新的分光光度法快速_灵敏测定磺胺类药物(1)

新的分光光度法快速、灵敏测定磺胺类药物

摘 要 介绍了一种灵敏、快速而又易于操作的测定磺胺类药物分光光度法。该方法的原理是磺胺重氮化后生成一种红色物质,测定磺胺衍生物范围包括磺胺噻唑(SFT),磺胺嘧啶(SFD),磺乙酰胺(SFA),磺胺甲草唑(SFMx),磺胺甲嘧啶(SFMr),磺胺脒(SFG),磺胺二甲嘧啶(SFMt)。在H2SO4(1:1)介质中,并在钼酸根离子存在下,磺胺与多巴胺发生络合作用。在490-510nm波长下测量所生成红色溶液的吸光度,该溶液在27e下能够稳定2天,在最高吸收值波长下,0.04-8.0Lg/mL浓度范围内遵循比尔定律。本方法已成功的应用于片剂药物和眼药水的测定之中。制药过程中所使用的常规成型剂并不影响测定。本方法具有简便、快速、灵敏度高的特点,而且无需加热或其它提取过程。文中分别给出了SFT,SFD,SFA,SFMx,SFMr,SFG和SFMt的方法检出限和适用浓度范围。1 前言

磺胺类药物广泛的应用于治疗感染性疾病,特别适用于那些对抗生素缺乏耐受力的病人。它所带来的巨大的商品效益,使得制药行业中磺胺类药物的化学研究和生产都有了长足发展。应运而生了许多磺胺类药物的测定方法,包括亚盐法(1-电分析法有过报道

3)

购置。2.3 溶液

蒸馏水)))用于配制溶液。

磺胺类药物标准品(1000Lg/mL))))分别称取各种药物100mg,溶于2.0-3.0mL盐酸溶液中(1.0mol/dm3),定容至100mL。

磺胺类药物工作标准溶液(25Lg/mL))))使用文献(30)的方法进一步稀释。

0.2%盐酸多巴胺水溶液;1%钠水溶液。2%钼酸钠溶液

1.0mol/dm3盐酸溶液;1:1硫酸溶液。2.0%氨基磺酸多巴胺水溶液。2.4 操作步骤

在一系列25mL容量瓶中加入磺胺衍生物标准溶液(加入量为1-200Lg),5.0mL盐酸(1.0mol/dm3)。容量瓶经过冰浴后,旋转加入1.0mL钠溶液。将溶液放置5min。加入2.0mL氨基磺酸溶液,旋转容量瓶使溶液混合均匀,在放置5min。在加入3.0mL钼酸溶液后,再加入4.0mL盐酸多巴胺溶液。反应5min后,产生粉红色沉淀。用硫酸溶液(1:1)定容,充分混合均匀。在490-510nm波长下调整空白并测定溶液吸光度,绘制工作曲线。

商业样品的测定步骤:

称量20个药片,制成粉末。准确称取50mg样品粉末溶于3.0mL盐酸中(1.0mol/dm3),将溶液移入100mL容量瓶中,定容。取适当的量按/推荐操作步骤0所述继续操作。对于眼药水,取适量溶于3.0mL盐酸中(1.0mol/dm3),将溶液移入100mL容量瓶中,定容,同样按上述步骤操作。3 结果与讨论

文中的磺胺衍生物重氮化方法,是在钼酸根离子存在下,加入多巴胺产生粉红色沉淀;沉淀液在加入1:1硫酸后澄清并且透明。从图1可以看出这种红色溶液在510nm波长下具略不计。7种磺胺类药物的光学性质和精密度实验数据列于表2。

