培养基的质量控制

作 业 指 导 书 编号：惠山疾控 1.目的 培养基质量控制规程 版本 / 修改次：1/0 第 1 页 共 6 页 规范本中心微生物实验室培养基的内部质量控制工作。 2．适用范围 适用于实验室微生物培养基使用前的质量验收、使用过程中的质量控制。 3. 职责 3.1 检验人员：按照本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制，确保培养基符合相关标准的要求。 3.2 科室负责人：负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制。 4．使用前的质量控制 4.1生产企业提供的材料 培养基生产厂家随产品应提供下列文件： 培养基、成分、添加成分名称；批号；使用前的pH；储藏信息和有效期；性能评价和所用测试菌株；技术数据清单；质控证书/必要的安全、危害数据。 4.2验收 实验室收到培养基后，应填写“培养基验收检查记录单”，检查包装及完整性，标识是否清晰等，验收合格后按照“培养基编码系统使用规程”对培养基进行编号。 4.3 贮存及使用前质量确认 4.3.1商品化培养基应严格按供应商提供的贮存条件、有效期进行贮存。 4.3.2 验收合格的培养基应建立“商品化干粉培养基目录清单”，使用前对容器密闭性进行复查。 4.3.3开封的脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检查，通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断培养基的质量变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。 4.3.4制备好的成品培养基应建立“ 成品培养基目录清单”，每次使用前应检查：颜色是否发生变化?/是否蒸发/脱水?/是否有微生物生长 ?等。如果发生上述异常情况，则不应再使用。 5．制备好的成品培养基的质量控制 新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，符合要求后使用。 成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写“实验室制备培养基测试结果记录单”。 5.1物理指标控制 5.1.1 测试20℃～25℃的pH值 作 业 指 导 书 编号：HSCDC/GC-76-2009 版本 / 修改次：1/0 第 2 页 共 6 页 惠山疾控 培养基质量控制规程 将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中，每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。 5.2.2.1.1定量方法 生长率PR的计算： PR = NS/NO NS：从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。 N0：从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应≥100cfu ）。 要求：非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.7，该类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.1；每平板（或每试管）的接种水平为10CFU～100CFU。 5.2.2.1.2 半定量方法 半定量方法采用生态测量技术在平板上划线，平板板连续划线区域得分的总和即为生长指数G，G值不应超过标准规定的允许范围。 5.2.2.1.3 定性方法 定性方法采用划线法观察。 5.2.2.2选择性 将浓度为104CFU/mL～106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定值。 5.2.2.2.1定量方法 选择因子SF： SF = DO - DS DO：能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度 DS：能在测试培养基上显示生长的最高稀释度 要求：非目标菌在选择性培养基上的SF至少为2 ；半定量和定量法中，非目标菌应部分或全部被抑制。 5.2.3生理生化特性（选择性和特异性） 规定培养基的基本特性，使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性（菌落形态、大小等）和非目标菌的被抑制程度进行测试。 5.3性能评价和结果解释 按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定，则该批培养基品质优良；若只有物理指标和微生物指标符合规定，则该批培养基可被接收。 表1 计数用选择性培养基 培养基 用途 生长率 Baird- Parker [S] 培养条件 测试菌株 参考培 养基 TSA —— —— TSA —— 控制判定标准 方法 定量 特征反应 37℃金黄色葡萄球菌24-48h ATCC6538/25923 大肠杆菌ATCC25922/8739 表皮葡萄球菌ATCC12228 腊样芽胞杆菌ATCC11778 大肠杆菌黑色/灰色菌落，周围PR≥0.5 为一混浊带，其外有透明带 —— 黑色/灰色菌落，周围为一混浊带，其外无透明带 选择性 37℃48h 特异性 生长率 37℃24-48h 30℃24-48h 定性 全部抑制 定性 定量 —— PR≥0.7 具沉淀带的粉色菌落 —— MYP 选择性 37℃48h 定性 全部抑制 作 业 指 导 书 编号：HSCDC/GC-76-2009 版本 / 修改次：1/0 第 3 页 共 6 页 惠山疾控 培养基质量控制规程 表1计数用选择性培养基(续) 培养基 用途 培养条件 测试菌株 参考培 养基 TSA —— TSA —— —— TSA —— 控制判定标准 方法 定量 PR≥0.5 特征反应 带有或不带沉淀带的粉红色或红色菌落 大肠杆菌VRBG（结ATCC25922/8739 晶紫中性生长率 37℃24h 鼠伤寒沙门菌红胆盐葡ATCC14028 萄糖琼脂） 粪链球菌[S] 选择性 37℃20h ATCC29212/19433 大肠杆菌生长率 30℃20h ATCC25922/8739 VRBL（紫红胆汁乳粪链球菌选择性 30℃20h 糖） ATCC29212/19433 [S] 铜绿假单胞菌特异性 30℃20h ATCC27853 大肠杆菌O157：H7 CT-SMAC生长率 37℃24h ATCC434/435 （改良山梨醇麦康金黄色葡萄球菌选择性 37℃24h 凯琼脂） ATCC6538/25923 [S] 大肠杆菌特异性 37℃24h ATCC11775/25922 大肠杆菌BGBLBATCC25922/8739 （煌绿乳生长率 30℃弗氏柠檬酸杆菌 糖胆盐肉24-48h ATCC25922/8739 汤） 粪链球菌[L] 选择性 ATCC29212/19433 EC [L] 44℃24～生长率 48h 选择性 44℃24～48h 大肠杆菌ATCC25922 铜绿假单胞菌ATCC27853b 大肠杆菌ATCC25922 铜绿假单胞菌ATCC27853b 大肠杆菌ATCC25922 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 大肠杆菌ATCC25922 福氏志贺氏菌CMCC51572 定性 全部抑制 —— 定量 PR≥0.5 带有或不带沉淀带的淡紫色菌落 定性 全部抑制 —— 定性 定量 -- 无色至浅棕色菌落 透明菌落，表面淡黄PR≥0.5 棕色，菌落直径约1mm 定性 全部抑制 —— 定性 —— 粉色菌落 TSA 浊度2+，半定导管1/3产气并浑浊 量 产气 定性 不生长 —— 浊度2+，导气管产气并浑浊 1/3产气 不生长 —— 浊度2+，产气并浑浊，产生荧导气管光 1/3产气 不生长 —— —— —— —— —— —— —— —— —— 半定量 定性 半定量 定性 44℃24～EC-MUG/ 生长率 48h LS-MUG [L] 44℃24～选择性 48h 乳糖胆盐发酵培养 [L] 选择性 37℃24h LST（月桂生长率 37℃24h 酸肉汤） [L] 选择性 37℃24h 培养基 PCA（平板计数琼脂） [S] 生长率 37℃24h 半定导气管产气并变黄色 量 1/3产气 定性 —— 不产气、仍为紫色 半定导气管—— 量 1/3产气 定性 —— 判定标准 PR≥0.7 —— 用途 培养条件 30℃72h 生长率 表2 计数用非选择性培养基 参考培 控制测试菌株 养基 方法 大肠杆菌ATCC25922/8739 金黄色葡萄球菌TSA 定量 ATCC6538 枯草芽孢杆菌ATCC6633 特征反应 ——

