※营养卫生 良晶科学 ２００８，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．０９ ５４７ 油菜蜂花粉及其提取物对小鼠免疫功能的影响 孙丽萍１，廖磊ｚ，王大仟２，彭文君 （１．中国农业科学院蜜蜂研究所，北京 １０００９３；２．北京市卫生局临床药学研究所，北京 １０００３５） 摘 要：为观察油菜蜂花粉及其提取物在小鼠体内的免疫调节作用，进行免疫低下小鼠碳廓清实验与小鼠ＤＴＨ 超敏反应实验。结果显示，在碳廓清实验中，花粉组、提取物Ａ、Ｃ、Ｄ组吞噬指数（ａ）较模型组有明显升高 （ｐ＜０．０５与ｐ＜０．０１），其中提取物Ａ的碳廓清指数（Ｋ）较模型组有明显升高（ｐ＜０．０５）。在小鼠ＤＴＨ超敏反应实验中， 花粉及其提取物组各组对小鼠ＤＴＨ超敏反应均有抑制作用（ｐ＜０．０５与ｐ＜０．０１）。本实验说明油菜蜂花粉及其提取物具 有调节免疫功能的作用。 关键词：油菜蜂花粉；花粉提取物；免疫功能 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｒａｐｅ Ｂｅｅ Ｐｏｌｌｅｎ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ Ｉｍｍｕｎｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｃｅ ＳＵＮ Ｌｉ－ｐｉｎｇ ，ＬＩＡＯ Ｌｅｉ ，ＷＡＮＧ Ｄａ—ｑｉａｎ ，ＰＥＮＧ Ｗｅｎ－ｊｕｎ （１．Ｂｅｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｎｇ １０００９３，Ｃｈｉｉｎａ ２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＢｅｉｊｉｎｇ Ｈｅａｌｔｈ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｂｅｉｊｎｇ １０００３５，Ｃｈｉｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｎｖｅｓｔｉｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆｒａｐｅ ｂｅｅ ｐｏｌｌｅｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ ｉｌｎｎｌｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ．ｄｅｌａｙｅｄ－ ｔｙｐｅ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ（ＤＴｎ）ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｈａｔｔ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｈｅｔ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ ｎｄｅｉｘ（ａ）ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｎ ｉｇｒｏｕｐ ｒａｐｅ ｂｅｅ ｐｏｌｌｅｎ ｎｄ ａｅｘｔｒａｃｔ Ａ，Ｃ ｎｄ ａＤ（ｐ＜Ｏ．０５，ｐ＜０．０１），ａｎｄ ｈｅ ｔｃａｒｂｏｎ ｃｌｅａｒａｎｃｅ ｎｄｅｘ（ｉＫ）ａｌｓｏ ｎｃｒｉｅａｓｅｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｎｉ ｇｒｏｕｐ ｅｘｔｒａｃｔ Ａ（ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｉｍｍｅｄｉａｔｅ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｉｔｉｔｖｙ ｉｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ ｒａｐｅ ｂｅｅ ｐｏｌｌｅｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ．Ｔｈｅｓｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｒａｐｅ ｂｅｅ ｐｏｌｌｅｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｈａｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｒａｐｅ ｂｅｅ ｐｏｌｌｅｎ；ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆｒａｐｅ ｂｅｅ ｐｏｌｌｅｎ；ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ 中图分类号：Ｒ２８５．