维普资讯 http://www.cqvip.com ・７０２・ 中国免疫学杂志２００７年第２３卷 ・中医中药与免疫・ 中药复方对类风湿关节炎抗炎作用的实验研究① 李宝丽唐方 （天津医科大学总医院中医科，天津３０００５２） Ｒ３９２ 文献标识码Ａ 文章编号１０００－４８４Ｘ（２００７）ｏ８－０７０２－０５ 中国图书分类号【摘要］ 目的：观察甘草附子汤和痛痹方对ＩＩ型胶原诱导的关节炎（ＣＩＡ）大鼠滑膜组织病理学及相关细胞因子表达 水平的动态变化，从多靶点探讨中药复方治疗类风湿关节炎（ＲＡ）的可能机制。方法：以Ⅱ胶原诱导的Ｗｉｓｔａｒ大鼠关节炎为 动物模型，设正常对照组（Ｎ）、甘草附子汤组（ＧＦ）、痛痹方组（ＴＢ）、普威组（ＰＷ）和模型对照组（Ｃ），给予灌胃给药１．５ ｍｌ／只， １次／日，给药６周处死；隔日测量大鼠足肿胀度，计算肿胀率；治疗３周时内眦取血，检测３周、６周血清ｓＡ，用ＥＬＩＳＡ法检测 血清ＩＬ－２和ＴＮＦ．ｏｔ水平；光镜观察实验大鼠滑膜组织病理学变化。结果：甘草附子汤和痛痹方可明显抑制ＣＩＡ大鼠关节肿胀 率，光镜观察滑膜组织病理学形态有显著改善；治疗３周时，血清ＳＡ、ＩＬ－２和ＴＮＦ－ｏｔ的水平较模型组显著性降低（Ｐ＜０．０１）， 用药６周后，各组均接近正常水平。结论：中药复方通过抑制某些炎症介质的活性、调控相关细胞因子的表达进而起到抗炎和 消除关节肿胀的作用，改善滑膜组织的病理学变化，具有类似非甾体抗炎药的治疗效应。 【关键词］ 实验性类风湿关节炎；血清唾液酸；细胞因子；滑膜组织病理学；中药复方 Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ ｔｏ ｔｒｅａｔ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒ－ ｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｎｔｉ．ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ． Ｌ／Ｂａｏ－Ｌｉ，ＴＡＮＧ ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｅ，Ｇｅｎｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｔｉａｎｊｉｎ ３０００５２，Ｃｈｉａ ｎ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ Ｇａｎｃａｏｆｕｚｉ—ｔａｎｇ ａｎｄ Ｔｏｎｇｂｉ—ｆａｎｇ ｏｎ ａｄｊｕｓ－ ｔｉｎｇ ｔｈｅ ｄｙｎａｍｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｌａｔｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｆｕｒｔｈｅｒ ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｙｎｏｖｉｔｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｌＩ ｃｏＨａｇｅｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ（ＣＩＡ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｗｉｓｔａｒ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ＣＩＡ ｗａｓ ｓｅｔ ｕｐ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．Ｔｈｅ ｒａｔｓ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｉｆｖｅ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｒａｎ— ｄｏｍ：ｎｏｒｍａｌ（Ｎ），Ｇａｎｃａｏｆｕｚｉ—ｔｎｇ ａｔｒｅａｔｍｅｎｔ（ＧＦ），Ｔｏｎｇｂｉ－ｆａｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（ＴＢ），Ｐｕｗｅｉ ｗｅｓｔｅｒｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（ＰＷ）ａｎｄ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｃ）．Ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｗａｓ ａｆｆｕｓｅｄ ｉｎｔｏ ｓｔｏｍａｃｈ １．５ ｍｌ／ｒａｔ，ｏｎｃｅ ｄａｉｌｙ．Ｔｈｅ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｉｆｃｅｄ ａｆｔｅｒ ６ ｗｅｅｋｓ ｏｆ ｍｅｄｉ— ｃｉｎｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ｆｏｏｔ ｓｗｅｌｌｉｎｇ ｄｅｇｒｅｅｓ ｏｆ ｈｅ ｒａｔｓ ｗｅｒｔｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｅｖｅｒｙ ｏｔｈｅｒ ｄａｙ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｃａｌｃｕｌａｔｅ ｓｗｅｌｌｉｎｇ ａｔｅｓ．Ｇｅｔｒｔｉｎｇ ｂｌｏｏｄ ａｆ－ ｔｅｒ ３ ｗｅｅｋｓ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｒｏｍ ａｔ’ｓｒ ｉｎｎｅｒｃａｎｔｈｕｓ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｈｅ ｔｌｅｖｅｌ ｏｆ ｓｅｒｕｍ Ｓｉｌａｉｃ Ａｃｉｄ（ＳＡ）ａｎｄ ｈｅ ｔｌｅｖｅｌ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ＩＬ－２ ａｎｄ ＴＮＦ—ｏｔ ｂｙ ＥＬＩＳＡ．Ｔｈｅ ｓｙｎｏｖｉｌ ｈｉａｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｗｉｔｈ ＨＥ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｕｎｄｅｒ ｏｐｔｉｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｇａｎｃａｏｆｕｚｉ—ｔａｎｇ ａｎｄ Ｔｏｎｇｂｉ— ｆａｎｇ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｗｅｌｌｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｊｏｉｎｔｓ ｉｎ ＣＩＡ ｒａｔｓ．Ｔｈｅ ｐａｈｏｌｔｏｇｙ ｏｆ ｓｙｎｏｖｉｓｌ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗａｓ ｍａｒｋｅｄｌｙ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｄ．Ａｆｔｅｒ ａｄ－ ｉｎｍｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｆｏｒ ３ ｗｅｅｋｓ，ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ＳＡ，ＩＬ－２ ａｎｄ ＴＮＦ—ｏｔ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔｓ ｉｎ ＧＦ ａｎｄ ＴＢ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｍ— ｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏ１．Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ａｄｍｉｉｓｔｎｒａｔｉｏｎ ｆｏｒ ６ ｗｅｅｋｓ，ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ ＧＦ ａｎｄ ＴＢ ｒａｔｓ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｏ ｎｅａｒ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｌｅｖｅ１．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｌｌ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ ｔｈａｔ Ｇａｎｃａｏｆｕｚｉ－ｔａｎｇ ａｎｄ Ｔｏｎｇｂｉ—ｆａｎｇ ｐｌａｙ ａｎｔｉ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ＣＩＡ ｒａｔｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｍｅ ｉｌａｆｎｍｍａｔｏｒｙ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ，ａｄｊｕｓｔｉｎｇ ｒｅｌａｔｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｔｈｅｎ ｅｌｉｉｎａｔｍｉｎｇ ｈｅｔ ｊｏｉｎｔ ｓｗｅｌｌｉｎｇ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｓｎｏｖｙｉｔｉｓ ｐａｈｏｌｔｏｇｙ，ｗｈｉｃｈ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ｌｏｋｅｄ ｓ ａｉｍｍｕｎｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｓｉｍｉｌｒ ａｔｏ ＮＳＡＩＤ ｍｅｄｉｃｉｎｅ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌａ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ；Ｓｅｒｕｍ ＳＡ；Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ；Ｓｙｎｏｖｉｌａ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ；Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｐｒｅｓｃｉｒｐｔｉｏｎｓ 类风湿关节炎（Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）是以 限于镇痛消炎的治疗，到后来使用改变病情作用的 药物，现在已发展到应用针对与类风湿发病相关的 免疫环节的药物。中医辩证论治，许多中药方剂具 关节滑膜为靶器官的自身免疫疾病，以免疫调节失 常，关节组织慢性炎症性病变为其主要表现，病因及 发病机制尚未完全阐明。属中医“痹证”范畴，风寒 湿邪侵袭，痰湿瘀血阻滞经络而致关节肿胀畸形是 其主要病机。随着对其病理机制认识的不断深入， 治疗的药物和方法也在不断改进，从一开始单纯 ①本文为天津市卫生局资助项目（项目号２０００３２） 作者简介：李宝丽（１９６７年一），女，副主任医师，硕士生导师，主要从 事免疫类疾病的中医治疗及实验研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉ３１０６＠ｓｉ— ｎａ・ｃｏｉｎ。 有控制炎症和免疫调节等多方面的综合作用，且可 以长期服药，在ＲＡ的治疗中占有一席之地 ， 。 １材料与方法 １．１实验动物实验用雄性Ｗｉｓｔｅｒ大鼠５Ｏ只，体 重（１３０．４－２０）ｇ，购自军事医学科学院四所，适应性 饲养１周后用于实验。 １．２实验试剂牛Ⅱ型胶原购自Ｓｉｇｍａ公司；冻干 维普资讯 http://www.cqvip.com 灭活结核菌素购自天津结核病防治检疫所；唾液酸 （ＳＡ）检测试剂盒，南京建成生物工程研究所产品； 自细胞介素（ＩＬ）．２、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）．仪检测试 剂盒，深圳晶美生物工程公司，检测二者血清中Ａ 镜下观察滑膜组织的病理变化。 １．７统计学方法采用Ｓｔａｔｖｉｅｗ统计软件，实验结 果以 ４－ｓ表示，两样本均数比较采用 检验；多样本 均数的比较采用方差分析；两变量相关关系用直线 回归和相关分析。 值水平。 １．３实验用药甘草附子汤：甘草、附子、桂枝、自 术组成；痛痹方：附子、桂枝、自术、甘草、羌活、当归、 ２ 结果 ２．１一般性描述初次免疫ｌ２一ｌ４天后模型组大 牛膝、海风藤等组成，均由天津医科大学总医院中药 制剂室煎制，浓缩含生药３ ｇ／ｍｌ，其中羌活由天津中 医药研究院以超临界流体萃取法（ＳＵＦ）提取羌活挥 发油，按比例加入煎剂中；普威药物原粉，天津药物 研究院药业公司生产，批号：国药准字（１９９８）Ｘ．３９５．２。 １．４实验仪器 ｕＶ．