科技文苑保健食品中总黄酮的测定 □王栩林 张 景 大连市食品检验所摘 要：本方法针对不同类型保健品采用不同的工艺，优选保健食品中总黄酮的测定方法，采用紫外分光光度计法进行测定，并且针对此方法进行加标回收和精密度验证，加标回收和精密度实验结果较好，方法可行性较好。关键词：保健食品；总黄酮；测定DOI:10.16043/j.cnki.cfs.2016.03.062总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天然产物，广泛分布于蔬菜、水果、牧草和药用植物中，是许多具有保健功效的食物及中草药的有效成分。自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其他包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等［１］。２０世纪６０年代末，人们发现黄酮类化合物有抗炎、抗病毒、利胆、强心、镇静和镇痛等作用。到２０世纪７０年代，又发现它们有抗氧化、抗衰老、免疫调节和抗肿瘤等作用［２］。随着黄酮类化合物保健功效被进一步挖掘，黄酮类化合物以其独有的特性日益成为全世界研究的热点，在医学、食品、保健食品等领域得到广泛的应用［３］。在《保健食品检验与评价技术规范》中，采用的是直接紫外测定法，在测定中需以苯洗脱杂质［４］，但是，苯的毒性很强且用量大，对环境极易造成污染，并对实验者造成伤害。因此本文用乙醚替代苯洗脱杂质，聚酰胺粉吸附，方法简便、准确，分离效果好，回收率高，重现性佳，已成功应用于多种食品和保健食品的检测。1 材料与方法１．１ 仪器紫外可见分光光度计（ＵＶ－２１００） 尤尼柯（上海）仪器有限公司；数字式电热恒温水浴锅 上海乔跃电子科技有限公司；分析天平ＦＡ１００４（万分之一） 上海光学仪器厂；索氏提取器；２５ ｍＬ具塞比色管；滤纸；漏斗。１．２ 试剂乙醇（７０％乙醇） 天津市科密欧化学试剂有限公司；乙醚（分析纯） 天津市科密欧化学试剂有限公司；甲醇（分析纯） 天津市科密欧化学试剂有限公司；聚酰胺粉６０－８０目（试剂级） 郑州勤实科技有限公司；标准品芦丁（９９．９９％） 中国药品生物制品检定所。１．３ 分析步骤试样处理：称取０．５ ｇ（液体样品５ ｍＬ）样品，加乙醇７０％乙醇与６０℃水浴加热６０ ｍｉｎ，取出冷却后定容至２５ ｍＬ（若为软胶囊样品，称取２ ｇ样品与滤纸包，至索氏提取器中，乙醚抽提，至脂肪提尽，弃去乙醚，挥干，用７０％乙醇抽提至溶液为无色，定容至１００ ｍＬ），静置，吸取上清液１．０ ｍＬ，于蒸发皿中，加１ ｇ聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。用甲醇清洗蒸发皿，溶液转入层析柱进行洗脱，洗至大约１００ ｍＬ，定容。此液于波长３６０ ｎｍ测定吸收值。同时以芦丁为标准品，测定标准曲线［５］，求回归方程，计算试样中总黄酮含量。１．４芦丁标准曲线制备芦丁标准溶液：称取５．０ ｍｇ芦丁，加甲醇溶解并定容至１００ ｍＬ，即得５０ ｕｇ／ｍＬ。吸取芦丁标准溶液：０、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０ ｍＬ于１０ ｍＬ比色管中，用甲醇定容至刻度，摇匀，于波长３６０ ｎｍ比色。求回归方程，计算试样中总黄酮含量。2 测定在相同实验条件下测定标准溶液和样品溶液，制作标准曲线，样品中总黄酮的含量按式（１）计算含量。（1）式中：Ｘ—试样中总黄酮的含量，ｍｇ／１００ ｇ；Ａ—由标准曲线算得被测液中黄酮量，ｕｇ；Ｍ—试样质量，ｇ；Ｖ１—测定用试样体积，ｍＬ；Ｖ２—试样定容总体积，ｍＬ。２．１ 结果表示计算结果保留两位有效数字。２．２ 标准曲线按照１．４的方法配制６个梯度的芦丁－甲醇的标准溶液，精密吸取芦丁对照品溶液０、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０ ｍＬ 于１０ ｍＬ 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，测定吸收度。以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，进行线性回归，方程为Ｙ＝０．０３８１Ｘ＋０．００６７，Ｒ２ ＝０．９９９７，在０．０—２５．０ ｕｇ／ｍＬ的浓度范 Jan 2016 CHINA FOOD SAFETY 121Technology科技科技文苑图1 芦丁标准品曲线表1 胶囊状样品总黄酮回收率已知样品目标物含外加标准品标示含量加标测定值量（g/100g）（g/100g)（g/100g)回收率（%）平均回收率（%）1.51.52.9397.73.31.54.6697.14.81.56.1597.697.465.21.56.5197.26.71.58.0197.7表2 片剂状样品总黄酮回收率已知样品目标物外加标准品表示含加标测定值含量（g/100g）量（g/100g)（g/100g)回收率（%）平均回收率（%）1.11.02.0597.61.71.02.5895.62.01.02.8896.095.742.21.02.9993.42.91.03.7596.1表3 口服液样品总黄酮回收率已知样品目标物外加标准品表示含加标测定值含量（mg/L）量（mg/L)（mg/L)回收率（%）平均回收率（%）20.95.025.397.735.65.039.898.050.25.053.797.397.8054.55.058.998.960.25.063.397.1围内线性良好。批次，分别加入一定质量浓度的标准3 加标回收验证溶液，进行回收试验，按１．３的方法分别取已知总黄酮含量的胶囊、处理并按照（１）的方法计算样品总片剂保健品和口服液保健品样品各５黄酮的含量，计算回收率，测得样品122 食品安全导刊 2016年1月的回收率分别为９７．４６％，９５．７４％和９７．８０％，回收率较好。结果详见表１、表２和表３。通过表１、表２和表３的结果可以看出，此方法的加标回收率较好，针对不同类型保健品回收率稳定，方法可行性较高。4 结论本方法将保健品的状态分类，针对不同状态的保健食品在前处理方法上加以改进，获得较好的回收率。该方法操作简便，重现性及稳定性好，线性范围宽，减少了苯对检测人员的危害和对环境的污染，测定结果与《保健食品检验与评价技术规范》所载方法无显著性差异，可广泛应用于保健食品中总黄酮的测定。参考文献：[1]耿敬章,冯君琪.黄酮类化合物的生理功能与应用研究[J].中国食品添加剂,2007(7):19-21.[2]翟晓茹,张红兵,李永东,等．分光光度法测定红花软胶囊中总黄酮的含量[J].北方药学,2015(9):7-8.[3]孔鲁裔.分光光度法测定保健食品中总黄酮[J].生命科学仪器,2009，(2):29-31.[4]中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范[S].2003.[5]陈静,梅广,符昌雨.分光光度法测定总黄酮含量中存在问题的研究[J].食品科技,2007(3):230-232.