｉｌａ ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ，２０１８；１７ （１）：１２５３－６０． １１张玉辉，高亚坤，肖连波，等．右美托咪啶对体外循环下心脏瓣膜 置换术患者心肌缺血再灌注损伤的影响［Ｊ］．临床心血管病杂志， ２０１５；３１（１１）：１１９５－７． １２ Ｚｅｎｇ Ｘ，Ｗａｎｇ Ｈ，Ｘｉｎｇ Ｘ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｒａｎ－ 中国老年学杂志２０１８年６月第３８卷 ｓｉｅｎｔ ｇｌｏｂａｌ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｔｏｓｉｓ，２０１３；１８（５）：５４７－５５． １６ Ｗａｎｇ Ｌ，Ｌｉｕ Ｈ，Ｚｈａｎｇ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｘｍｅｄｅｔｏｍｉｄｉｎｅ ａ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ［Ｊ］．ＰＩｏＳ ｏｎｅ，２０１６；１１（３）：ｅ０１５１６２０． １３ Ｇａｍｂｈｉｒ Ｓ，Ｖｙａｓ Ｄ，Ｈｏｌｌｉｓ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａ Ｂ ｒｏｌｅ ｉｎ ｉｎ— ｇａｉｎｓｔ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｒａｔｓ：ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｌｆａｍｍａｔｉｏｎ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｇａｓｔｏｉｒｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｏ—ｒ ｅｎｔｅｒｏｌ：ＷＪＧ，２０１５；２１（１１）：３ｌ７４． １４ Ｏｎｙｉａｈ ｊｃ，Ｓｈｅｉｋｈ ＳＺ，Ｍａｈａｒｓｈａｋ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｃａｒｂｏｎ ｍｏｎｏｘｉｄｅ ａｎｄ ｈｅｍｅ ｏｘｙｇｅｎａｓｅ·１ ｐｒｅｖｅｎｔ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ ｂｙ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｂａｃｔｅ－ ｏｆ ＮＦ－ＫＢ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ＋ ２０１７；２５（４）：３８３． １７王宇恒，焦晶华，李明选，等．右美托眯定对低氧诱发人支气管上 皮细胞氧化应激损伤的影响［Ｊ］．解剖科学进展，２０１７；２３（６）： ６３０－３． ｒｉｌ ｃｌａｅａｒａｎｃｅ［Ｊ）．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２０１３；１４４（４）：７８９－９８． １５ Ｂｅｎ—Ａｒｉ Ｚ，Ｉｓｓａｎ Ｙ，Ｋａｔｚ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍｅ ｏｘｙｇｅｎａｓｅ－１ ｐｒｏ— ［２０１８－０３－２０修回］ ｔｅｃｔｓ ｍｏｕｓｅ ｌｉｖｅｒ ｆｒｏｍ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ａｐｏｐ一 （编辑 曲 莉） 六味地黄丸对糖尿病大鼠血管功能的影响及抗氧化应激机制 于 洋［摘赵宁 张娜 （锦州医科大学生理学教研室，辽宁 锦州 １２１００１） 要］ 目的观察六味地黄丸（ＬＷＤＨＰ）对糖尿病（ＤＭ）大鼠血管功能及抗氧化应激的作用，探讨ＬＷＤＨＰ在ＤＭ血管病 雄性ｓＤ大鼠随机分为正常对照组、ＤＭ模型组和ＬＷＤＨＰ治疗组（１．２ ｇ／ｋｇ），每组ｌＯ只。高脂饲料配合 变中的保护机制。方法小剂量链脲佐菌素（ＳＴＺ）３０ ｍｇ／ｋｇ建立２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）大鼠模型。