Ｖｉｓ８５００紫外分光光度计，上 海；Ｓｔｅｃｐｒａ １１１型酶标仪，奥地利；Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ５８１０Ｒ 型Ｅｐｐｅｎｄｏｆｆ低温高速离心机，德国。 １．５造模方法与动物分组随机从５０只大鼠中选 ｌ０只作为正常对照组（Ｎ），其余用于造模。参见文 献［３］将牛Ⅱ胶原２０ ｍｇ／ｍｌ和５ ｍｇ／ｎ￣灭活结核菌 素石蜡溶液于造模前等体积混合、乳化。将混悬乳 剂于大鼠右后足跖肉垫皮内注射０．１ ｍｌ致敏，７天 后，于鼠尾根部以相同乳剂加强注射１次。正常对 照组以生理盐水同法注射。造模后将大鼠按体重随 即分为４组，分别为甘草附子汤组（ＧＦ）、痛痹方组 （ＴＢ）、普威组（ＰＷ）和模型对照组（Ｃ）。造模后连 续灌胃给药，每日１次，１．５ ｍｌ／只，药量相当于人体 用量的ｌ０倍；正常对照组和模型组用同等剂量蒸馏 水灌胃，每日１次，连续灌胃给药６周。 １．６检测指标灌胃给药满３周时，采用内眦眶后 取血约２ ｍｌ；给药满６周，各组大鼠实验终止前２４ 小时禁食，称重，用乙醚麻醉，打开胸腔，心内穿刺 取血，分离血清，冻存于一２０℃冰箱中待测。 １．６．１检测ＣＩＡ大鼠关节肿胀率用水容积法，于 首次免疫当天即检测非注射左足关节肿胀度，隔日 测１次，直至处死。以第１天测得的关节置换水容 积为基值，以后每测得的值与之相比值而得关节肿 胀率。 １．６．２测定血清ｓＡ浓度取待测血清１００ ，按试 剂盒说明书步骤加样，水浴，离心后取上清，在分光光 度计上读取吸光度，计算血清ＳＡ浓度（ｍｍｏｌ／Ｌ）。 １．６．３测定ＩＬ一２、ＴＮＦ一仪水平采用ＥＬＩＳＡ法检测 ３、６周大鼠血清ＩＬ．２、ＴＮＦ．仪水平，方法按试剂盒说 明程序进行，最后在酶标仪４５０ ｎｍ处读取Ａ值。 １．６．４滑膜组织形态学观察剥离切取各组非注 射侧左足踝关节滑膜组织，立即放入１０％甲醛溶液 中，常规脱水，石蜡包埋，切片，ＨＥ染色，光学显微 鼠表现关节炎体征，非注射侧后肢踝关节出现红肿 现象，ｌ８—３０天左右病变最为严重，且多累及前爪、 耳廓、鼻软骨，肿胀持续存在，关节和尾部僵硬变形， 行走困难，体重下降，毛色晦暗；甘草附子汤组和痛 痹方组后肢关节轻度肿胀，一般状况较好；普威组关 节肿胀不明显，一般状况好，但其中有５只治疗中出 现间断血尿。 ２．２ ＣＩＡ大鼠关节肿胀率各组变化趋势见图１， 模型组关节肿胀度较给药各组及正常组明显加重， 甘草附子汤、痛痹方、普威组非注射侧左足关节肿胀 率较模型组降低。 ２．３血清ＳＡ浓度的变化ＣＩＡ大鼠血清ＳＡ浓度 明显高于正常组（Ｐ＜０．０１），甘草附子汤和痛痹方 及普威治疗３周时，血清ｓＡ浓度较模型组明显降 低（Ｐ＜０．０１）；治疗６周后，三组血清ＳＡ均低于模 型组（Ｐ＜０．０１），恢复到正常水平，见表１。 ２．４血清ＴＮＦ一仪水平的变化ＣＩＡ大鼠血清ＴＮＦ一 仪较正常升高（Ｐ＜０．０１），治疗３周时，ＰＷ、ＧＦ及 ＴＢ组血清ＴＮＦ．仪水平与模型组比明显降低（Ｐ＜ ０．０１），趋于正常；继续用药，血清中ＴＮＦ．仪仍有降 低的趋势，见表２。 ２．５血清ＩＬ－２水平的变化ＣＩＡ大鼠血清ＩＬ一２水 平较正常显著升高（Ｐ＜０．０１），治疗３周时，甘草附 子汤、痛痹方及普威可明显下调血清ＩＬ．２水平（Ｐ＜ ０．０１）；继续治疗６周后，三组血清ＩＬ．２的含量降低 ＝＋ＴＢ ＝＝ ～．．一－一／／ ＼．～．＼． ～。 ——・一Ｃ ／ 。一二一． ．。 鲁＝／ ／’、—：；簪 ≮ ＝≤ 乏 ：＝ ．一 １ １ ３ ５ ７ ９ １１ １３ １５１７１９ ２１２３２５２７２９３１３３３５３７３９４１（ｄ） 图１ ＣＩＡ大鼠各组左足关节肿胀率 Ｆｉｇ．１ Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｌｅｆｔ ｈｉｎｄｐｏｗ ｓｗｅｌｌｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ＣＩＡ ｒａｔｓ 维普资讯 http://www.cqvip.com 表１各组大鼠用药３周、６周血清ＳＡ浓度（ｍｍｏｉ／Ｌ，Ｘ± ） Ｔａｂ．１ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ＳＡ ｌｅｖｅｌ ｗｉｔｈ ３ ａｎｄ ６ ｗｅｅｋｓ ａｄ－ ｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｓ（ｍｍｏＶＬ，Ｘ －４ ） Ｎｏｔｅ：ｖｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，１）Ｐ＜Ｏ．Ｏ１；ｖｓ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ，２）Ｐ＜Ｏ．