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光学DNA生物传感器

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维普资讯 http://www.cqvip.com 光电子技术与信息 Opto('.h 1’OlliC Techuology&Inlb1.1Ilatiot1 2(/(/2 Jun:1 5(3) 27 文献编号:1006—1231f20(12)03—0027—04 光学D NA生物传感器 刘超周雪芳 徐远胜 43{107{1) f武汉理工大学信息工程学院 武汉摘 要 概述了当前DNA生物传感器的研究特点以及发展现状'-I1仔在的问题,通过对光学DNA生物传 感器的基本原理和种类详细介绍,结合多学科交叉的特点,对DNA生物传感器的发展前景进行r展望。 关键词DNA,生物传感器,光学 文献标识码:A 中图分类号:TP21 2.3:TP212.14 Opticas DNA Biology Sensors Liu(’JJafJ ZhOll X z sctb ̄Jq Il、 I kU)HII(、¨ (School of hfformation Engineering.Wuhan University of Technology Institute Wuhm1 430070) Abstract l'his papel。1-ms SUrllllled l1I)the 1'0S(2}11。ch ct1 2:1 ratte r。isl;k:()r I)NA I)h)log3 SC11SOF. ̄llC] intt Of]I1C(-Lq the I)t oblems existed in tile(’l1 r1’PlIIt(1( (、loptnetjt.\Vith 1 ll(、I>asic 1)l。in(‘il)l ̄、}LI/d detailed introduction of tile kind fJr tl+1P O1)l I)N i\I)iolog3‘s 圳’.(’()】nbinillg tl1P fr1…1。e of‘111ult,i—field. the cle\ elopment 1 ̄Fend ol。the DNA bio—SO1lf':,Ol。s haS also looked f'o1’\Vkl 1 d 1O in 1:11is 1)kl1)ei’. Key words DNA,biolog3 SeIISOI".optics 1 引 言 1962年,美国电化学分析家Clark[ 】将酶法与 各种电化学传感器结合起来,构成一种新型分析装 鼍“酶电极”(Enzyme electrode),它是发展最早一 不久,但是因为其有很高的实用价值,已引起世界 各国生物传感器学者的高度重视,这一研究内容曾 被列为第二届世界生物传感器学术大会(BIOSEN— SOR’92)的重要专题,但是由于这方面的T作起步 较晚,难度大,还未能取得预期进展而被迫取消。 我国的生物传感器研究开始于20世纪80年代初, 起步虽晚,至今为止也初具规模,随着生物技术发 展,它的应用越来越广泛,将会有越来越多的科研 人员投入这一领域从事研究丁作。 类的生物传感器。至今生物传感器已发展成为现代 生物技术的重要领域之一。21世纪将是生物科学 与计算机科学结合产牛的牛物信息学蓬勃发展的 时代,脱氧核糖核酸(DNA)牛物传感器是分子牛 物学与微电子学、电化学、光学等相结合的产物, 日前,大多数DNA传感器,不论是光学的还足 它将在生命科学与信息科学之间架起一道桥梁,成 为DNA信息分析检测最重要的技术之一。DNA牛 物传感器是获取生物信息的重要手段,近几年发展 十分迅速,显示了十分诱人的发展前景。 电类的,都是建立在DNA杂交的基础上,即DNA 碱基配对和系列互补原理,它I! 1是由固定有已 知的核甘酸序列的单链DNA(亦称之为ssDNA探 针)的电极(探头)和换能器两部分组成,以电化学 DNA生物传感器为例,其原理如图1所示。 固定在传感器电极上的s. ̄DNA探针与待测样 品的靶DNA杂交,形成双链DNA(dsDNA),杂交 2 DNA生物传感器的研究现状 有关基因检测方面的生物传感器研究虽开展 收稿日期: 2001 11 19 修改日期: 20O2~03 O6 维普资讯 http://www.cqvip.com 28 光 电 子 技 术 与 信 息 0ptoc1cctr0I1i(:Technology&Infbrtn ̄tion 反应在传感器电极上直接完成,换能器将杂交过程 所产生的变化转换成电、光、声等物理信号。DNA 3.1光纤DNA生物传感器 光纤DNA生物传感器f ]将ssDNA探针固 ]r-T_G A rGT  fC C_lT探针雌  …一~ GATG. 