作 业 指 导 书 编号：HSCDC/GC-76-2009 版本 / 修改次：1/0 第 4 页 共 6 页 特征反应 粉红至红色菌落，有或没有沉淀带 惠山疾控 培养基质量控制规程 培养基 EE [L] 用途 生长率 选择性 生长率 RVS [L] 选择性 SC(亚硒酸盐胱氨酸) [L] 生长率 选择性 TTB(四硫磺酸钠煌绿增菌液) [L] 生长率 选择性 生长率 碱性蛋白胨水 [L] 7.5%氯化钠肉汤[L] 选择性 生长率 表3 选择性增菌培养基 培养条控制方测试菌株 判定标准 件 法 大肠杆菌ATCC25922/8739 37℃VRBG上＞24h 10CFU 鼠伤寒沙门菌半定量 ATCC14028 粪肠球菌 全部抑制 ATCC29212 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 XLD或其他41.5℃肠炎沙门氏菌选择性培养半定量 24h ATCC13076 基上＞10CFU 铜绿假单胞菌ATCC27853 大肠杆菌TSA上全抑ATCC25922 制 41.5℃半定量 24h 粪链球菌 TSA上＜ATCC29212 10CFU 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 XLD或其他37℃+大肠杆菌选择性培养半定量 24h ATCC25922 基上＞10CFU +铜绿假单胞菌bATCC27853 大肠杆菌ATCC25922 37℃TSA上＜半定量 24h 10CFU 粪链球菌 ATCC29212 鼠伤寒沙门菌XLD或其他ATCC14028 37℃选择性培养24h 基上＞伤寒沙门菌半定量 10CFU CMCC50071 37℃大肠杆菌TSA上＜24h ATCC25922 10CFU 霍乱弧菌TCBS或其他CMCC16109 37℃选择性培养24h 基上＞副溶血性弧菌10CFU CMCC20001 半定量 大肠杆菌ATCC25922/8739 37℃TSA上＜24h 10CFU 福氏志贺氏菌CMCC51572 B-P平板或其37℃金黄色葡萄球菌半定量 他培养基上24h ATCC6538 ＞10CFU 表4 非选择性增菌培养基 培养条件 测试菌株 金黄色葡萄球菌ATCC6538 大肠杆菌ATCC25922 金黄色葡萄球菌ATCC25923