０５，３） Ｐ＜０．０１． 表２各组大鼠用药３周、６周血清ＴＮＦ－ 水平（Ａ，Ｘ４－ ） Ｔａｂ．２ Ｃｈａｎｇｅｓｏｆ ｓｅｒｕｍ ＴＮＦ－ｄｌｅｖｅｌ ｗｉｔｈ ３ ａｎｄ ６ ｗｅｅｋｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｓ（Ａ， ４－ｓ） Ｎｏｔｅ：ｖｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，１）Ｐ＜０．０１；ｖｓ ｎｏｍｕｄ ｇｒｏｕｐ，２）Ｐ＜Ｏ．０５，３） Ｐ＜０．０１． 表３各组大鼠用药３周、６周血清ＩＬ＿２水平（Ａ， ４－ｓ） Ｔａｂ．３ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆｓｅｒｕｍ儿－２ ｌｅｖｅｌ ｗｉｔｈ３ ａｎｄ ６ ｗｅｅｋｓ ａｄ－ ｍｉｎｉ￣．ｔｒａｔｉｏｎｓ（Ａ－ ４－ｓ） Ｎｏｔｅ：ｖｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，Ｉ）Ｐ＜Ｏ．０１；ＶＳ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ，２）Ｐ＜Ｏ．０５，３） Ｐ＜０．０１． 到正常水平，明显低于模型组，ＣＩＡ大鼠ＩＬ－２也有 降低的趋势，但始终高于正常组，见表３。 ２．６血清ＳＡ与ＩＬ－２相关性分析ＣＩＡ大鼠血清ＳＡ 水平与ＩＬ－２水平呈显著正相关（ｒ＝Ｏ．３６８，Ｐ＜Ｏ．０５）。 ２．７滑膜组织病理学观察 正常滑膜衬里层呈 １～２层细胞厚度，细胞排列规则，表面光滑，无炎细 胞浸润。ＣＩＡ模型组大鼠滑膜细胞增殖达７～８层， 呈粗大绒毛状伸人关节腔内；滑膜下层可见多处灶 性淋巴细胞浸润，散在的浆细胞和巨噬细胞，可形成 “淋巴样小结或淋巴样滤泡”，浸润细胞还多聚集在 中国免疫学杂志２００７年第２３卷 图２甘草附子汤和痛痹方对ＣＩＡ大鼠滑膜病理学影响 （ＨＥ×２００） Ｆｉｇ．２ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｙｎｏｖｉｔｉｓ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｒａｔｓ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｏｐｆｉ－ ｃａｌ ｍｉｅｒｏｓｃｏｐｉｃｓ（ＨＥ×２００） Ｎｏｔｅ：九Ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ；Ｂ．Ｐｕｗｅｉ ｗｅｓｔｅｒｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ； Ｃ．Ｇａｌｌｃａ０ｆｕｚｊ－ｔａｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；Ｄ．Ｔｏｎｇｂｉ－ｆａｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ． 血管周围；滑膜内血管丰富，血管内膜变形增生，管 腔变窄或阻塞；部分标本可见增生的滑膜和血管侵 人软骨或骨组织，形成血管翳 。中药治疗组（ＧＦ、 ＴＢ）和西药治疗组（ＰＷ）滑膜组织结构较模型组明 显改善。滑膜细胞呈轻度增生，少见绒毛状改变；滑 膜下层及血管周围未见大量单核细胞浸润．少见或 偶见“淋巴滤泡”；新血管生成减少，其中以痛痹方 组尤为明显，血管内膜的增生阻塞普遍减少，少见血 管翳形成，见图２。 ３讨论 慢性滑膜炎是ＲＡ的主要病理变化，是由免疫 功能紊乱而介导的以滑膜为靶器官的炎症反应，关 节肿胀为其突出的临床表现。大量炎细胞粘附聚集 到滑膜局部，并被激活而发挥生物效应，分泌各种细 胞因子，形成复杂的细胞因子网络，参与ＲＡ的免疫 调节和炎症反应。类风湿关节炎隶属于中医“痹 证”范畴。风寒湿邪侵人人体造成气血周流不畅而 至关节肢体肿胀疼痛，因其具有病情顽固，迁延难 愈，且疼痛遍历周身多个关节的特点。甘草附子汤 出自《伤寒论》：“风湿相搏，骨节疼烦，掣痛不得曲 伸……甘草附子汤主之。”当首推为治疗寒湿痹证 的经典方剂。痛痹方为甘草附子汤基础上加活血化 维普资讯 http://www.cqvip.com 瘀之当归、牛膝等药，疏风散寒通络之羌活、海风藤 组成的临床经验方。本方旨在温经通络基础上增强 祛风除湿、活血通络之功效。 