试验表明,在下列试剂浓度和用量下,显色反应最明显:HCl(1.0mol/dm3)4.0-6.0mL;钠溶液(1%)0.5-2.0mL;氨基磺酸溶液(2%)0.5-4.0mL;盐酸多巴胺溶液(0.2%)3.0-5.0mL;钼酸盐溶液(2%)2.0-4.0mL。因此,重氮化反应中,使用HCl(1.0mol/dm3)5.0mL,钠溶液1.0mL,氨基磺酸溶液2.0mL;再加入4.0mL盐酸多巴胺溶液和3.0mL钼酸盐溶液时产生粉红色沉淀。重氮化过程中产生的过量亚盐,可以通过加入氨基磺酸溶液去除;而过量的氨基磺酸溶液对显色反应无影响。

曾试验使用多种溶剂溶解粉红色沉淀物,包括水,甲醇,

,气相色谱法(4),液相色谱法(5,6),薄层色谱法(7),,电位滴定法

(12)

(8-11)

,免疫分析法

(13)

,容量分析

法(14,15),电导光谱法(16-18)和分光荧光法(19)。分光光度法也

(20-32)

,但其缺点是都没有给出灵敏度,需要加热或

提取,操作时间长,检测浓度范围小等。表1列出了一些分光光度法测定磺胺衍生物的方法。

我们也曾报道过使用不同试剂,以分光光度法测定异烟肼(33),盐酸多巴胺(34),氟硝丁酰胺(35),胺苯砜(36),儿茶酚衍生物

(37)

。儿茶酚衍生物的测定原理是:在酸性介质中,钼酸根

离子存在下,儿茶酚衍生物与重氮化p-硝基苯胺反应。正是这一反应机理建立了一种简便、快速、灵敏度好且准确度高的磺胺类药物测定方法。试验发现,磺胺类药物与盐酸多巴本文是我们首次将颜色反应应用于磺胺的检测之中。2 试验部分2.1 仪器

带有1.0cm比色皿的JASCO(Easton,MD)ModelUVIDEC-610UV-VIS分光光度计。2.2 试剂

磺胺衍生物)))Sigma公司生产,无需进一步提纯。钼酸)))Merck公司生产。钠)))BDH公司生产。盐酸多巴胺)))Sigma公司生产。盐酸,硫酸)))分析纯。

其它试剂和药品均为分析纯。从当地化学试剂供应商处

胺反应后,加入溶于H2SO4(1:1)的钼酸钠即生成红色物质。有最大吸收值。在此波长下,无色的空白溶液吸收值可以忽

#53#2003年 检验检疫科学 第13卷 第2期

表1 磺胺衍生物测定各种分光光度法对比

试剂-羟喹啉-5-磺基酸氯胺-T

颜色产物 偶氮染料黄色发色体

Kmaxnm530525

可检测衍生物

SFTSFAn,SFA,SFD,

SFSo

SFGSFMm,SFDmSFGSFTuSFASFDo和SFL

SFTSFASFMx和SFDSFMx和SFD

比尔定律适用

范围(Lg/mL)50-250SFAn,SFA:8000以下;SFD,SFSo:6000以下未见报道12-48400-110076-76010-704000-44000未见报道5-700.4-4.855以下4-800.04-8.0