。。 . ∈ 目标物杂交 : : : : : : : : : : : : : ; : : : : j上J.j.. i1 L..._ij L  i 1|r \一一 :@! :  指示剂键合/ 信号转换 C T A C G G I I ■ ● I l 图1 电化学DNA生物传感器杂交检测原理示意图 Fig.1 ScnemM,ic figm‘e fol‘determination of hybridization by electrocltemical DNA bio一.qelISOI" 分子杂交过程属于生物亲和反应,其检测灵敏度要 求很高,达到pg级。但上述方法只是较好地解决 了特异性问题,在传感器的响应时间和灵敏度方面 却不尽人意。在已报道的DNA传感器中,如:电 化学DNA生物传感器、压电石英晶体DNA生物 传感器等,响应时间大部分在几十分钟到一个小时 以上,它使传感器动态监测的功能大打折扣,提高 DNA传感器的灵敏度,缩短响应时间,成为DNA 传感器研究中待解决的难题。本文就光学DNA传 感器作一扼要介绍,并就其发展趋势作一简单的评 述。 3 光学DNA生物传感器 由于光学的方法具有非破坏性和高灵敏度的 优点,在生物传感器中获得广泛的应用。目前研究 的光学DNA生物传感器主要是利用光波导技术及 消失波原理,当光完全在镜底部发生全内反射时, 产生的消失波渗透溶液介质可达300 111n,使检测 时光吸收达到最大值,从而可以提高分析的灵敏 度。光学DNA生物传感器主要有光纤式、光波导 式、表面等离子谐振(共振)式等类型。 定在tt11 ̄级光导纤维的末端上,然后将若干条固 定有ssDNA探针的光导纤维合成一束,形成一个 微阵列的传感器装置,光纤的另一端通过一个特制 的耦合装 耦合到荧光显微镜中。测量时将固定有 ssDNA探针的光纤一端浸入到荧光标记的靶DNA 溶液中与靶DNA杂交。通过光纤传导,来自荧光显 微镜的激光激发荧光标记物产生荧光,所产生的荧 光信号仍经过光纤返回到荧光显微镜中,由CCD 相机接收,获得DNA杂交的图谱。 采用该原理设计的DNA生物传感器是将杂交 分子中的探针标记物经牛化反应产生的特征光学 信号(荧光,颜色变化等),其特点为:检测杂交反 应后产生的特征光信号,选择性强,易于排除杂交 过程中非特异性吸附的干扰,测定准确,若不采用 放射性同位素标记探针,安全性好。但是其不足之 处在于选择的发光信号较弱,检测灵敏度低,有待 进一步研究和完善。 3.2光波导DNA生物传感器 光波导DNA生物传感器 是在光波导载波 片表面制成ssDNA探针阵列,将光波导载波片与 另一片载波片叠加在一起,中间形成175 Itn 厚、 2.54 CD-]宽的通道。在此通道中含有生物素标记的 DNA和抗牛物素一一硒结合物的溶液与ssDNA探 针杂交,抗生物素与生物素结合,使硒粒子聚焦在 光波导载波片表面ssDNA探针的杂交部位上。以 灯光经狭缝照射光波导边缘,光线在波导内以全反 射方式传播,在溶液中距波导载波片表面1 00—300 111n形成的隐失波场中产牛散射。利用CCD相机可 记录下散射光信号的图样,经计算机分析处理,可 获得DNA杂交的图谱。 采用该原理设计的DNA生物传感器由于对技 术要求很高,现仍然处于实验室的研究阶段,而且 相对于光纤来说,它的实用价值较差。 3.3表面等离子体谐振DNA生物传感器 表面等离子体基元共振(SPR)的基本原理是 基于金属膜表面待测物质折射率的变化,一般在棱 镜上被覆盖一层金属银或金的薄膜,与另一种折射 率的介质相接触,经P偏振处理的光线照射进入 棱镜,在金属一棱镜界面形成反射。在某一角度(共 振角)测定时,反射光强度最小。共振角对紧靠金 属膜外侧的介质折射率的变化非常灵敏。当金属膜 维普资讯 http://www.cqvip.com 光 电 子技 术 与信 息 0pt0 tmnic Technology&Inibl nlation 201)2 Jun:15(3) 29 表面固定的DNA单链探针与溶液中其相互补体结 合时则会引起折射率的改变,折射率上升,从而导 致谐振角改变,用光波导将折射率的变化传输给检 测器可进行检测[& ̄ 。它的检测方法有两种:一是 临床医学和遗传工程的研究具有深远的意义和应 用价值,光学DNA生物传感器仍然有大量的工作 需要进行[14 ̄22],今后光学DNA生物传感器的研 究将集中在以下几个方面: SPR扫描,是改变入射角度,测定反射光强度与入 射角的关系,如Bier[加]等,以avidin—biotin法固定 DNA探针,通过比较发现在共振角处,可配对的 碱基个数越多,共振信号就越强,反射光强度则越 小。