aatcc 47-20 纺织品的抗菌性：平行划线法

本标准1976年由AATCC委员会RA31研发完成；1977,1982,1998重申， 1980,1982,1983,1986,2010编辑修正；1993,2011（标题改变）修正；2004编辑修正并重申。 前言

平行划线法能够满足对整理后织物上的抗菌整理剂扩散性能的需要，并且这种方法相对快速，简单精确。

AATCC100的方法，是一种对纺织物材料的抗菌性能的评价方法，这种方法需要一定数量的步骤，这些步骤要有足够的灵敏度。但是对于常规的质量控制和筛选、试验，这些步骤比较难于处理并且较耗时。因此，当目的是通过抗菌剂向琼脂的扩散性能来描述抑菌活性的话，

AATCC147 的这种方法能够满足这种需要。在平行划线法中，琼脂的表面是接种过的，这样便于区分测试的微生物和未杀菌的污染物有机体。多年来，平行划线法用于测试抗菌性能，革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性菌，已经证明是有效的。 1. 目的和范围

1.1目的是检测纺织材料上的抑菌活性。这个过程的结果已经被RA31委员会证明具有可重现性的，不同的实验室对材料用多种标准洗涤剂进行水洗之后，材料上仍然存在大量的抗菌剂（通过化学测试后得出的结论）。这种方法对于得到对活性的粗略估计上是有用的，这种方法中，接种液中的微生物从每条划线的一端逐渐减少到另一端，然后又从一条划线减少到另一条划线，导致了敏感程度的增加。抑菌区域的大小和划线的变窄是由多次水洗后的残留抗菌剂的抗菌性能引起的，即剩余抗菌性能的估计。 2.原理

2.1测试材料的样品，包括作为对照但未经过处理的同样的材料，然后把它们放在琼脂表面。琼脂事先用测试细菌接种液划线。经培养后，在测试材料的下面或者沿着材料两边的一个

清晰的未生长菌落区域，这表明样品具有抗菌性。细菌的标准菌株被应用，这种标准菌株对于正在测试的材料的需求是待定的。如果没有指定的细菌，金黄色葡萄球菌就可能被应用为革兰氏阳性微生物的代表。在第6部分会列出一些其他推荐的菌株。 3.专业术语

3.1活性，名词-对抗菌剂效能的一种评估。

3.2抗菌剂。名词-织物上任何可以杀死细菌（杀菌剂）或干扰其繁殖、生长或细菌活性的化学物质（抑菌剂）。

3.3抑菌圈，名词-在一种琼脂培养基的表面，一个明显的生物有机物不生长的地方。生物有机体养殖到琼脂表面并与样品直接接触。

注：抑菌圈的出现是由于试样释放出的抗微生物因子的扩散而造成的。 4.安全防范

注：这些安全防范仅仅是告知的目的。这些防范只是一些测试步骤的辅助，并不是所有的要进行的步骤都要有的。在这个测试方法中，安全并适当地使用技术对材料进行处理是操作者应有的责任。我们也必须向生产厂商咨询一些特殊的细节，例如：材料的安全数据表和其他一些厂家的建议。我们也必须咨询和遵守所有的职业卫生条例的标准和规则。 4.1这个测试由经过培训的员工进行操作，并且还需要参考美国的健康和人类服务刊物；微生物和生物医学实验室。（见12.1）

4.2警告：这个测试里用到的一些细菌是致病的；也就是说，能够感染人类和产生疾病。因此，我们要采取一些必要的合理的措施去消除这种对是实验员和相关的环境所造成的风险。穿防护衣服和呼吸防护可阻止细菌的渗透。

4.3我们应该遵循良好的实验室规范：在所有的试验区域内戴防护眼镜。 4.4小心所有的化学药品。

4.5洗眼水和消防设备（安全喷淋设备）应该就近放置以备紧急使用。 4.6在处理所有的被污染样品和测试样之前都要先灭菌。

4.7在这个程序中暴露在空气中的化学药品的含量应当控制在或者低于部门所规定的。例如，19年的29CFR1910.1000；详情可见网址：的最后一段。另外，美国及工业卫生协会标准对化学品毒性规定的阀限值由时间加权平均值，短期暴露限值还有上限组成，一般推荐这些作为能够空气污染物限值（见12.2）。. 5.适用局限性