肿瘤坏死因子Ｏｔ（Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ Ｏｔ，ＴＮＦ． 唾液酸是神经氨酸的酰化衍生物，广泛存在于 各种生物的组织中，是构成细胞表面的复合糖脂的 组成部分，通常在糖蛋白和糖脂末端以糖甙的形式 存在。细胞代谢异常时，ｓＡ脱落进入体液，血清中 ＳＡ水平升高，有关血液中ＳＡ水平变化的可能机制 Ｏｔ）是由巨噬细胞产生的具有多方面炎症效应的细胞 因子，是ＲＡ促炎细胞因子网络中的典范＿４］。ＴＮＦ．Ｏｔ 可促进血管内皮细胞表达粘附分子，趋使单核细胞和 巨噬细胞聚集于滑膜炎症局部，诱导软骨和成纤维细 尚不完全清楚。有些学者认为，癌症病人血中ｓＡ 水平升高是由于癌细胞代谢活跃，ＳＡ从细胞表面脱 落所致。本实验结果显示，ＣＩＡ大鼠血清中ＳＡ水平 胞合成与分泌胶原酶、前列腺素Ｅ２等炎症介质，介导 滑膜炎症和软骨破坏，在软骨／血管翳结合部位检测 到ＴＮＦ—Ｏｔ，提示它参与了软骨的降解。在本实验中， ＣＩＡ大鼠模型血清ＴＮＦ—Ｏｔ明显增高，经中药甘草附子 汤和痛痹方治疗后３周后，血清ＴＮＦ．Ｏｔ水平明显降 低，治疗６周后，ＧＦ组的水平趋于正常。结合组织病 理学表现，表明ＣＩＡ大鼠的关节肿胀度及关节的僵硬 变形相应减轻，滑膜炎症得以控制。 白细胞介素（ＩＬ）．２是控制Ｔ细胞生长和分化 的重要细胞因子，在ＲＡ免疫反应中起中心作用 Ｊ。 现有研究认为，ＩＬ．２在ＲＡ及Ⅱ型糖尿病等疾病的 发病过程中起着重要的作用，尤其是在ＲＡ的发病 初期阶段 。Ｔ细胞的活化与增殖是ＲＡ发病的启 动因素，活化Ｔ细胞产生大量ＩＬ－２和细胞上ＩＬ－２Ｒ 的表达，ＩＬ－２与其受体结合又能促使活化Ｔ细胞进 一步增殖与分化，并产生免疫效应，放大免疫反应。 但目前对ＩＬ－２在ＲＡ发病中的研究尚有分歧，在 ＣＩＡ小鼠发病不同阶段表达水平各异，呈多向性作 用 。在ＣＩＡ的早期，ＩＬ．２的水平明显上调，但当 疾病进入慢性期，ＩＬ－２的表达显著下降。有研究表 明，在ＣＩＡ大鼠模型加强注射后或临床症状出现之 初予以ｒｈＩＬ－２可加重ＣＩＡ的发生及关节的严重程 度，表现促炎作用 Ｊ。二次免疫后或Ｔ细胞反应一 旦建立，ＩＬ－２主要是刺激ＩＬ－２Ｒ的产生，ＩＬ．２Ｒ即Ｔ 细胞受体，在ＲＡ中承担促炎的角色，竞争性结合 ＩＬ－２，诱导Ｔｈｌ和Ｂ细胞增殖，分化，促进巨噬细胞 的产生而加重炎症反应＿９ Ｊ。但在第二次加强免疫 之前予以ｒｈＩＬ－２，则可明显减少ＣＩＡ的发生，降低关 节炎指数，表现保护的作用。本实验结果显示，ＣＩＡ 模型大鼠６周后血清ＩＬ－２表达水平较３周虽有所 降低，但仍显著高于正常组；予以中药甘草附子汤和 痛痹方治疗３周后，可显著下调ＩＬ．２水平，继续用 药治疗至６周后，甘草附子汤和痛痹方组ＩＬ．２的表 达已接近正常水平，其中尤以甘草附子汤作用出现 早而持续。提示甘草附子汤和痛痹方抑制Ｔ淋巴细 胞的增殖与分化，减少炎性细胞向滑膜组织的浸润， 与下调血清ＩＬ－２的表达水平而发挥抗炎作用。 明显升高，其原因可能与大量白细胞聚集到滑膜组 织周围，造成慢性炎症和组织损伤相关。目前已知， 白细胞聚集作用与细胞粘附过程有关，这种粘附过 程涉及白细胞表面的一个含唾液酸的四碳糖（Ｓｉａｌｙｌ ｌｅｗｉｓ）和血管内皮的一个糖蛋白（Ｅ．Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）。炎 症发作时，内皮细胞受细胞因子刺激产生Ｅ．Ｓｅｌｅｃ． ｔｉｏｎ，它能识别白细胞表面的Ｓｉａｌｙｌ ｌｅｗｉｓ，并与之结 合使白细胞粘附于血管内皮，进而达到炎症组 织＿】 。应用温经通络中药３周后，可血清ｓＡ水平 显著降低，用药６周后已接近正常。由此提示，温经 通络中药所具有的抗炎作用在于抑制炎症反应，减 轻组织损伤，ＳＡ的脱落游离减少，也相应减少白细 胞向炎症部位的粘附。 相关分析表明，ＣＩＡ大鼠血清ＳＡ水平与ＩＬ－２ 水平呈显著正相关。上面论述及研究证实，ＳＡ是公 认的炎症反应指标，其与免疫调节因子ＩＬ．２表现的 相关性，进一步说明ＣＩＡ大鼠是免疫炎症反应的关 节炎模型，在ＣＩＡ发病过程中，血清ＳＡ可以作为免 疫介导炎症指标。实验结果显示，甘草附子汤和痛 痹方可显著下调ＣＩＡ大鼠血清ＩＬ．２及ＳＡ水平，推 测中药可能通过抑制ＩＬ．２表达，控制炎症反应及炎 细胞的浸润，进而减少ＳＡ的分泌，或作用于相关细 胞直接抑制ＳＡ的产生，从而限制炎症细胞粘附于 炎症局部，调控免疫炎症反应。 综上所述，甘草附子汤和痛痹方能够抑制ＣＩＡ 大鼠足跖肿胀，降低血清中炎症介质ＳＡ的水平，调 节血清相关细胞因子ＩＬ．２、ＴＮＦ．