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２．６６３０（２００８）０９．０５４７．０３ 花粉是一种浓缩的、在国际上被称为“完全营养 品”的天然产物，它含有人体必需的蛋白质、核酸、 维生素、矿物质和微量元素等，其所含营养物质全面 而均衡，因而受到人们的重视，并掀起了花粉保健热， 其药食兼用的功能在历代文献中有大量的记载。在现代 所蜜蜂产品研究室；ＳＰＦ级ＩＣＲ小鼠（雄性） 北京维通 利华实验动物技术有限公司。 注射用环磷酰胺 山西普德药业有限公司；２，４．二 硝基氯苯 中国医药公司北京公司；Ｎａ２ＣＯ，（分析纯）、 印度墨汁、丙酮（分析纯）、麻油、生理盐水为市售。 １．２ 仪器与设备 研究中，花粉具有抗疲劳、抗衰老、保肝、提高免 疫力等功效。作为保健食品由于花粉服用剂量大给服用 者带来了不便。因此，本实验尝试利用不同极性溶剂 依次对油菜蜂花粉进行了提取，得到Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、 ＣＥＮＴＲＩＦＵＧＥ ＴＤＬ．５高速离心机上海安亭科学仪 器厂：ＵＶ．２４５０紫外可见分光光度计 日本岛津公司； ＡＡ一２００电子分析天平 美国丹法公司；ＨＦ．２００Ｇ精密 电子天秤 １－３ 方法 Ｅ五个提取部位，并通过免疫低下小鼠碳廓清实验与 ＤＴＨ超敏反应实验初步观察油菜蜂花粉及其各部提取物 对小鼠免疫功能的调节作用。 １ 材料与方法 日本Ａ＆Ｄ公司。 １＿３．１ 剂量选择 油菜蜂花粉１０ｇ／ｋｇ体重，提取物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、 Ｅ均折合为１Ｏｇ花粉／ｋｇ体重。 １．３．２ 给药途径 １．１ 材料与试剂 油菜蜂花粉、油菜蜂花粉提取物 中国农科院蜜蜂 收稿日期：２００８ ０４．２０ 动物按０．２ｍｌ／１０ｇ经口灌胃。 基金项目：国家公益性行业（农业）科研专项经费项Ｅ［（ｎｙｈｙｚｘ０７．０４１） 作者简介：孙丽萍（１９６３一），女，副研究员，研究方向为蜂产品功能因子的分离纯化。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃａａｓｕｎ＠１２６．ｃｏｒｎ ５４８ ２００＆ＶｏＬ ２９，Ｎｏ．０９ 食品科学 ※营养卫生 １．３－３ 小鼠碳廓清实验 将体重在２Ｏ～２２ｇ的雄性ＩＣＲ小鼠，随机分为空白 对照组、模型对照组、阳性对照组和实验组，每组１０ 只。阳性对照药为刺五加片，剂量为０．４ｇ／ｋｇ，实验组 设花粉、提取物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ六个组。每日灌 胃给药１次，连续１ ５ｄ。除空白对照组外，其余各组 分别于给药的第８ｄ和第ｌＯｄ，给每只小鼠腹腔注射环磷 酰胺１００ｍｇ／ｋｇ，造成小鼠免疫低下的模型。于末次给 药１ｈ后，给每只小鼠尾静脉注射印度墨汁０．１ｍｌ／１０ｇ体 重，分别于注射后ｌ、５ｍｉｎ时，经眶丛静脉取血２０ １ａｌ， 溶于０．１％Ｎａ２Ｃ０３溶液中，摇匀，于波长６８０ｒｉｍ处比 色，测定ＯＤ值，作为判定吞噬功能的指标。最后将 小鼠脱颈椎处死，称取肝脏和脾脏的重量。按以下公 式计算碳廓清指数（Ｋ）及吞噬指数（ａ）。 碳廓清指数Ｋ： 吞噬指数 ×Ｋ｛ １．３．４ 小鼠ＤＴＨ超敏反应实验 选用２０～２２ｇ小鼠９Ｏ只，随机分为空白对照组、模 型对照组、地塞米松１．０ｍｇ／ｋｇ组、花粉组、花粉提取 物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ组。每组１ ０只动物。除空白 对照组外，其他动物以１％的２，４．二硝基氯苯丙酮溶液 涂于腹部致敏，致敏同一天开始口服给药，每日一次， 连续１４ｄ。致敏２ｗ后用１％的２，４．二硝基氯苯丙酮溶液 涂于小鼠右耳部进行攻击，２４ｈ后处死动物，用打孔器 取下直径６ｒａｍ耳片，称重，以左右耳重量之差为迟发 型超敏反应值并计算肿胀率和抑制率；同时称取小鼠体 重、胸腺及脾脏重量，计算胸腺指数及脾脏指数作为 观察指标。 １．３．５ 数据统计 以ＳＰＳＳ８．０软件进行ｔ检验比较组间差异。 ２ 结果与分析 ２．