备注灵敏度低

发色耗时长(室温4h或50e下1h;且方法仅适用于含量高样品

需45e加热10min;且颜色极不稳定

需要用非水星介质1,4-二氧六环;且需100e下加热15min

灵敏度较低,且需100e下加热5min

完全反应需20min,反应产物稳定时间只有1h

灵敏度很低,20分钟后才能反应完全

需使用非水性介质(DM-b

SO),且需100e下加热5min

需90e下加热10min

参考文献2021

次氯酸盐和苯酚bindone钒酸铵R-四氯苯醌高碘酸硫酸甲氨基酚N-3-氯4-氧-1萘苯磺酰氨

p-苯醌4-二甲基肉桂醛p-苯醌乙酰丙酮-甲醛多巴胺-钼酸根离子

黄绿色发色体电荷转移络合物蓝色混合物电荷转移络合物紫色发色体离子对络合物电荷转移络合物红色发色体电荷转移络合物电荷转移络合物络合物

4504808005255205025005500400

22232425262728

15分钟后才能反应完全,且

29,30检测范围较窄需65e下加热1h

预加热5min,之后还需40e

加热25min

灵敏度高,无需加热和萃取,反应速度快

3132本文

SFA,SFDm,SFD,SFTSFD,SFA,490-510

SFT,SFMx,SFG,SFMr,SFMt

a SFAn=氨苯磺胺;SFSo=磺胺嘧啶;SFMm=磺胺间甲氧嘧啶;SFDm=磺胺二甲氧基嘧啶;SFTu=磺胺硫脲;SFDo=磺胺多辛;SFL=四氢噻

吩砜;SFT=磺胺噻唑;SFA=磺乙酰胺;SFD=磺胺嘧啶;SFG=磺胺脒;SFMx=磺胺甲草唑;SFMr=磺胺甲嘧啶;SFMt=磺胺二甲嘧啶。 b DMSO=二甲基亚砜

表2 磺胺药物a的光学性质和精密度试验

参数和特性颜色波长(nm)比尔定律范围(Lg/mL)摩尔吸收系数(L/mol.cm)灵敏度光度测定范围

SFT酒红5100.05-6.03.34@1040.00761.0-5.0

SFD橘红4900.1-7.02.41@1040.01041.2-5.5

SFA酒红5000.1-8.03.69@1040.00790.8-7.0

SFMx酒红5000.1-7.02.67@1040.00941.0-6.0

SFMr红5100.15-6.02.91@1040.00911.1-5.0

SFG红5100.04-5.03.92@1040.00550.5-4.2

SFMt酒红5100.05-6.03.38@1040.00821.0-5.0

回归方程式b

斜率(b)截距(a)校准系数(r)

c

相对标准偏差(%)

误差范围检测限(Lg/mL)定量限(Lg/mL)

0.07390.04420.930.9671?1.34230.03060.1020

0.1105-0.00771.00211.022?1.41850.02360.0787

0.1231-0.02190.99760.7745?1.0750.05300.1768

0.10620.01210.99710.6365?0.88350.04910.1637

0.1144-0.00560.99980.9336?1.29580.06850.2273

0.12330.20990.99940.6286?0.87250.03170.10

0.11350.00370.99940.7012?0.97320.03570.1190

a磺胺药物的缩写词见表1注脚。

by=bx+a式中x为浓度(Lg/mL)。c五次重复测定。

##2003年 检验检疫科学 第13卷 第2期

表3 不同的离子和赋形剂对磺胺衍生物a(2Lg/mL)测定的影响

加入的离子或混合物盐氯化物氟化物溴化物酸盐Lodide草酸盐醋酸盐磷酸盐酒石酸盐亚硫酸盐葡萄糖藻酸盐抗坏血酸羧甲基纤维素阿拉伯树胶硬脂酸镁硫氰酸盐铝(Ó)硫化物钴(Ò)锌(Ò)镍(Ò)钙(Ò)铁(Ó)葡萄糖滑石粉淀粉

SFT40009001000800200030150014008050018001000050016(80)b50004000400012020003001000800040004000804000500010000

SFD40005001300900200020150060060700800900040015(70)b3000300035001403500450170070003000350070400065007000

SFA500030014007003000251800300706008501000060020(100)b4000350055001002500400200080005000350060600070008000

最高允许量(ppm)

SFMx

45006001200800300030170050080600700800070020(80)b3000350040001503000400150060004000350090500040007500

SFMr40008001250900400040160060090800900800075024(120)b30004000500014030005001500600030004000100400060007000

SFG30008501210700405035180030070400700900080020(120)b40004500450016040003001600800040004500120400050007000

SFMt4000250800600300020140050060700600400035010(50)b400025003000100500025080050002000200060350040005000

a磺胺药物的缩写词见表1注脚. bFe3+屏蔽.