治疗８ Ｗ后分离胸主动脉，观察血管的舒张功能；试剂盒检 测血管组织中丙二醛（ＭＤＡ）的浓度和一氧化氮（ＮＯ）的含量；ＲＴ－ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测血管组织中蛋白质精氨酸甲基转移酶１ （ＰＲＭＴ）１ ｍＲＮＡ和蛋白的表达。结果与正常对照组比较，Ｔ２ＤＭ大鼠主动脉内皮依赖性舒张功能和血管组织中ＮＯ的含量显著 下降，ＭＤＡ浓度增加（Ｐ＜０．０１）。ＬＷＤＨＰ治疗可有效地减轻ＤＭ大鼠血管内皮功能障碍，增加ＮＯ的含量和降低ＭＤＡ的含量（Ｐ＜ ０．０１）。同时ＤＭ大鼠血管组织中ＰＲＭＴ１ ｍＲＮＡ和蛋白的表达量显著升高（Ｐ＜０．０１），ＬＷＤＨＰ治疗后ＰＲＭＴ１ ｍＲＮＡ和蛋白的表达 量明显下降（Ｐ＜０．０１）。结论ＬＷＤＨＰ可显著改善Ｔ２ＤＭ大鼠的血管内皮舒张功能障碍，通过调节ＭＤＡ／ＰＲＭＴ１／Ｎ０的表达，抑制 氧化应激损伤而保护血管内皮。 ［关键词）六味地黄丸；糖尿病；血管功能；氧化应激 ［中图分类号）Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００５－９２０２（２０１８）１１－２７１２－０４；ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓａ．１００５－９２０２．２０１８．１１．０５９ 血管内皮细胞功能不全（ＥＣＤ）已经成为２型糖尿 病（Ｔ２ＤＭ）及其血管并发症发生发展的始动关键因素 及病理基础，并贯穿于整个病程的始终…。研究表明 内皮源型一氧化氮（ＮＯ）可引起内皮依赖性舒张功能， 介导血管舒张 Ｊ。Ｔ２ＤＭ造成的氧化应激（ＯＳ）损伤 不但是糖尿病（ＤＭ）及血管并发症的重要机制，也加 药准字Ｚ１９９９３０６８）；ＰＲＭＴ１一抗，鼠抗人ＧＡＰＤＨ一 抗，美国Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ Ｇｒｏｕｐ公司；辣根过氧化物酶 （ＨＲＰ）标记的羊抗兔、羊抗鼠ＩｇＧ二抗，Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司；ＲＴ—ＰＣＲ试剂盒，ＴａＫａＲａ公司；链脲 速了ＥＣＤ的发生发展 。六味地黄丸（ＬＷＤＨＰ）是著 名中成药，广泛用于临床，尤其在高血脂、脂肪肝、 Ｔ２ＤＭ和肥胖等代谢性疾病的防治中突显优势 ］。本 实验通过观察ＬＷＤＨＰ对ＤＭ大鼠血管内皮舒张功 能、ＮＯ含量、丙二醛（ＭＤＡ）浓度及相关基因蛋白质精 氨酸甲基转移酶（ＰＲＭＴ）１表达的影响，探讨ＬＷＤＨＰ 在ＤＭ血管病变中的保护机制。 １材料与方法 佐菌素（ＳＴＺ），Ｓｉｇｍａ公司；总ＮＯ检测试剂盒，ＭＤＡ检 测试剂盒，碧云天生物技术研究所。 １．３ Ｔ２ＤＭ大鼠模型建立及药物干预健康雄性ｓＤ 大鼠，适应性喂食１ Ｗ后，随机分为正常对照组（１０ 只）和造模组（２０只）。正常对照组喂食普通饲料，造 模组喂食高脂饲料（１００ ｇ／Ｌ猪油＋１００ ｇ／Ｌ蛋黄粉＋ １．０ ｇ／Ｌ胆盐＋１Ｏ Ｌ维生素＋７８９ ｇ／Ｌ基础饲料）。 ５ Ｗ后大鼠禁食不禁水ｌ４～１６ ｈ，造模组腹腔注射ＳＴＺ ３０ ｍｇ／ｋｇ（用柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液配成浓度为 １０ Ｌ的ＳＴＺ溶液），正常对照组注射等体积的柠檬 酸一柠檬酸钠缓冲液，１次／ｄ，连续２ ｄ。１ Ｗ后鼠尾静 脉取血监测血糖水平，以两次随机血糖≥１６．７ ｍｍｏｌ／Ｌ 作为Ｔ２ＤＭ模型成功的标志，继续喂养高脂饲料４ Ｗ 以稳定模型。Ｔ２ＤＭ模型大鼠随机分为ＤＭ模型组和 ＬＷＤＨＰ治疗组，每组１０只。ＬＷＤＨＰ治疗组给予 ３ ｍｌ／ｋｇ的药物混悬液进行灌胃（用生理盐水配制，剂 量为１．２ ｇ／ｋｇ），正常对照组和ＤＭ模型组以等体积生 理盐水灌胃，１次／ｄ，连续灌胃８ Ｗ。给药期间ＤＭ模 型组与ＬＷＤＨＰ治疗组大鼠继续喂食高脂饲料。８ Ｗ １．１动物３０只雄性ＳＰＦ级ＳＤ大鼠，体质量１６０～ １９０ ｇ，购自辽宁长生生物技术有限公司［许可证号： ＳＣＸＫ（辽）２０１０－０００１］。 １．２主要试剂ＬＷＤＨＰ（浓缩丸），北京同仁堂（国 基金项目：辽宁省科技厅科学技术计划项目（２０１５０２０７０６） 第一作者：于洋（１９７４．），女，副教授，博士，硕士生导师，主要从事代 谢综合征的信号转导研究。