维普资讯 http://www.cqvip.com １０４ ．中国康复医学杂志，２００６年，第２１卷，第２期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＲｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｅ，Ｆｅｂ．２００６，Ｖｏ１ｎ．２１，Ｎｏ－２ 基础研究・ 督脉电针与神经干细胞移植联合应用促进Ｓ ＣＩ横断 大鼠前角运动神经元存活及减轻后肢肌萎缩的研究 李晓滨 曾园山１，２ 陈玉玲 陈穗君 摘要 目的：探讨督脉电针与神经干细胞移植联合应用对大鼠脊髓全横断损伤的前角运动神经元存活以及减轻后 肢肌萎缩有无促进作用。方法：将正常组、对照组、督脉电针组（电针组）、神经干细胞移植组（ＮＳＣｓ组）和督脉电针＋神 经干细胞移植组（电针ＮＳＣｓ组）成年大鼠Ｔ１０脊髓段做全横断损伤，其中ＮＳＣｓ组和电针ＮＳＣｓ组在损伤处移植神经 干细胞，电针组和电针ＮＳＣｓ组在术后开始接受督脉电针治疗。所有实验动物在脊髓损伤后存活６５天。结果：电针 ＮＳＣｓ组大鼠其腰段脊髓受损伤运动神经元的存活数量明显多于其他实验对照组大鼠。电针ＮＳＣｓ组大鼠后肢的股 二头肌萎缩程度明显小于其他实验对照组大鼠。结论：督脉电针与神经干细胞移植联合应用能够促进大鼠脊髓全横 断损伤后受损伤的脊髓前角运动神经元存活，以及减轻大鼠脊髓全横断损伤后瘫痪的后肢股二头肌的萎缩状况。 关键词 督脉；电针：神经干细胞移植；脊髓损伤；运动神经元；肌萎缩；大鼠 中图分类号：Ｒ２４５．９７．￥３３８．２１．Ｒ４９ 文献识别码：Ａ 文章编号：１００１—１２４２（２００６）一０２—０１０４—０４ Ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｏｒｅｍｏｒ Ｖｅｓｓｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｔｏ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｉｎｊｕｒｅｄ ｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎ ｏｆ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｈｏｒｎ ａｎｄ ｔｏ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｍｙａｔｒｏｐｈｙ ｏｆ ｈｉｎｄ ｌｉｍｂｓ ｉｎ ｒａｔ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｔｒａｎｓｅｃｔｅｄ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ／ＬＩ Ｘｉａｏｂｉｎ，ＺＥＮＧ Ｙｕａｎｓｈａｎ，ＣＨＥＮ Ｙｕｌｉｎｇ，ｅｔ ａｌＪ／Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａ－ ｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０Ｏ６，２１（２）：１０４－－１０７ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｏｒｅｍｏｒ ｖｅｓｓｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（ＮＳＣｓ）ｏｎ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｉｎｊｕｒｅｄ ｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎ ｏｆ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｈｏｒｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｙａｔｒｏｐｈｙ ｏｆ ｈｉｎｄ ｌｉｍｂｓ ｉｎ ｒａｔ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｔｒａｎｓｅｃｔｅｄ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ ｔｒａｎｓｅｃｔｉｏｎ ｔｈｅ Ｔ１０ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｏｆ ａｄｕｌｔ ｒａｔｓ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ＮＳＣｓ ｉｍｐｌｎｔａ ｇｒｏｕｐ（ＮＳＣｓ ｇｒｏｕｐ），ｔｈｅ Ｇｏｒｅｍｏｒ ｖｅｓｓｅｌ ｅｌｅｃ－ ｔｒｏａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ（ＥＣ ｇｒｏｕｐ）ａｎｄ ｔｈｅ Ｇｏｒｅｍｏｒ ｖｅｓｓｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｐｌｕｓ ＮＳＣｓ ｇｒａｆｔｅｄ ｇｒｏｕｐ（ＥＣ＋ＮＳＣｓ ｇｒｏｕｐ）．ＮＳＣｓ ｗｅｒｅ ｓｉｍｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｉｍｐｌａｎｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｅｃｔｅｄ ｓｉｔｅ ｏｆ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎ ＮＳＣｓ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＥＣ＋ＮＳＣｓ ｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ａｎｉｇｍａｌｓ ｏｆ ＥＣ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＥＣ＋ＮＳＣｓ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ Ｇｏｒｅｍｏｒ ｖｅｓｓｅｌ ｅｌｅｃｔｍａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ａｆｔｅｒ ｏＤ． ｅｒａｔｉｏｎ．Ａｌｌ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｆｅｄ ｆｏｒ ６５ ｄａｙｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：１．ｈｅ ｓＴｕｒｖｉｖａｌ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｉｎｊｕｒｅｄ ｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎ ａｔ ｔｈｅ ｌｕｍｂａｒ ｓｅｇｍｅｎｔ ｉｎ ＥＣ＋ＮＳＣｓ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｒａｔ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌ ｃｏｎｔｒｏｌａ ｇｒｏｕｐｓ．２．Ｔｈｅ ｍｙ． ａｔｒｏｐｈｙ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ Ｂｉｃｅｐｓ ｆｅｍｏｒｉｓ ｍｕｓｃｌｅ ａｔ ｔｈｅ ｈｉｎｄ ｌｉｍｂｓ ｉｎ ＥＣ＋ＮＳＣｓ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｒａｔ ｗｅｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌ ｃｏｎｔａｒｏｌ ｇｒｏｕｐｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ｈｅ ｃｏｍｂｉＴｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｏｒｅｍｏｒ ｖｅｓｓｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｌｎｔａａｔｉｏｎ ｎｅｕｒｌａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｍａｙ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｉｎｊｕｒｅｄ ｍｏｔｏｎｅｕｒｅｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｈｏｒｎ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｍｙａｔｅｐｈｙ ｄｅｇｒｒｅｅ ｏｆ Ｂｉｃｅｐｓ ｆｅｍｏｒｉｓ ｍｕｓｃｌｅ ａｔ ｔｈｅ ｈｉｎｄ ｌｉｍｂｓ ｓｕｆｆｅｒｉｎｇ ｆｒｏｍ ｐａｒａｌｙｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｒａｔ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｔｒａｎ． ｓｅｃｔｅｄ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ． Ａｕｔｈｏｒ Ｓ ａｄｄｒｅｓｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ ＣｏｌｌｅｇｅＳｕｎ Ｙａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，５ １００８０ ， Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｇｏｒｅｍｏｒ ｖｅｓｓｅｌ；ｅｌｅｃｔｒｏａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ；ｎｅｕｒｌａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ；ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎｊｕｒｙ；ｍｏｔｏｎｅｕｒｅｎ ｓｕｒｖｉｖａｌ；ｍｙ． ａｔｒｏｐｈｙ；ｒａｔ 在进行脊髓损伤修复研究时，更多的关注点是 损伤区的神经纤维再生以及受损伤神经元功能性网 络的重建ｆ１１。近些年来，本研究组也围绕上述关注点 展开过一些研究［２－－６］。在前期研究中，我们注意到如果 在离脊髓损伤区上下端两个椎体棘突间隙阿是穴进 行督脉电针的同时，在脊髓损伤区远端的腰俞穴和 长强穴进行督脉电针刺激，则可以明显加快全横断 的机制还不清楚，可能与支配后肢肌肉的脊髓受损 ￥基金项目：国家自然科学基金（３０４７２１３２）；广东省中医药管理局科 研基金（１０１１３９和３０３０１３） ‘１ 中山大学中山医学院组织胚胎学教研室神经科学研究室，广州市 中山二路７４号．５１００８０ ２通讯作者：曾园山（中山大学中山医学院组织胚胎学教研室神经 科学研究室，广州市中山二路７４号，５１００８０） ３广州医学院组织胚胎学教研室 ４中山大学附属一院针灸科 作者简介：李晓滨，男，博士，副教授 收稿日期：２００５－０８－２１ 脊髓损伤的大鼠后肢部分运动功能恢复Ｉ４１。但是其中 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国康复医学杂志，２００６年，第２ｌ卷，第２期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＲｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｅ，Ｆｅｂ．２００６，Ｖｏ１ｎ．２１，Ｎｏ．２ １０５ 伤运动神经元的存活状况有关。因此，本研究试图观 察脊髓损伤后支配后肢肌肉的运动神经元存活状 况．以及后肢股二头肌的形态变化，探讨督脉电针结 弓，仔细剪开Ｔ８一 和 一Ｔ１０椎弓间韧带，有齿 镊轻提 棘突，沿 一Ｔ１０椎弓间隙，自两侧剪断 椎弓根部，移出 椎弓，既暴露Ｔ１０段脊髓，用 尖刃手术刀快速完成脊髓全横断。