表4 药品制剂的磺胺检测

分析对象药片

septranc(SFMx)磺胺嘧啶d(SFD)眼药水

磺乙酰胺e(SFA) Loculaf(SFA)

400mg500mg10mg/mL10mg/mL

399.3?0.698.4?0.509.8?0.159.9?0.08

399.6?0.70498.9?0.409.9?0.209.9?0.10

399.3?0.699.0?0.609.9?0.109.9?0.10

a

检测结果

标签示值

官方方法(1)

(mg或mg/mL)b

文献报道方法(30)

本方法

a磺胺药物的缩写词见表1注脚。

b每个数据均为五次测定平均值?标准偏差。 c由BurroughsWellcome销售。

d由Rhone-Poulenc销售。

e由印度NicholasPiramal有限公司销售。f由东印度有限公司销售。

乙醇,醋酸,盐酸,和乙腈。试验表明1:1硫酸不仅能够溶解沉淀,而且能产生稳定的,颜色强度最大的红色澄清溶液。在酸性环境下,磺胺药物与亚盐反应生成重氮盐,重氮盐在钼酸盐存在下,与盐酸多巴胺发生偶合作用,生成粉色偶氮混合物,溶于1:1硫酸后生成红色溶液,在490-510nm波长处具有最大吸光度。这种红色偶氮产物能保持稳定两天以上。其稳定性研究是在一般试验温度条件(20~40e)下进行的。40e下其稳定性能保持10h以上,而且其结果同样具有

较好的重现性。本方法推荐试验温度为20~30e。

其他离子或物质的存在所产生的干扰,通过对含2Lg/mL磺胺衍生物和其它相同背景的溶液吸光度进行测定。只存在2%的偏差,认为可以忽略。通过稳定性测试和最大允许差计算,表3中所列出的离子,如Cu(Ò),Ag(Ñ),CN-的存在会给结果带来显著影响。同样,氧化性试剂如T-氯胺,N-溴代琥珀酸,重铬酸钾也会影响本方法的测试。对含量为2Lg/mL的磺胺药物进行10次重复试验检察结果(下转第50页)

#55#2003年 检验检疫科学 第13卷 第2期摩托车发动机/生产中使用非原产原料的价值不超过该产品出厂价40%0的要求,摩托车发动机也就取得了中国原产的资格,完成了第一阶段转化;这种取得原产资格的发动机最后与其它部件装配成整机摩托车,由于其他部件均为国产部件,因此根据分段计算的理论,进口化油器不计为进口成份,整车摩托车可以判断完全国产。

4.1.2 以毛绒玩具为例,欧盟普惠制方案的加工工序清单:生产中:使用本品目号以外的原料制成,使用非原产原料的价值不超过该产品出厂价的50%。

毛绒玩具使用的原料都是本品目号(95.03)以外的原料制成。毛绒玩具使用的原料一般为:毛绒、PP棉、塑料眼、鼻等,PP棉是由塑料粒子制成的,而使用进口的塑料粒子作为PP棉的原料,在判断该产品的原产地标准时是打/P0还是/W0?根据分段计算的理论,由进口塑料粒子制成PP棉,PP棉完成了第一阶段转化,PP棉获得了中国原产资格。由PP棉和其它国产原辅料再加工成毛绒玩具,已经完成了第二阶段转化。根据分段计算理论,进口塑料粒子不计为进口成份,该批毛绒玩具可以判定为完全国产。4.1.3 不能使用分段计算理论的实例。