5.1这种方法不适用于那些易于凝聚或者阻抗菌剂分散的材料或包含抗菌中和物质的材料。 6.测试菌种

6.1.1金黄色葡萄球菌，ATCC6538，CIP4.83，DSM799，NBRC13276，NCIMB9518或等同菌种（见12.3）。

6.1.2肺炎克雷伯菌，ATCC4352，CIP104216，DSM7，NBRC13277，NCIMB10341或等同菌种（见12.3）。

6.1.3其他适合的菌种是否可用取决于测试样品的最终用途。 6.2根据良好的实验室操作标准来转接菌种。

6.3在任何可能的时候，用已知抑菌活性的标准样品（阳性控制）来测试菌种的活性。 6.4为了确定抗菌作用是否是由抗菌剂所产生的，使用其他同样的处理试剂，但是不使用这种抗菌剂，用同种材料同种方法对样品再进行测试。许多标准的织物经化学处理，特别是抗皱助剂和耐久压烫助剂，通常能在多次洗涤后仍具有很强的抗菌活性。 7. 设备，培养基和试剂

7.1培养基和试剂，合适的肉汤/琼脂培养基有： 7.1.1营养肉汤/琼脂培养基（NB，NA） 7.1.2胰蛋白胨大豆肉汤/琼脂（TSB，TSA） 7.1.3脑心浸出液肉汤/琼脂（BHIB，BHIA） 7.1.4 Muller-Hinton肉汤/琼脂 7.1.5根据测试的菌种选择合适的培养基

7.2设备

7.2.1培养箱，37±2℃（99±4℉） 7.2.2接种环 7.2.3酒精灯

7.2.4水浴锅，45-50℃（113-122℉） 7.2.5灭菌移液管：1ml 7.2.6带盖试管：10ml

7.2.7无菌培养皿：100mmx15mm 7.2.8无菌镊子

7.2.9立体显微镜（40x倍镜） 直尺 8.测试样品

8.1测试样品（未杀菌）试样采用手切或者模切，可以是任意大小。建议切成25x50mm的长方形样品。长为50mm保证了样品可以放在宽度从8mm减小到4mm的5条相互平行的接种线上。 9.试验步骤

9.1将15±2ml无菌营养琼脂（冷却至47±2℃）倒入无菌培养皿中，待琼脂凝固后进行接种。

9.2接种前，取1.0±0.1ml、24h的液体培养液转移到装有9.0±0.1ml蒸馏水的测试管或者小瓶中，适当搅拌使其混合均匀。

9.3采用一根直径4mm的接种环，蘸一环稀释培养液并转移到无菌琼脂平板的表面，在琼脂表面划5条长约60mm、空间间隔10mm并且覆盖了培养皿中间区域的接种线。

9.4轻压测试样（横穿5条接种线）以确保样品与琼脂表面紧密接触，或者可以通过使用镊子或者抹刀（使用前先经火焰灭菌并且在空气中立即冷却）。

9.5若样品有弯曲，从而阻止样品与琼脂表面紧密接触，这时可以在样品末端放置无菌玻璃片以固定样品。

9.6培养在37±2℃下进行，时间为18-24h。 10.评价

10.1检查培养平板：菌种沿接种线在样品附近间断繁殖，在样品边缘形成一明显抑菌区。沿着测试样品每边的接种线的抑制区的平均宽度可由下式计算： W=（T-D）/2

式中：W=抑制区的宽度（毫米）

T=测试样品和抑菌区的总直径（毫米） D=测试样品的直接（毫米）

10.2抑制区的大小不能作为抗菌活性的定量评价。经抗菌剂处理的材料应该同未经处理的材料以及具有已知抑菌活性的样品材料进行对比。测试结果报告包括对抑菌区的观察以及样品下面细菌的生长情况（若存在的话）。通过测试的标准必须同相关的当事人达成一致。为了建立可接受的抗菌活性，要求在测试紧密接触的下方必须无细菌生长。 11.精度和偏差

11.1这种方法的精度还没有确立。在这种方法的精度和陈述还没有产生之前，我们用标准的统计技术对测试结果的组内平均值或者组间平均值进行对比。 12.附注和参考

12.1出版物可从美国健康与人类服务机构-CDC/NH –HHHS出版物获得。电话84-8395；网址：。

12.2小册子可从出版局索取：ACGIH，Kemper Woods Center，1330 Kemper Meadow Dr.，Cincinnati OH 45240；电话：513/742-2020；网址：。

12.3 ATCC即美国典型微生物菌种保藏：P.O. Box19，ManassasVa 20108；电话：703/365-2700；传真：703/365-2701；CIP即法国巴斯德研究所菌种保藏中心；DSM即德国

微生物菌种保藏中心；NBRC即日本技术评价研究所生物资源中心；NCIMB即英国食品工业与海洋细菌菌种保藏中心；WFCC即世界培养物保藏协会。

12.4测试用的培养基保持纯净，无污染的，菌种无变异，使用无菌的转接和接种以避免其受到污染，菌种严格坚持每月转种以避免变异，定期检查菌种纯度，通过选择性平板上的特征菌落。