LC-20AT高效液相色谱仪验证方案

类 别：设备验证方案 部 门：生产部

LC-20AT高效液相色谱仪验证方案

方 案 号： VF-01-U131-2011A01-002

验证时间： 2011年11月XX日2011年11月XX日

验证地点： 无锡市凯利药业多肽药车间

无锡市凯利药业有限公司

目录

1. 参与验证的相关部门及其职责............................................................................... 1

1.1验证小组成员及职责....................................................................................... 1 1.2验证方案起草................................................................................................... 1 1.3验证方案批准................................................................................................... 1 2. 验证目的................................................................................................................... 2 3. 验证依据判断标准：............................................................................................... 2

3.1验证依据........................................................................................................... 2 3.2验证评判标准................................................................................................... 2 4.验证内容..................................................................................................................... 3

4.1安装环境的确认............................................................................................... 3 4.2运行确认........................................................................................................... 3 4.3性能确认........................................................................................................... 4 4.4 柱温箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定 ............................. 6 4.5 紫外检测器...................................................................................................... 7 4.6整机性能........................................................................................................... 8 5.验证结果及分析评价................................................................................................. 9 6.再验证要求............................................................................................................... 10

6.1再验证周期..................................................................................................... 10 6.2 再验证内容.................................................................................................... 10

本公司所用的LC-20AT高效液相色谱仪是由工作站软件（N2000）、二元泵(LC-20AT)、手动进样器（20微升定量环）、控制器(CBM-20A)、柱温箱(IN-150)、紫外检测器（SPD-20AT）以及相关管路等组成。主要用于本公司在线氧化和纯化检测。

1. 参与验证的相关部门及其职责

1.1验证小组成员及职责

验证人员 康国伟 生产部 马向东 质管部 设备工程部

1.2验证方案起草 起草部门 生产部

1.3验证方案批准

批 准 人 生产部 签 名 日 期 年 月 日 签 名 日期 卢明星 许建 部门 职务 经理/组长 纯化员 质量管理员 经理 验证分工 负责起草验证方案审核、组织协调验证 负责撰写LC-20AT型高效液相色谱仪及验证报告 负责文件核查及现场监督 保证设备正常运转 年 月 日 第 1 页 共 10 页

2. 验证目的

确认LC-20AT高效液相色谱仪的运行环境、性能等各项指标符合器所设计的性能指标。确保使用该仪器的所检测数据真实可靠，为日常检验提供准确的检测结果。

3. 验证依据判断标准：

3.1验证依据

3.1.1《药品GMP指南》2010年版

3.1.2《LC-20AT型高效液相色谱仪标准操作规程》 3.1.3《LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明》 3.1.4《中国药典》2010年版二部附录 3.2验证评判标准

3.2.1安装环境确认判断标准

确认安装符合《LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明》说明书要求。 3.2.2运行确认判断标准

安装确认认可后，在不使用试样的条件下，确认该仪器运行正常。 3.2.3性能确认判断标准

使用样品检测符合《中国药典》2010年版二部附录要求和LC-20AT型高效液相色谱仪性能指标。

第 2 页 共 10 页

4.验证内容

4.1安装环境的确认

项 目 位 置 洁净度 环 境 温度 光线 相对湿度 电 路

电源 接地 要 求 应无强震动源,无强电磁干扰源,通风良好，无明火 室内应保持清洁,无腐蚀性气体 15～35℃，全天温度变化较小 无阳光直射 45～85% AC220V±22V、50HZ±1HZ 应接地 检查情况 单项结论：_________________________________________________________

检测人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日

4.2运行确认：

严格按《LC-210AT高效液相色谱仪标准操作规程》进行操作，对仪器进行运行试验，确认其运转性能，并将检查结果填于下表中。

操作 步骤 合 格 标 准 1.打开电源，仪器自动完成初始化 操作前准备 2.将排液阀旋钮逆时钟旋转180°以打开排液阀，按“purge”，泵运行，泵指示灯亮 3.清洗完成后，按一次“func”，以改变流速，将流速设定为5ml/min,顺时针方向旋转排液阀旋钮关闭排液阀 结 果 第 3 页 共 10 页

4.按“pump”，泵运行，泵指示灯亮；约15分钟后，再次按“pump”，泵停止，泵指示灯灭 5.以上程序完成后，操作的准备工作完成 1.将流动相倒入贮液瓶，吸滤头放入贮液瓶中，排液管的一端放入废液瓶中 2.打开排液阀，逆时钟方向旋转排液阀旋钮180°，按“CE”返回检查压力值 初始屏幕，检查显示压力值是否在-0.3至0.3MPa之间 3.检查压力上下限的值是否合适，必要时更改这些值到符合要求 4.按“purge”以记录的流速开始送液，观察从排液管末端流出的流动相约10秒钟，流动相应持续流动且没有气泡，按“purge”泵停止，泵指示灯灭