例如,一个家用电热器具(H.S.品目号为85.16),出厂价100元,生产中使用的非原产材料的价值38元,其中有归入85.16的价值8元的电热元件。

对于家用电热器具,加工清单的规定是:生产中,使用本品目号以外的原料制成,使用非原产原料的价值不超过该产品出厂价的40%上例不适用于分段计算理论,因为没有满足/该进口原料必须转变为新的、不同的中间产品0第一阶段转化的要求,由于价值8元的电热元件没有转变为新的、不同的中间产品,因此在统计该家用电热器所含进口成分时,进口成份所占百分比为38%,而非30%。另外由于品目号为85.16的电热元件与最终成品品目号一致,没有满足/使用本品目号以外的原料制成0这一条款,即不符合加工清单的要求,因而该批电热器具不适用分段计算理论。5 其他国家的相关理论(上接第35页)

3.标准溶液的配置以处理过的样品基质为溶剂可以使其稳定性更好。欧盟实验室质量控制体系中也有类似的要求

4.处理完毕的样品溶液要马上进行分析,不能放置时间过久,如果不能马上分析要放到冰箱中保存。

5.样品应按标准要求于-5e下避光保存。

(上接第55页) 重现性;相对标准偏差为0.6-1.0%。方法用于检测磺胺类药片或眼药水等实际样品,检测结果列于表4,与官方方法(1)和文献报道方法(30)结果比较,无显著差异。

总之,本方法简便、快速、选择性好,且比其他分光光度法

美国普惠制方案中实行的双重转化理论和欧盟的分段计算理论相类似。美国普惠制方案规定:获得普惠制待遇的产品,一般必须在受惠国或在普惠制意义上视为同一个国家的同一个国家联盟的两个或两个以上成员国生长、生产、制造或组装。美国的原采地标准采用百分比标准。如果该产品并非完全由该受惠国生长、生产、制造或组装,则必须同时满足增值条件。该条件规定,在受惠国生产时所用原材料的成本或价值总和加上生产加工的直接费用必须不低于进口美国时评估价值的35%。如果要计入35%的增值条件,进口到受惠国的原材料必须经过两个的实质性改变,即/双重转化0。第一重转化,该原料必须转变为新的,不同的中间产品。第二重转化,该中间产品在形成出口到美国的产品中必须经过第二次实质性改变。这一点与欧盟给惠国方案中的分段计算理论相类似,但由于美国对双重转化没有像欧盟一样有确切的定义,仅有一些有关实质性转变问题的案例,因此对双重转化的标准的解释和运用具有较大的随意性。美国作为中国的第二大贸易伙伴,根据美国现行的普惠制方案,列入给惠清单中的产品,占我国全部输美产品的90%,所以,在研究欧盟分段计算理论的同时,更有必要抓紧认真研究美国的普惠制方案及双重转化理论。6 现实意义

6.1 在国际化大生产的背景下,社会分工越来越细,一种产品往往由许多部件构成,这许许多多部件不可能全部由一个厂家生产。只有深入研究欧盟普惠制中的分段计算理论,才能有助于我国充分利用普惠制,扩大我国的出口,提高我国产品的竞争力。

6.2 我国现得到欧盟15国和挪威、瑞士、日本、加拿大、澳大利亚、新西兰、俄罗斯、白俄罗斯、乌克兰、波兰、捷克、斯洛伐克、土耳其29个国家给予的普惠制待遇,以上发达国家加上美国共30个国家的普惠制方案中都有分段计算或类似理论,而在中国的原产地规则中则没有上述理论的阐述,因此,有必要将中国现行的原产地规则按照WTO5原产地规则协议6,参照发达国家的原产地规则作进一步修改。参考文献

1 VicamL.P.(VICAM公司内部资料)

2 任世国,段文仲等.中华人民共和国进出口商品检验行业标准.SN0637-1997

3 林海丹,林峰.免疫亲和柱法测定果仁中黄曲霉毒素.检验检疫科学,2002,12(1):24~25

具有较高的灵敏度。统计学参数和回收率试验数据也说明方法具有较好的重现性和精密度,因此,本方法是可行的。参考文献(略)

[山西检验检疫局 薛 平 译自J.AOACInternational 2002vol.85No.4.869-874

周锦帆校]

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