控制方法 定性 定量 判定标准 浊度1～2 +/-50%菌落数/至（+/-50%原始菌落数 —— —— 不同培养基上菌落特征不同（见标准） —— 不同培养基上菌落特征不同（见标准） —— 不同培养基上菌落特征不同（见标准） —— 不同培养基上菌落特征不同（见标准） 培养基 BHI 蛋白胨盐 [L] 用途 特征反应 —— —— 生长率 37℃24h 稀释 20～25℃45min 作 业 指 导 书 编号：HSCDC/GC-76-2009 版本 / 修改次：1/0 第 5 页 共 6 页 判定标准 定性 定性 特征反应 导气管1/3产气 —— 惠山疾控 培养基质量控制规程 培养条件 测试菌株 大肠杆菌ATCC25922 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 铜绿假单胞菌ATCC27853 大肠杆菌ATCC25922 金黄色葡萄球菌ATCC6538 白色念珠菌CMCC98001 白色念珠菌CMCC98001 表4 非选择性增菌培养基（续） 培养基 乳糖蛋白胨肉汤 [L] SCDLP液体培养基 [L] 液体沙氏培养基[L] 真菌培养基[L] 用途 控制方法 —— —— 生长率 37℃24h 选择性 37℃24h 生长率 37℃24h 定性 浊度1～2 —— 生长率 26℃5天 生长率 26℃5天 定性 定性 浊度1～2 浊度1～2 —— —— 表5 选择性分离培养基 培养基 用途 生长率 37℃48h 选择性 培养条件 测试菌株 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 福氏志贺氏菌CMCC51572 大肠杆菌ATCC25922/8739 粪链球菌ATCC29212/19433 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 福氏志贺氏菌CMCC51573 大肠杆菌ATCC25922/8739 粪链球菌ATCC29212/19433 金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923 粪链球菌ATCC29212 霍乱弧菌CMCC16109 副溶血性弧菌CMCC20001 霍乱弧菌CMCC16109 非O1群霍乱弧菌CMCC17045 大肠杆菌ATCC25922/8739 控制方法 判定标准 良好生长(2) 定性 特征反应 菌落呈黑色，有金属光泽 菌落呈棕色 亚硫酸酸铋琼脂（BS） [S] 全部或部分无典型菌落 抑制（0～1） 全部抑制（0） -- 良好生长(2) 菌落呈黑色 菌落呈无色 生长率 XLD [S] 选择性 血琼脂平37℃24～板 生长率 48h [S] TCBS [S] 37℃24～生长率 48h 37℃24～48h 37℃24h 定性 全部或部分无典型菌落 抑制（0～1） 全部抑制（0） -- 定性 定性 定性 定性 定性 定性 定性 良好生长 β溶血，透明溶血环 良好生长 α溶血,草绿色溶血环 良好生长 菌落较大，呈黄色 良好生长 菌落较大，呈绿色 菌落较大、扁平透明、湿润、中心带有黑色 菌落较大、扁平透明、良好生长 湿润、中心带有黑色 全部或部分—— 抑制（0～1） 良好生长 4号琼脂 [S] 生长率 选择性 37℃24h

作 业 指 导 书 编号：HSCDC/GC-76-2009 版本 / 修改次：1/0 第 6 页 共 6 页 特征反应 菌落紫黑色带金属光泽 菌落灰白色半透明 菌落灰白色半透明 斜面及底层均变黄，产气，硫化氢阳性 斜面及底层均变黄，产气，硫化氢阳性 底层变黄，斜面变红，不产气，硫化氢阴性 底层变黄，斜面变红，产气，硫化氢阳性 惠山疾控 培养基质量控制规程 培养条件 测试菌株 表5 选择性分离培养基（续） 培养基 用途 控制方法 判定标准 大肠杆菌定性 良好生长 ATCC25922/8739 伊红美兰鼠伤寒沙门菌琼脂 生长率 37℃24h 定性 良好生长 ATCC14028 [S] 福氏志贺氏菌定性 良好生长 CMCC51573 大肠杆菌定性 良好生长 ATCC25922/8739 普通变形杆菌 定性 良好生长 TSI(三糖CMCC49001 37℃铁琼脂) 生长率 24-48h 福氏志贺氏菌[S] 定性 良好生长 CMCC51573 鼠伤寒沙门菌定性 良好生长 ATCC14028 表6 非选择性分离培养基 培养基 营养琼脂 [S] 用途 培养条件 测试菌株 大肠杆菌ATCC25922 鼠伤寒沙门菌ATCC14028c 小肠耶尔森氏菌ATCC23715 控制方法 判定标准 特征反应 生长率 37℃24h 定性 良好生长(2) -- 5．记录 培养基验收检查记录单 HSCDC/ZJ-19-29A 商品化培养基目录清单 HSCDC/ZJ-19-30A 成品培养基目录清单 HSCDC/ZJ-19-31A 实验室制备培养基测试结果记录单 HSCDC/ZJ-19-33A 6．参考文献 6.1 GB/T27405-2008.实验室质量控制规范 食品微生物检测[S]. 6.2 SN/T1538.1-2005.培养基制备指南 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则[S]. 6.3 SN/T1538.2-2007.培养基制备指南 第2部分：培养基性能测实用指南[S]. 6.4纪绍梅.微生物培养基质控与图解[M].北京:北京科学技术出版社,2006. 更改 编制 审核 批准 日期 日期 日期

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