Ｏｔ的作用提示，温经 通络和活血化瘀中药具有减缓类风湿关节炎免疫介 导的炎症反应作用，类似于非甾体抗炎药治疗效应， 但两方剂在免疫调节机制、滑膜组织血管新生、滑膜 增殖及软骨破坏等方面的作用有待进一步研究。 ４参考文献 １ 张皖东，赵宏艳，吕诚ｅｔ ａ１．类风湿性关节炎的中医药研究进展 ［Ｊ］．中国中医基础医学杂志，２００２；１２（９）：７１４－７１９． ２李宝丽，庄鸿贤．中医药治疗类风湿关节炎的思路与方法［Ｊ］．中 医杂志，２００２；４３（５）：３８５－３８７． （下转第７０８页） 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国免疫学杂志２００７年第２３卷 表４ ＳＢＩｔＬ对小鼠脾淋巴细胞转化和ＴＮＦ－ｌｉｔ产生的影响 于免疫抑制状态。给予ＳＢＨＬ后ＳＢＨＬ显著增加 （Ａ４５ｏ，Ｊｌ＝１０， ±ｓ） ＣＴＸ抑制的小鼠胸腺重量，小鼠脾脏重量也明显高 Ｔａｂ．４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＳＢＨＬ ｏｎ ｉｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ 于对照组，ＳＢＨＬ对小鼠非特异性免疫有促进作用。 ＴＮＦ－ ｏｆｔｈｅ ｍｉｃｅ（Ａ４５ｏ，ｎ＝１０，ｘ± ） ＳＢＨＬ显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能，可明 显促进脾淋巴细胞转化。提示ＳＢＨＬ可以抵消ＣＴＸ 引起的细胞免疫损伤，使免疫损伤小鼠的Ｔ淋巴细 胞应答能力增强，对机体低下的细胞免疫具有一定 的恢复作用。同时ＳＢＨＬ在４０ ｍｇ／ｋｇ剂量时可提 高ＣＴＸ抑制的小鼠血凝素滴度；小鼠血清溶血素 Ｎｏｔｅ：ＶＳ ＮＳ ｇｒｏｕｐ，１）Ｐ＜０．０５，２）Ｐ＜０．０１；ＶＳ ＣＴＸ ｇｒｏｕｐ，３）Ｐ＜ ＣＨ加值高于对照组。抗体水平虽有增高，但不是很 ０．０５，４）Ｐ＜０．０１． 明显，这可能与用药剂量不同有关；ＳＢＨＬ可诱导小 鼠巨噬细胞活化产生ＴＮＦ－ 。结合以前我们的实验 ２．５对小鼠血清ＴＮＦ一 生成的影响与正常对照组 结果，说明ＳＨＢＬ不仅可通过其促进肿瘤细胞分化 相比，ＣＴＸ组小鼠血清ＴＮＦ－ｏＬ产生显著降低；与ＣＴＸ 机制发挥作用，也可通过改善机体细胞免疫和体液 组相比，ＳＢＨＬ组、ＣＴＸ＋ＳＢＨＬ组ＳＢＨＬ诱导小鼠巨噬 免疫功能，如促进ＴＮＦ一 产生，发挥免疫调节和细 细胞活化产生ＴＮＦ一 ，ＴＮＦ一 产生显著增加，见表４。 胞毒效应对肿瘤细胞生长产生抑制作用，体现了中 ２．６对ＣｏｎＡ诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响 草药调节机体生理功能平衡的特点。总之，ＳＨＢＬ 与正常对照组相比，ＣＴＸ组小鼠脾淋巴细胞转化 对ＣＴＸ所致的免疫损伤小鼠的非特异性、细胞和体 显著降低；与ＣＴＸ组相比，ＳＢＨＬ组、ＣＴＸ＋ＳＢＨＬ组 液免疫功能具有一定程度的恢复和增强作用。提示 ＳＢＨＬ可明显促进脾淋巴细胞转化，见表４。 ＳＨＢＬ可以作为各种免疫功能低下疾病或肿瘤放 疗、化疗患者的辅助治疗药物，对该药的临床应用有 ３讨论 一定的参考价值。至于ＳＨＢＬ对免疫损伤的恢复作 中药龙葵对肿瘤细胞生长的抑制作用是近年来 用机理和适宜的药量有待于进一步研究。 研究的热点之一。澳洲茄胺盐酸盐是从龙葵中提取 ４参考文献 出的龙葵总生物碱，经生物转化后的主要活性成分。 我们以前的实验结果表明，ＳＨＢＬ对体外培养的人 １艾金霞，刘良，王冰梅ｅｔ ａ１．ＳＢＨＬ对ＨｅＬａ细胞生长抑制作用 ＨｅＬａ细胞生长有明显的抑制作用，其对小鼠荷瘤 的影响［Ｊ］．第四军医大学学报，２００４；２５：１７９１—１７９３． ２ Ｐｕｔａｌｕｎ Ｗ，Ｔａｎａｋａ Ｈ．Ｓｉｍｐｌｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｅｒｏｉｄａｌ ａｌｋａｌｏｉｄ ｓｌｙ— Ｈ 肝肿瘤细胞的增殖有显著的抑制效应 ｊ。 ｃｏｓｉｄｅｓ ｂｙ ｔｈｉｎ—ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇ ｕｓｉｎｇ ｍｏｎｏ－ 因为大多数肿瘤患者在使用抗肿瘤药物时对机 ｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉＩｌｓｔ ｓｏｌａｍａｒｇｉｎｅ［Ｊ］．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ，１９９７；４０４（２－ 体免疫功能有抑制作用，配合使用免疫增强药物对 ３）：２７９－２８２． 