止血后，在脊髓切 断处填入约２ｍｍｘ２ｍｍｘ２ｍｍ无菌明胶海绵，先用 合神经干细胞移植对大鼠脊髓全横断损伤的前角运 动神经元存活，以及减轻后肢肌萎缩有无促进作 用，为脊髓损伤患者的早期康复治疗提供实验依据。 棉球吸去填充海绵内的液体，再用微量移液器抽取 １材料与方法 １．１神经干细胞的获取、培养及纯化 出生１—２ｄ的ＳＤ大鼠，在无菌条件下开颅，切 取海马和侧脑室下区的脑片（约２ｍｍ厚），放入新鲜 Ｄ—Ｈａｎｋ液中，用吸管轻柔吹打数十次（以肉眼观察 明显组织块消失为度）。吹打后的组织悬液移入离心 管离 Ｌ，（１５ＯＯｄｍｉｎ，５ｍｉｎ，后续的离心过程相同），去上 清液。加入０．２５％胰蛋白酶 肖化液，并用吸管轻吹打 至沉淀细胞散开，置于３７ｃｃ温箱消化１０ｍｉｎ。加含有 胎牛血清的培养液以终止消化，离心后弃上清液，加 新鲜Ｄ—Ｈａｎｋ液清洗。离心弃上清液后，加入 ＤＭＥＭ／Ｆｌ２（含２０ｎｇ／ｍｌ ｂＦＧＦ和２０１ｘｌ／ｍｌ Ｂ２７）无血清 培养液，用吸管吹散沉淀为细胞悬液。用２００目细胞 过滤器过滤细胞液，移入培养瓶，先加入约５ｍｌ ＤＭＥＭ／Ｆ。 培养液混匀，取样进行细胞密度计数，根 据细胞计数情况逐渐加入ＤＭＥＭ／Ｆ。 培养液，调整 为ｌｘｌ０４个／ｍｌ的细胞浓度后放人３７ｃｃ、５％Ｃ０２培养 箱进行培养。每５—７ｄ半量更换培养液１次，待大量 神经球形成后，更换新培养瓶，收集悬浮的神经球， 弃去贴壁的分化细胞，将收集的细胞悬液离心去上 清液，加入新鲜ＤＭＥＭ／Ｆ。 培养液，并用吸管轻吹打 至神经球分散开后，再放入培养箱培养。经５—６ｄ 后，新一代的神经球形成。收集第二代培养７—８ｄ的 神经干细胞（ＮＳＣｓ）悬液，用吸管轻吹打神经球至散 开，并经细胞计数调制成移植所需细胞浓度后用于 移植。 １．２实验动物分组 将２５只ＳＤ成年雌性大鼠（体重约２２０— ２５０ｇ），分为正常组、对照组、督脉电针组（电针组）、神 经干细胞移植组（ＮＳＣｓ组）和督脉电针＋神经干细胞 移植组（电针ＮＳＣｓ组），每组５只。本实验所用的新 生和成年大鼠均由中山大学北校区实验动物中心提 供。 １．３制备脊髓全横断损伤模型和神经干细胞移植 除正常组外，其余４组大鼠腹腔内注射戊巴比 妥钠（２５－－３０ｍｇ／ｋｇ）进行麻醉。经无菌消毒后，切开 背部正中皮肤，用器械沿两侧棘突顺腰棘肌群走向 钝性分离肌肉和韧带，暴露Ｔ８、 和Ｔ１０棘突和椎 ｌＯｐＪ已制备好的神经干细胞悬液（浓度为８ｘｌ ０６个 细胞／Ｉｘ１），快速注入明胶海绵内。清理创１３后，依肌 肉层、皮下组织和皮肤顺序逐层缝合。术后连续３ｄ， 每只动物肌肉注射青霉素５万单位０．５ｍｌ／ｄ，皮下注 射生理盐水５ｍｌ／ｄ。人工排尿，２—３次／天。术后４组 动物均饲养９周。 １．４督脉电针治疗 电针组和电针ＮＳＣｓ组的大鼠自术后第５ｄ开 始接受隔日１次的督脉电针治疗。选取两组督脉穴 位，同时进行。第１组为两个督脉阿是穴，位于脊髓 横断处上、下约两个脊髓段（１＿７一Ｔ８和Ｔｌｌ—Ｔ１２） 的棘突之间。第二组为腰俞和长强穴。４个穴位的进 针深度均为穿透皮后，再进针约２ｍｍ，刺激强度为 １２ｍＶ，频率为疏密波，留针时间为１５ｍｉｎ。此外，两 组大鼠均在每天排尿后进行适量的运动恢复训练， 如爬网格等。 １．５实验动物的组织标本制备 ５组动物深麻醉后开胸，经左心室至主动脉，固 定插管。先快速灌注预冷生理盐水约１８０ｍｌ（每 １００ｍｌ含１％亚硝酸钠０．２ｍｌ和肝素２００ＩＵ），冲洗血 管，随后限速（１Ｏ－－１２ｍｌ／ｍｉｎ）滴注预冷固定液（含 ４％多聚甲醛的０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸钠缓冲液，ｐＨ７．４） ３００ｍｌ。灌注固定后，从动物背部剥离肌肉，并仔细剪 开颅骨和各段椎弓，剪断脑神经和脊神经后，游离并 提取出全脑和脊髓，切取Ｌｌ—Ｌ５脊髓段，置入上述 新鲜固定液中做后固定。固定后的脊髓组织放入 ３０％蔗糖溶液中（０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸钠缓冲液为溶液，ｐＨ ７．４），浸泡时间以脊髓组织沉底为度（４ｃｃ）。用冷冻 包埋剂ＯＣＴ将脊髓组织分节段包埋后，做连续冰冻 横切片，片厚为２０１ｘｍ。