单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日

复核人： 日期： 年 月 日

4.3性能确认 4.3.1 泵性能确认 1) 流量准确性确认

泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR 流量设定值（ml/min） 测量次数 流动相收集时间（min） 允许误差 SS SR 0.5 3 10 5% 3% 1.0 3 5 3% 2% 2.0 3 5 2% 2% 启动仪器，按上表的要求设定流量，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集上表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式（1）、（2）计算SS和SR，结果记录在下表中； 流量（ml/min） 次数 0.5

W1 W2 W2-W1 SS SR 1 2 第 4 页 共 10 页

3 1 1.0 2 3 1 2.0 2 3 —

注：Ss=(Fm-Fs)/Fs×100% 式（1）

100% 式（2）

SR=(Fmax-Fmin)/ —Fm×

式中：Fm ——Fm=(W2-W1)/(ρ•t)，流量实测值，ml/min； W2—— 容量瓶+流动相的质量，g；W1—— 容量瓶的质量，g；

ρ—— 试验温度下流动相的密度，g/mL；t—— 收集流动相的时间，min； — —— 同一组测量的算术平均值，mL/min；FS—— 流量设定值，mL/min； Fm

Fmax ——同一组测量中流量最大值，mL/min；Fmin ——同一组测量中流量最小值，ml/min。

单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日

复核人： 日期： 年 月 日

2) 压力范围

可执行标准：±0.2MPa设定值

测试方法：在进样阀的出口接一个两通，再将两通的另外一端用OD1.6的盲管封住。启动泵，使压力升至所设定的压力，观察仪器是否自动停泵。

次数 设置压力 （Mpa） 1 2 3 10 20 30 停止压力 （Mpa） 误差 （Mpa） 单项结论：

第 5 页 共 10 页

检测人： 日期： 年 月 日

复核人： 日期： 年 月 日

4.4 柱温箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定

将温度计（已校验，分度值为0.1℃）放置在柱温箱内，选择35℃、40℃和45℃进行检定，按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值，平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC，结果记录在下表，柱温箱温度设定值误差ΔTS≤±3℃，TC≤±1℃； 设定温度 （℃） 1 2 3 35℃ 4 5 6 7 1 2 3 40℃ 4 5 6 7 45℃ 1 2 次数 首测温度 （℃） 平均温度 （℃） ΔTS （℃） TC 结 果 第 6 页 共 10 页

3 4 5 6 7 单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日

复核人： 日期： 年 月 日

4.5 紫外检测器

4.5.1 基线噪音和基线漂移

选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，二极管阵列检测器的波长设定为2nm，待仪器稳定后，记录基线30min，由检测器的衰减倍数和测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度，计算基线噪音，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示，基线噪音应不超过5×10-4； 衰减倍数 注：Nd=KB

式中：K：衰减倍数；B：测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度 基线漂移在1h内偏离原点的值为 （AU/h），应不超过5×10-3AU/h。

检测人： 日期： 年 月 日

复核人： 日期： 年 月 日

4.5.2最小检测浓度

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测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度 基线噪音 结 果 单项结论：

采用依替巴肽分析色谱条件，进样量20µl；取适量的依替巴肽，用甲醇稀释制成1×10-6g/ml的溶液，连续进样6次，记录依替巴肽/甲醇溶液的色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰—峰高，按下式来计算最小检测浓度（CL），应不超过1×10-6g/ml，结果记录在下表；

依替巴肽依替巴肽的称样量 稀释倍数 的色谱峰高 注：CL=

2Nd×c×V H×20

平均峰高 最小检测浓度 结 果 式中：Nd：基线噪声峰—峰高；c：标准溶液浓度；H：标准溶液的色谱峰高；V：进样体积

单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日

复核人： 日期： 年 月 日

4.6整机性能

在4.4.2所记录的色谱图中，按下式计算Rsd值，Rsd≤2.0%，并将结果记录在下表中； 品 名 项目指标 分离度（R）≥1.5

称样量 实 验 结 果 结 果 第 8 页 共 10 页

图谱文件名 Rsd≤2% 峰面积（A） 2平均数（M错误！未指定书签。） Rsd值 结 果 注：M错误！未指定书签。=(A1+A2+……An)/n (A Rsd=

1M)n1M

式中：M：峰面积平均数；A：峰面积；n：测量次数

单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日

复核人： 日期： 年 月 日

5.验证结果及分析评价

结论：

检测人： 日期： 年 月 日

复核人： 日期： 年 月 日

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6.再验证要求

6.1再验证周期

6.1.1 设备大修后需再校验。

6.1.2 由于检修、调整、迁移或其它原因，可能对设备的安装情况、主要技术参数和功能有影响时，应进行再验证。

6.1.3 高效液相色谱仪的验证周期为一年，更换部件或对仪器性能有怀疑时，应随时验证。 6.2 再验证内容

进行设备的再校验，可针对设备性能中部分必须的项目进行再验证，而不一定要进行全面的验证。

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