醇脂质体细菌内毒素的检测

中国医药工业杂志ChineseJour几alofPharmaceutlcal2001.32(6 文章编R-:1001-8885(2001)06—086603 紫杉醇脂质体细菌内毒素的检测 张震宇,章小萍,马玉萍,唐黎明 (海市药品检验所.上海008230)

摘要:对注射用紫杉醇脂质体中的细苗内毒素检查方法进行了研究=以60乙醇溶液作为溶剂破坏脂质体后进行

试验.结果表明,6O的乙醇溶液列细菌内毒索的话性无明显影响}4的乙醇溶液和0.17rag/m]的供试品藩液对

鲎试剂和细菌内毒素的凝集反应无明显干扰. 美建词:紫杉醇;注射用脂质体;细菌内毒素检查 中圈分类号TQ46O.7—2文献标识码:A 目前抗癌药物常采用脂质体为载体,提高其 疗效和耐受性,降低毒副作用”.紫杉醇(1)是一种 由紫杉类植物的树干,树皮或针叶中提取或半合成 的二萜类化台物,主要用于卵巢癌和乳腺癌,对肺 癌,大肠癌等也有一定的治疗作用0.23.l脂质体能 均匀地分散于氯化钠注射液或5葡萄糖注射液中 而不析出结晶,提高了疗效.为了保证临床使用的 安全,中国药典2000年版规定必须对静脉注射药物 进行热原检查,但在热原试验时,抗癌药物本身的毒 性常会引起家兔体温的异常变化,影响实验结果的 准确性.因此目前多采用细菌内毒素检查法.本文 对注射用1脂质体细菌内毒素检查的方法进行研 究.

1仪器和试药

细菌内毒素工作标准品(批号:80007,lO0EU,ml中国药品生 物制品检定所)1鲎试剂(批号:9807i5,–0.5EU/ml;批号:

090410A-=003EU/ml,湛扛安度斯生物有限刮1细菌内毒紊 楗查用水(批号:080811.湛江安度斯生物有限公司);l对照品(批 号;108182r古量97.9.Bristol—MyersSquibb公司)i炔诺酮(批号 920301,卜海第十二制药厂)Il脂质体样品(规格:15rag~瓶上海医 药工业研究院);甲酵,乙酵均为光谱纯

Agilent11『1()型高教踱相色谱仪(美国AgilentTechnologies公

司)1XW一80A型旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)l8O1型台式离 心机(上海手术器槭厂J;Nikon显微镜(日丰Nikoa公司】 2方法和结果 2一样品处理

供试品溶液的配制:取样品l瓶,加6O乙醇6

ml,混旋5min,离0(3000r/rain)15min,取上清液 作为供试品溶液.

取供试品溶液于显微镜(15×40)下观察,并与

用注射用水代替60乙醇配得的溶液比较,结果见 图1

●-_1原料1样品以注射用承配制1样品以60乙醇溶液配制 圄l样品藩j丧显被镜观察结果

取供试品溶液,参照文献【进行含量测定,结果表1含量测定结果 见表1.

收稿日期:200102～19

作者筒卉:张震宇(1g68),男,主管药师从事药品橙驻,药物丹 析丑质量标准研究 T.021703139*3

Email:shypiysc@onlinesh.cn

中国医药工业杂志Chlnese

由图1,表1可知,60乙醇溶液已基本破坏了 1脂质体的卵磷脂层.

2.2内毒素检查方法确证试验

2.2.1乙醇对细菌内毒素与鲎试剂凝集反应的干 扰试验

预试验:取细菌内毒素工作标准品1支,以

6O的乙醇溶液溶解后,分别用检查用水及相应浓 度的乙醇溶液稀释成行检查.结果显示6批供试品细 菌内毒素含量均小于0.18EU/mg. 3讨论

3.1细菌内毒素检查系利用鲎试剂与细菌内毒素 产生凝集反应的机理,以判断供试品中细菌内毒素 的限量是否符合规定的一种方法(中国药典2000年 版,附录86;美国药典24版,1829)通常须将供试 品溶于细菌内毒素检查用水后进行测定.由于脂质 体系将药物包裹在卵磷脂内.要测定药物所含的内 毒素就必须采用特殊的溶剂先破坏其卵磷脂层.将 药物释放出来.因此我们参考文献.选择了6O

乙醇溶液作为溶剂本试验提取方法提取后的溶液 以显微镜观察显示(图1)脂质体已被破坏,1呈结晶 状态;含量测定结果均在规定的范围之内.表明 6O乙醇已基本破坏其卵磷脂层.

3.2为观察6O的乙醇溶液是否对细菌内毒素的 活性及内毒素与鲎试剂的凝集反应有影响,本试验 (下转第288页)

中围药丁杂志Chinese3ourna】OfPharmaceuticals200】.32(6 ArylpropionicAcids

HUAiX1.CA()ShengChun.DONGX/an—Ming!一WENLingFe

t1(~llegeChemistrynnd(~VcemicalE!nee~ng,H0…!i…,Changsha410082~ YechangEducationCollege,Yichang443300)

ABSTRACT:Opticalresolutionof2-ary[propionicacidsbyenzymecatalyzedhydrolysisandester[1ica—

tjonarereviewed.

KeyWords:2arylpropionicacid;enzymecatalyzedhydrolysis;esterification;resolution ………………,………………………………………,………,………,…………… (上接第265页)

采用了将6O的乙醇溶液直接溶解细菌内毒素工 作标准品,并将乙醇浓度稀释至5以下的方法结 果表明,60的乙醇溶液对细菌内毒素的活性无明 显影响.可作为供试品细菌内毒素检查时破坏其卵 磷脂层的溶剂;同时4的乙醇溶液对内毒素与鲎 试剂的凝集反应也无明显干扰作用

3.3供试品溶液用检查用水稀释成0.17mg/ml 的稀释液(其中乙醇浓度约4).以此稀释液配制

的内毒素溶液测得的鲎试剂灵敏度与检查用水配制 的内毒素溶液测得的结果一致,表明该浓度下的供 试品对内毒素与鲎试剂的凝集反应无明显干扰作 用.

3.46批供试品的细菌内毒素含量均小于0.18 EU/’mg.根据文献i,l临床剂量为l3j～175mg/’ m,加至500～l000ml的氯化钠注射液或5葡萄 糖注射液中,静脉滴注3h参照文献将0.4Eu mg作为供试品内毒素的限值,人体表面积按1.5 m,体重按60kg计算,并加上大输液中可能含有的 内毒素量(按中国药典2000年版规定的0.5EU m1),则每小时输入体内的内毒素最大量约为3.4 EU/kg.小于中国药典2000年版规定的阈值5EU kg?h,因此我们认为该限值可作为供试品内毒素 的限值,以保证临床使用的安全. 参考文献:

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DeterminationofBacteria1EndotoxinsinPaclitaxe1Liposomes

ZHANGZhenYu,ZHANGXiao—Ping,MAYu—Ping,TANGLi—Mmg (S~angkaiInstituteJotDrugc.nEm!.Shah￡hai200233)

ABSTRACT!Abacterialendotoxintestwasdevelopedfordeterminationofpaclitaxe[1iposomesforin— jection,using60ethanolforpretreatment.TheresultSshowedthattheactivityofthebacterialendotox inwasnotaffectedby60ethano1.and4ethanoland0.17mg/mlpac[itaxelsolutiondidnotinhibit0r enhancethegelclotreactionolbacterialendotoxinwithLAL. KeyWords:pacIitaxe[;liposomes:bacterialendotoxintest 2 Ⅲm DP ～ R

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