组织切片用中性红染色。此 外在完成灌注固定后，分离后肢主要大腿伸肌群股 二头肌（ｂｉｃｅｐｓ ｆｅｍｏｒｉｓ ｍｕｓｃｌｅ），并放入Ｂｏｕｉｎ固定液 中二次固定，石蜡包埋，组织切片用ＨＥ染色。 １．６脊髓腰段前角运动神经元的计数 ５组大鼠腰段脊髓组织切片为横断面，被中性 红染色。观察并计数５组Ｌ１、Ｌ３和Ｌ５节段的脊髓 前角（双侧）运动神经元数量。每只动物腰段的３个 节段均分别计数４张切片（间隔３张取１张），每组 动物（５只）每个节段（如Ｌ１）共计数２０张切片，计数 维普资讯 http://www.cqvip.com
ｌ』 ：ｃ ¨１¨＿ １２ ＆ｈｉ ｒ ｆ』 丌 ・ｊ ｔ・＾， ＪⅢ ⅢＪ胁ｄｈ：ｉｔｉ ｈＩ－２Ｏｔｌ６ ～¨１ ２１ ！ 后阵计５ 数据逊 巾【 索片莘分析和 若性检 验 经元数 也较埘ｊ＿ｆ｛绀和 ＳＣｓ组儿勺多ＩＰ＜Ｏ ０Ｉ），接 近止常组的水平督腮电 刊冲经十细胞移植联弁 的脊髓 Ｊ，ＦＨ能够 进凡鼠秆髓争蒲断损伤后受 前角运动神经元 活 ２ ２儿鼠后肚口２一 肌的形态定量分析 正 组的后脞０２一 肌Ｊ］￣ＬｔＴ维横断而大而闭． ｌ＿７后性脞一 肌帅肜志定艟舒析 ，上） 镜下ｉ虹察５绀赶鼠ＪＪ 、川【ｌ＇ｉｊ￣组蹦切片． 取每纠 物脸一头 Ｉ组织【刀¨Ｉ【ｌ张进＂形怂定量 讣忻列苴中的肌纤维单位数ＩＬ｝南旺和肌纤维樾盐 面直静ｆ 浆特 静）进ｉ彳ＩＩ数 １．８统汁 舒析 簌 的备细敬 进｛ｒ－ 舱验 ｆ 【ＩＩ叭Ｊ羁纤维组成的孔海埘 ｛ ６１时照鲥的再 临帷头叭肌纤维槛断】 ＩＩＵＪ＿！］＿ｉ缩小．簿录叭纤维界 求，』 分析千¨显著性 小清世小能见刮由叭唔纤维生【眦的扎海姆 ｛ ７１电针ＮＳＩ 盟ｌ的聍肢股二，、肌肌纤维横断面啵缩 ：叫 ．＿【＝ｌ主 到每兼肌纤维的 限．柯 州 Ｉｌ｛肌 ２结果 纤维纽啦的扎济坶 ｛ ８／ 前瑚运 神经ＪＬ憎志御ｌ拽肇的 表２ ３丝示 由ｒ凡鼠脊髓全横卅ｆ姐伤．可造 成 后肢 填． 敏股一 肌萎缩后＆舰为叭纤维 ２．１士鼠脊髓 比较 ｌＪ＝带组１ 脊髓前珀运动 经儿二胞体较凡．Ｉ－ｊ见 胞突恤帖ｋ｜ｌＩ圆． 包较ｆ 腿幔Ｊ～尼Ｉ乇伴清晰口 ｆ 见胞砖ｆＩｌ胞 １１ｉ ｛ ．胆髓 也较深 世 、横断 径减小罔此 单位 ｌ内 蕞端的 常组比 股一 、叭肌纤维的数用密鹰叫 ¨ｌ增凡 较． 见旧Ｉ１州｝吼组啪俐蛆前角Ｊ 神经元胞体叫 艟 缩ｆ图２ｌ ４纽赶鼠的厢肚脞一 叭肌纤维数Ｉ］密度 ｊ勺州 憎九以＾乏肌纤堆的横断而直径州 减小 刈照组股一 肌叭纤维数 密度增Ⅲ龋 并叭 尼氏件｛、 Ｊ＿¨｝ 电计ＮＳＣｓ 的仟髓前角运动神蜂 元魄ｆ水艟辅较轻《 ３ｌ能 砖起．仃些胞核较１０ｊ｜ 可见咆臆内ｆ】尼氏 ＮＳＣｓ 】Ｉ 组的秆髓前ｆ『］ 运动卅 元 志譬化ｆ【划４ ５）介］埘 吼 和电针 Ｎｓｔ 小之 与ＩＩ常鲥比较．各 艟 ｌ行髓ＩＩ卡兀Ｌ３段『衍角 纤维的横断 直径坚得垃小 ｎ』电引ＮＳＣｓ组的眦 肌叭 ｆ维数日密度明！ｌ＾ 少．肌纤维酌横断【自Ｊ 陉愀 忙增人造些敬据＆叫忤脉电｝ 神经ｒ …胞牡情联ｆ 应用能够减轻几鼠脊髓全搬断 亿 犍瘘的后肢股一 肌的蕞缩状况 运动神经ｆＬ数馈均叭 碱 显的肚ＮＳＣｎ蝌川刊 少辐 较小近止 ： 引 ｝缔元数量减少 明 ３讨论 Ｈ，而Ｉ 什精盯的而 纠减 ｔ 蹦Ｉｊ段苘角运动神磐元接 临床Ｊ一直仃用督瞬电针冶疔脊髓栅伤患者的 ｈ策．计取得定的疗效Ｉ住国外、也有凡罘州电刺 激结台辅助器械 练秆髓蜘伤患暂Ｉ ＴＩⅢ 钊，盎理沧 ＇＾却．督脉循Ｉｊ｝‘忤杜 巾．ｆ足二 经均与杆脒 建汇．具仃总督一身之阳拌、稠节 经经气的作Ｊ刊 引蚶的冲雏儿数量山较ＮＳｉ： ｌ ｌ剧 照组多丧１结果 叫运动冲经ｒＬ数量ｙ碡动蛀大的 段 行 验组ｌｌｌ，垃 Ｊ能 肯崎拗伤 较近肯 足 ＾：Ｌ５节段，电引组稍Ｉ电 ＮＳＣｓ蛆的前角运动 圈ｌ 常组太鼠脊∞Ｉ ３段 目２对 组大 脊髓【．