001 (2012生技)实验一 培养基母液的制备

一、实验目的

通过对MS培养基母液的配制，学习掌握培养基母液的配制方法。 二、实验原理

在配制培养基时，为了取用方便和用量准确，往往先把各组分按其用量配成扩大一定倍数的浓缩液，即母液，贮存备用，用时稀释。配制母液时，一般按药品的种类和性质分别配制，单独保存或几种混合保存。例如，把所有大量元素一起配成大量元素母液，同理配成微量元素母液，以及植物激素母液等。母液扩大的倍数主要取决于用量的多少，用量大的扩大的倍数宜低，反之则高，但要注意过高浓度和不不恰当的混合会引起沉淀，影响培养效果。

三、实验用品 1. 仪器和试剂

电子天平，磁力加热搅拌器，烧杯，量筒、容量瓶，药匙，称量纸等 2. 培养基

药品按培养基配方准备，激素按需要准备 表1-1 MS培养基母液配制 成分 培养基配方用量（ml/L） 1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 2 每升母液用量/mg 19000 16500 3700 1700 4400 2230 860 620 83 25 2.5 2.5 200 40 50 50 100 10 100 10 母液扩大倍数 每升培养基用量/ml 100 大量元素（母液Ⅰ） KNO3 NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4 CaCl2·2H2O MnSO4·4H2O ZnSO4·7H20 H3BO3 KI Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 甘氨酸 10 配制500ml大量元素母液 19g×0.5=9.5g 16.5g×0.5=8.25g 3.7g×0.5=1.85g 1.7g×0.5=0.85g 4.4g×0.5=2.2g 配制500ml微量元素 2.23×0.5=1.115g 0.86×0.5=0.43g 0.62×0.5=0.31g 0.083×0.5=0.0415g 0.025×0.5=0.0125g 0.0025×0.5=0.00125g 0.0025×0.5=0.00125g 配制50ml有机成分 0.2×0.05=0.01g 0.04×0.05=0.002g 0.05×0.05=0.0025g 0.05×0.05=0.0025g 微量元素（母液II） 有机成分（母液III） 盐酸硫胺素VB1 0.4 盐酸吡哆素VB6 0.5 烟酸VB3 0.5 肌醇 铁盐（母液IV） FeSO4·7H2O 100 27.85 10000 2785 3725 100 10 10g×0.05=0.5g 配制50ml铁盐 2.785×0.05=0.13925g 3.725×0.05=0.18625g Na2-EDTA·2H2O 37.25 四、实验步骤

1. MS大量元素母液的配制

因大量元素用量大，为避免过高浓度的混合液会发生沉淀，一般配成10倍的母液。根据所选MS培养及配方，按大量元素在表1-1中排列顺序，按其10倍用量，用1/1000天平逐个称出，一次加入盛有2/3量蒸馏水的烧杯中，于磁力搅拌器上搅拌（我们不用磁力搅拌器，用玻棒进行搅拌溶解，溶解不了的放到电炉上进行加热，电炉不能开到最大，温度过高有安全隐患）。注意每种试剂溶解后，再加下一种。原则上应把Ca2+与SO42-、PO43-分开，以免产生沉淀，最后加蒸馏水定容至刻度，此即MS大量元素母液，装入试剂瓶，贴上标签，注明名称、扩大倍数、配制日期，配制人置于4℃冰箱中保存。配培养基时，每配1000ml培养基，母液用量为100ml。

2. MS微量元素母液的配制

微量元素因用量小，为称量方便及精确，常配成100倍或1000倍的母液，即将每一种微量元素化合物的量扩大100倍或1000倍，分别称量、溶解、定容、保存，方法同上。配制1000ml培养基，取母液10ml或1ml。本实验配成100倍母液。

3. MS铁盐母液的配制

目前常用的铁盐FeSO4·7H2O和Na2-EDTA的螯合物。这种螯合物比较稳定，不易沉淀，但必须单独配制，常配成100倍的母液。按100倍量称取FeSO4·7H2O和Na2-EDTA，Fe S 04和Na2EDTA应分别加热溶解后再混合，加入盛有2/3蒸馏水的烧杯中，在90℃水浴锅内（或电炉上）加热20-30min，直至颜色呈黄色并变深，使其充分螯合。冷却后定容，装入棕色试剂瓶，贴上标签，注明名称、扩大倍数、配制日期。注意铁盐母液配制后，若立即存放冰箱中，会有结晶析出，因此须在常温下放置一段时间，使其充分反应后，再置入4℃冰箱中保存。每配制1000ml培养基，取10ml母液。

4. MS有机化合物母液的配制

主要指维生素及氨基酸类物质配成100倍母液。按100倍量分别称量、定容、保存，方法同上。配1000ml培养基，取母液10ml。

5. 植物激素母液的配制

各种激素分别用1/10000的电子天平称量，容量瓶定容，通常配成1mg/ml或0.1mg/ml浓度的单一母液。配制培养基时，根据不同的配方要求分别加入所需的量。最常用的植物激

素有：

（1）生长素：2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）等。配制时，先按要求称取用量，置于100ml小烧杯中，慢慢滴加少许0.1mol/L的NaOH溶液，也可用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，并不断搅拌，直至溶解，再用蒸馏水定容至所需浓度。

（2）细胞分裂素：玉米素（ZT），6-苄氨基嘌呤（BAP），激动素（KT）、异戊烯基腺嘌呤（2-ip）。配制时，先按要求称取用量，置于100ml小烧杯中，慢慢滴加少许0.1mol/L的HCl溶液，并不断搅拌，直至溶解，再用蒸馏水定容至所需浓度。

（3）赤霉素类：赤霉素（GA3）配制时先滴加95%酒精溶解，再加蒸馏水定容至所需浓度，因赤霉素加热以分解，需过滤灭菌。

（4）脱落酸：脱落酸（ABA）配制时先滴加95%酒精溶解，再加蒸馏水定容至所需浓度，因脱落酸加热易分解，需过滤灭菌。

（5）配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。

将以上各种激素母液本别装入棕色试剂瓶中，贴好标签，注明母液名称，倍数（或浓度）、日期，放入4℃冰箱中保存。

各种母液在冰箱中通常可保存几周，如出现浑浊或沉淀以及微生物污染，则不宜再用。 五、注意事项

1.脱落酸配制时，由于光照下（尤其是紫外光），2-顺式脱落酸易转变为2-反式脱落酸，从而降低生理活性，所以配制时最好在弱光下进行。

2. 使用电子分析天平时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用吸耳球和天平刷将天平内的脏物清理干净。

六、作业

1. 根据下表中各母液的倍数（或浓度），计算配制不同体积的MS+NAA 0.2mg/L+BAP 2mg/L培养基所需吸取母液的量，并将结果填入下表 试剂名称 MS大量母液 MS微量母液 MS铁盐母液 MS有机母液 NAA母液 BAP母液 母液倍数（或浓度） 10× 100× 50× 100× 1mg/ml 1mg/ml 配制1000ml培养基所需量/ml 配制500ml培养基所需量/ml 配制200ml培养基所需量/ml 七、思考与讨论

1. 在母液的配制、贮存及使用中应注意哪些问题?