提高其抗肿瘤疗效及患者的生命质量有重要的意 ３徐叔云，卞如濂，陈修ｅｔ ａ１．药理实验方法学［Ｍ］．北京：人民 义。本实验用ＣＴＸ造成小鼠免疫功能抑制模型，用 卫生出版社，１９８２：９４４－９５２． ４樊俊杰，贾正平，谢景文ｅｔ ａ１．瑞香狼毒多糖对小鼠免疫功能的影 于考察ＳＢＨＬ的免疫促进作用，目的在于能与ＳＢＨＬ 响［Ｊ］．西北国防医学杂志，２０００；２１：２６３－２６４． 临床治疗肿瘤时肿瘤患者的免疫状况相一致。我们 观察到注射ＣＴＸ后，小鼠的体液免疫、细胞免疫及 ［收稿２００６－０５－２９二次修回２００６－１０—１６］ 免疫器官各项指标均显著低于正常小鼠，表明其处 （编辑张晓舟徐杰） （上接第７０５页） ３李宝丽，唐方，庞晓东．Ⅱ胶原诱导关节炎大鼠模型制备［Ｊ］． ｋｉｎｅ ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ，１９９９；４２： 中国免疫学杂志，２００６；（４）：３５０－３５２． １１Ｏ９—１１１７． ４ Ｆｅｌｄｍｍ＇ｍ Ｍ．Ｂｒｅｎｎａｎ Ｆ Ｍ．Ｍａｉｎｉ Ｒ Ｎ．Ｒ０ｌｅ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｒｈｅｕｎｌａ— ８ Ｔｈｏｒｎｔｏｎ Ｓ．ＢｏｉｖｉｎＧＰ，ＩＣｕｎＫＮ ｅｔａ１．Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆＩＬ－２ ｏｎ ｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ【Ｊ １．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９６；１４：３９７ ０． ｃｏｌｌａｇｅｎ．ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｉｔｓ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２Ｏ０Ｏ；１６５：１５５７—１５６３．３ ５ Ｒｕｓｅｈｅｎｓ，Ｌｅｍｍ Ｇ，Ｗａｒｎａｔｚ Ｈ．Ｉｎｔｏｒｌｅｕｋｉｎ－２ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｂｙ ｓｙｎｏｄａｌ ９ Ｔｈｅｚｅ Ｊ．ｋｌｚａｒｉ Ｐ Ｍ，Ｂｅｒｔｏｇｌｉｏ Ｊ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｒｅ－ ｌｆｕｉｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｆ Ｊ］．Ｂｆ Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，ｌ９８８； ｃｅｎｔ ａｃ￣｝９，．ｎｃｅｓ ａｎｄ ｎｅｗ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｆ Ｊ】．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏ－ ２７：３５０－３５６． ｄａｙ．１９９６；１７：４８１４８７． ６ Ｏｎｃｕｌ ０．Ｔｏｐ Ｃ．０ｚｋａｎ Ｓ甜ａ１．Ｓｅｒｕｍ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ２ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｐａ－ １Ｏ田乃旭，屠鹏飞．药物学研究与展望［Ｍ］．北京：科学出版社， ｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｎｓｉｉｆｖｉｔｙ １９９９：５４－５９． ［Ｊ］．Ｊ Ｉｎｔ Ｍｅｄ Ｒｅｓ，２００２；３０：３８６—３９０． ７ １Ｔｈｏｒｎｔｏｎ Ｓ．Ｂｏｉｖｉｎ Ｇ Ｐ．Ｍａ Ｙ甜０Ｚ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｃｏｌ— ｌａｇｅｎ．．ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｗｉｔｈ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ａｎｄ ｃｈｅｍｏ．． ［收稿２ｏｏ６－１１—１０修回２００７－０４－２７］ （编辑徐杰张晓舟）