３段 目３电针 ｓＣｓ组脊髓Ｌ３ 段前角 Ｈ Ｉ 邑ｃ ｘ４０｝ 囤４ ＮＳＣｓ组大鼠脊髓Ｌ３ 段前角中性红染色Ｉ ｘ４‘｝ ）前角ｉ｝ 也｛ｘ４０１ 前有ｔ＿ｌ十红染包Ｉｘ４１）１ 目５电针组★鼠脊髓１，３段 前角 目６正常组大鼠股二头肌 肌纤维横断面 目７对照组太鼠殷二头肌 目８电针ＮＳＣｓ组太鼠股二 肌纤维横蜥面 头肌肌纤维横断面 ４ 邑Ｉｘ４１１１ ＨＥ枭幽ｘ“）（１Ｉ ｌＩＥ 包 ＩＯ（１ｌ Ｈｒ 色 …ｕ） 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国康复医学杂志，２００６年，第２ｌ卷，第２期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＲｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎＭｅｄ￣ｉｅ，Ｆｅｂ．２００６，Ｖｏ１．２１，Ｎｏ．ｎ２ １０７ 表ｌ ５组大鼠脊髓腰段前角运动神经元 数量的比较 （个数，ｘ＿－￣ｒ．Ｓ） 组别 切片数 ＩＪ１ Ｌ３ Ｌ５ 可能与督脉电针和ＮＳＣｓ移植联合应用促进宿主脊 髓组织生成神经营养素一３（ＮＴ一３）等内源性神经生长 活性物质有关Ｉｎ一－２Ｊ，这些活性物质可使受损伤运动神 经元存活增多Ｉ ｏｌ。另外，受损伤运动神经元的存活 数量多少还与其离脊髓损伤区的距离远近有关，如 本研究观察到Ｌ５脊髓段距损伤区 １０脊髓段）较 相同脊髓腰段内，①与正常组比较Ｐ＜０．Ｏｌ；②与对照组出较Ｐ＜０．Ｏｌ； ③与ＮＳＣｓ组比较Ｐ＜０．０１；④与ＮＳＣｓ组比较Ｐ＜０．０５；⑤与电针组比 较Ｐ＜０．Ｏｌ：⑥与正常组比较Ｐ＜０．０５；ｃｚ）与电针组比较Ｐ＜０．０５ 表２ ５组大鼠后肢股二头肌肌纤维 数目的比较 （个数 ，０．２５ｍｍ ） 远。其受损伤运动神经元的存活数量最多。 由于脊髓损伤导致受损伤运动神经元发生死 亡。因而肌组织失去神经支配，肌组织的收缩功能则 （Ｄ与正常组比较Ｐ＜０．Ｏｌ；②与对照组比较Ｐ＜０．０１；（ 与电针ＮＳＣｓ 组比较Ｐ＜０．Ｏｌ；④与电针组比较Ｐ＜０．０５ 表３ ５组大鼠后肢股二头肌肌纤维 横断面直径的比较 ６拯， ｍ） ①与正常盟比较Ｐ＜０．Ｏｌ；②与对照组比较Ｐ＜０．Ｏｌ；③与ＮＳＣｓ组比较 Ｐ＜Ｏ．０ｌ：④与电针组比较Ｐ＜Ｏ．０５ 所以，督脉是针灸治疗脊髓损伤时的首选经脉。本研 究选择一组督脉阿是穴是位于脊髓全横断处上、下 各两个脊椎的棘突间；另一组为督脉的腰俞穴和长 强穴。腰俞穴正对应于脊髓马尾的根部，在此穴给予 电针刺激可能会影响到分布在腰、骶部的诸多脊神 经的分支。而长强穴是阴部和尾部神经汇聚之处。也 是督脉经络尾端的止点。从解剖学构造看。这４个穴 位的电针刺激可以直接作用于脊髓损伤处邻近脊髓 节段和腰、骶段脊髓所发出的脊神经分支，从而促使 受损伤的脊髓组织发生结构和功能的变化。 脊髓前角运动神经元是锥体束传导通路的下运 动神经元，它们间接或直接与部分下行传导束神经 纤维和后根部分传人神经纤维发生突触联系 一旦 这些神经元受到损伤甚至死亡，就会导致其所支配 的骨骼肌瘫痪（肌张力下降、腱反射消失和肌纤维萎 缩）。脊髓腰段的前角运动神经元主要支配后肢肌群 和会阴肌群。本研究观察到，当腰段脊髓前角受损伤 运动神经的存活增多，该动物的后肢运动功能恢复 就较好１４１。各组大鼠受损伤的运动神经元存活数量比 较显示，采用电针结合ＮＳＣｓ移植方法能有效地减 少受损伤的运动神经元死亡，进而促进了后肢运动 功能的恢复 。这组大鼠的神经电生理检测结果也明 显好于其他组大鼠１４１。受损伤运动神经元存活的机制 丧失。本研究发现，脊髓损伤早期实施督脉电针和神 经干细胞移植联合治疗，使后肢伸肌群（股二头肌） 的肌纤维萎缩程度明显减轻。这表明当后肢肌组织 失去神经支配后，如果能继续给予适当的电针刺激， 使脊髓损伤区远端的固有神经通路发挥一定的神 经一肌运动单位的调控，并使肌组织仍能得到某些神 经递质的营养作用；同时，适度的肌肉运动，也可以 促进后肢的血液循环，则不论对受损伤运动神经元 或失去神经支配的肌组织同样都有较明显的促进恢 复作用。肌纤维的经常收缩对肌组织的血供也有益 处，对防止肌纤维功能退行性萎缩有明显的作用。由 于神经肌肉接头（突触）的恢复性建立，后肢运动肌群 的功能重现，使后肢肌肉及其关节均没有发生较明 显的退化。 参考文献 【１］ Ｍａｒｔｉｎ ＥＳ．Ｒｅｐａｉｒｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｊｕｒｅｄ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ『ＪＪ． Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２００２，２９５（５５５７）：１０２９． 【２］郭家松，曾园山，李海标，等．移植神经干细胞促进脊髓全横断大鼠 结构与功能恢复的研究『ＪＪ．解剖学报，２００３，３４（２）：ｌ１３． 【３］郭家松，曾园山，陈玉玲，等．督脉电针治疗大鼠全横断性脊髓 损伤的实验研究【Ｊ１．中国针灸，２００３，２３（６）：３５１． 『４Ｊ李晓滨，曾园山，陈玉玲，等．督脉电针与神经干细胞移植联合 应用促进脊髓全横断大鼠后肢运动功能的恢复『ＪＪ．解剖学报， ２００４，３５（￣：５８２． 【５】郭家松，曾园山，李海标，等．神经干细胞与ＮＴ一３基因修饰雪旺 细胞联合移植促进全横断脊髓损伤大鼠的功能修复『Ｊ１．中国康 复医学杂志。２００５。２０（５）：３２３． 『６ ６Ｊ曾园山，李晓滨，郭家松，等．督脉电针与神经干细胞移植在脊髓 损伤修复中的作用『ＪＪ．中国康复医学杂志，２００５，２Ｏ（６１：４６８． 【７］徐斌．脊髓针为主综合方法治疗外伤性截瘫２８６例疗效观察ｍ． 中国针灸。１９９０，２（１）：７． 『８ ８ＪＫａｌｂ ＲＧ．Ｇｅｔｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｔｏ ｔｈｉｎｋ ｆｏｒ ｉｔｓｅｌｆ『ＪＪ．Ａｒｃｈ Ｎｅｕｒａｌ，２００３，６０（６）：８０５． 【９］Ｖｒｏｅｍｅｎ Ｍ，Ａｉｇｎｅｒ ＩＪ，Ｗｉｎｋｌｅｒ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ａｄｕｌｔ ｎｅｕｒａｌ ｐｍｇｅｎｉ— ｔｏｒ ｃｅｌｌ ｇｒａｆｔｓ ｓｕｒｖｉｖｅ ａｆｔｅｒ ａｃｕｔｅ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｉｎｊｕｒｙ ａｎｄ ｉｎｔｅ－ ｒｇａｔｅ ａｌｏｎｇ ａｘｏｎａｌ ｐａｔｈｗａｙｓ［Ｊ１．Ｅｕｒ Ｊ Ｎｅｕｍｓｃｉ，２００３，１８（４）： ７４３． 【１０］Ｃｏｕｍａｎｓ ｊｖ，Ｌｉｎ １Ｔｒ，Ｄａｉ ＨＮ，ｅｔ ａ１．Ａｘｏｎａｌ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｆｔｅｒ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｔｒａｎｓｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔｓ ｂｙ ｄｅｌａｙｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｒａｎｓｐｌｎａｔｓ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎｓ 『Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｍｓｃｉ，２００１，２１（２３）：９３３４． 【ｌ１］Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ ＲＷ，Ｈａｖｅｒｋａｍｐ ＬＪ，Ｐｒｅｖｅｔｔｅ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｉｒｎｇ ｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎ ｄｅａｔｈ ｉｎ ｖｉｖｏ ｂｙ ａ ｔａｒｇｅｔ－ ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ［Ｊ】．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８８，２４０￣８５４１：９１９． 【ｌ２］李晓滨，曾园山，陈玉玲，等．督脉电针与神经干细胞移植联合 应用促进全横断脊髓损伤组织产生内源性神经生长活性物质 的研究『Ｊ１．解剖学报，２００５，３６（１）：５６．