１ 对环磷酰胺致免疫低下小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 表１ 油菜蜂花粉及其提取物对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响（ ±ＳＤ） Ｔａｂｌｅ’ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒａｐｅ ｂｅｅ ｐｏｌｌｅｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ（ ±ＳＤ） 注：与空白对照组相比较， ｐ＜０．０１， ｐ＜０．０５；与模型对照组相比 较，“ｐ＜０．０１，‘ｐ＜０．０５。 如表１所示，环磷酰胺使小鼠吞噬指数（ａ）显著降低 （空白组与模型组比较ｐ＜Ｏ．０１），免疫低下模型成立。阳 性对照组使小鼠碳廓清指数（Ｋ）和吞噬指数（ａ）明显提高 （与模型组比较ｐ＜Ｏ．０５与ｐ＜Ｏ．ｏ ｏ，各实验组对碳廓清指 数（Ｋ）和吞噬指数（ａ）都有所提高，其中花粉组、提取物 Ａ、Ｃ、Ｄ组吞噬指数（ａ）较模型组有明显升高（ｐ＜０．０５与 ｐ＜Ｏ．０ １）．提取物Ａ的碳廓清指数（Ｋ）较模型组有明显升 高（ｐ＜Ｏ．０５）。 花粉与其部分提取物能增强免疫低下小鼠的碳廓清 能力，提高小鼠网状内皮系统的吞噬能力，该结果与 文献报道的基本一致【－１。可以初步推断花粉对免疫低下 小鼠免疫功能有一定的增强作用，而提取物Ａ的免疫增 强效果强于花粉，说明其富集了油菜蜂花粉中增强免疫 低下小鼠免疫功能的有效物质。 ２．２ 对小鼠ＤＴＨ超敏反应的影响 表２ 油菜蜂花粉及其提取物对小鼠ＤＴＨ超敏反应的影响 ±ｓＤ） Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒａｐｅ ｂｅｅ ｐｏｌｌｅｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ ＤＴＨ ｉｎｍｉｃｅ（又±ＳＤ） 注：与空白对照组相比较，‘ ｐ＜Ｏ．０１， ｐ＜０．０５；与模型对照组相比 较，”ｐ＜Ｏ．０１， ｐ＜Ｏ．０５。 如表２所示，２，４．二硝基氯苯使小鼠肿胀度和肿胀 率显著增加（空白组与模型组比较Ｐ＜０．ｏ１），模型成立。 阳性对照地塞米松组使小鼠肿胀度和肿胀率显著降低（与 模型组比较Ｐ＜０．０１），实验各组对小鼠耳肿胀度有显著 抑制作用（与模型组比较Ｐ＜０．０５与Ｐ＜０．０１），其中提 取物Ｂ和Ｅ组具有非常显著的抑制作用（与模型组比较 Ｐ＜０．０１１；实验各组除提取物Ｄ组外对小鼠耳肿胀率有 显著抑制作用（与模型组比较Ｐ＜０．０５与Ｐ＜０．ｏ１），其 中提取物Ａ、Ｂ和Ｅ组具有非常显著的抑制作用（与模型 组比较Ｐ＜０．０１）。实验结果表明，花粉及其各提取部 位均对２，４．二硝基氯苯诱导的小鼠迟发型变态反应有明 显的免疫抑制作用，该结果与文献报道相反【：１。各提取 物组的免疫抑制作用均强于花粉组，可以推测花粉中具 有免疫抑制作用的物质是由多类物质组成的，具体成分 有待研究。提取物Ｂ、Ｅ组的肿胀度和肿胀率甚至低于 阳性对照组，说明提取物Ｂ、Ｅ大量富集了花粉中具有 免疫抑制作用的有效物质。 ※营养卫生 垦旦 里 丝 ．注：与空白对照组相比较，‘‘ｐ＜Ｏ．０１， ｐ＜０．０５；与模型对照组相比较，”ｐ＜０．０１， ｐ＜０．０５。 ２．３ 对小鼠免疫器官的影响 油菜蜂花粉及其提取物能够增强免疫低下小鼠巨噬 细胞吞噬功能，抑制小鼠ＤＴＨ超敏反应，说明油菜蜂 花粉具有一定的免疫调节作用。油菜蜂花粉各提取部位 的功效不一，提取物Ａ能显著增强环磷酰胺致免疫低下 小鼠巨噬细胞吞噬功能，其效果优于花粉；提取物Ｂ和 Ｅ能显著抑制小鼠ＤＴＨ超敏反应，其效果优于花粉，甚 至优于阳性对照组。对于油菜蜂花粉及其提取物究竟是 如表３所示，２，４一二硝基氯苯使小鼠脾脏重量显著 增加（空白组与模型组比较ｐ＜０．０５），对胸腺重量、脾指 数和胸腺指数无影响。阳性对照地塞米松组使小鼠脾脏 和胸腺重量显著降低（与模型组比较ｐ＜０．０１），使脾指数 和胸腺指数显著降低（与模型组比较ｐ＜０．０１），甚至低于 空白对照组。各实验组中，花粉和提取物Ｃ、Ｄ使小 鼠脾脏重量、脾指数明显降低ｆ与模型组动物比较ｐ＜０．０５ 与ｐ＜０．０１ ；花粉组、提取物Ａ组使小鼠胸腺重量、胸 哪种成分在调节免疫功能方面发挥着作用，还需要大量 的实验去进一步探讨与验证。 参考文献： 【１】 ［２］ 腺指数明显降低（与模型对照组比较ｐ＜０．０５与ｐ＜０．０１）。 提取物Ａ、Ｂ、Ｅ组动物的脾脏重量和指数及提取物Ｂ、 ｃ、Ｄ、Ｅ组动物的胸腺和重量和指数与空白对照组比 较没有明显差异。该实验结果与文献报道相反【ｚ】。 ３ 结 论 张荣标．油菜蜂花粉对正常小鼠免疫功能的影响 ．实用预防医学， ２００５，１２（１）：４４—４６． 张暾．破壁松花粉对调节免疫功能的影响【Ｊ】．中国医院药学杂志， ２００６，２６（５）：６３８—６３９．