另一种检测方法为SPR显微镜,是将入射角 固定在共振角附近,用电荷耦合阵列检测器(CCD) (1)扩大光学DNA生物传感器的研究领域以 及应用,利用酶和抗原体的特性,将酶生物传感 器和免疫生物传感器与光学DNA生物传感器相结 合,将DNA生物传感器广泛用于计算机辅助药物 设计(CADD),为我国的药物发展起到很好的引导 作用; 检测反射光强与样品不同部位的关系。Corn等『¨] 研究表明,此方式可区分单双链DNA,并有可能 进行突变识别。 采用该原理制作的DNA生物传感器检测出灵 敏度达10 fmol/nnn ,Ⅱ向应时间小于5 rain[ ]。但 是该方法的选择性较差,难于排除非特异性吸附的 干扰,而且仪器的成本昂贵。 综合比较上述三种光学DNA生物传感器,我 们会发现DNA生物传感器的设计涉及到两个关键 技术f13]:一是有效地将DNA探针固定在固体基 质表面,二是在传感器一液相界面对于靶基因的测 定技术。虽然上述三种传感器的理论分析、器件研 制和实用系统开发已日趋完善,并且它们以其较好 的灵敏度、较好的实时响应特性引起了科研人员和 商业机构的广泛重视,但是现在新技术科学的日新 月异,尤其是学科界限的跨越,就目前的发展状况 是不能满足广大用户和商业的需求的,于是必须开 发出新的产品来完善以前产品的不足之处。 4 展 望 21世纪是竞争的时代,光纤的普及给传感器 的市场也带来激烈的竞争机制和变化。从光纤传感 器技术角度考虑,当前研究的重点问题是:(1)传 感系统对各种参数(如:温度、压力、损伤情况等) 的分布测量;(2)多参数测量,即用同一个光纤传 感器测量不同的参数;(3)单根光纤单端测量;(4) 采用光电集成,向 一根光纤一块芯片”的结构发 展;f5解决光纤在复合材料入口、出口处的接口 5)问题。 随着学科发展和学科间的相互渗透,光学 DNA生物传感器将成为生物光学的一个非常有生 命力的研究领域,它开辟了分子生物学与光学的新 领域,为生命科学的研究提供了一种新的方法,对 (2)提高对杂交指示剂的筛选研究,尽量找到 新材料中一种高灵敏度高选择性的指示剂; (3)由于固定技术影晌着传感器的灵敏度及使 用寿命,要加强单链DNA在电极表面的固定化研 究。它涉及到两个方面:一是将感受器如金属电 极、光纤等表面修饰,使其带上各种需要的活性基 因如羟基、氨基等,以便与DNA探针结合,二是核 苷酸的衍生,使其带上合适的功能团,以利于DNA 在表面的固定及后续的检测; (4)加强光学DNA生物传感器在临床基因诊 断上的研究,对于疑难疾病的诊断和治理提供帮 助,抗癌药物在DNA修饰电极上的光学机理研 究,简化抗癌药物的筛选; (5)充分利用光纤的优点,特别是对于SPR型 光学传感器的研究,使之朝微型化、多组分、多元 化发展,目前光栅型SPR.传感器能够实现对衰减 场的直接测量,衰减场的变化对于SPR的分析是 卜分有益的,尤其是波长 制型的SPR 传感器它 不容易受外界的干扰,但足由于费用的昂贵而没有 得到广泛的应用,为此,我们有可能为开发成功一 种性能价格比合理的SPR 传感器而提供最佳的设 计方案。 参考文献 Clough R L.Sltalaby S W.Radiation effect OI1 polymers{R).Wmdtiugtou:ACS Symposium Se— ties.D ACS 1 991.475 中华基因网.基因芯片技术(z).http://WWW. chinagenenet COlll/tech/dnachip/index.php.2000 09 14 高志贤,晁福寰.DNA生物传感器及其研究进 展(J).生物技术通讯,2000,11(1):45 ̄53 维普资讯 http://www.cqvip.com 30 电子技术与信息 ()l >t,oc,le.ctronic Technology&hfformat,iol1 2(1(12 Jun:15(31 1 3 张先恩.生物传感技术原理与应用(M).长春:吉 林科学技术出版社,1990.6 1 4 Olson J D ct a1.Polymers for bi()dcgrada}】lc reed— i(:al【]CVi(H?S VI.Hyd roxybutyr atie—hydroxywderate copolylners:Accelerated degradltion of blends 4 赵湛,崔大付.基因传感器(J).电子产品世界, 2000.(8):63 ̄65 周建军.生物芯片(J).国外医学分子生物手册, 21)1)(1.22f 1 1:5~9 ’ Ferguson J A.Boles T C.Adall18 C P ct a1.A fber—optic DNA biosensor lilicr(>arr ̄Ly(br the with polysacc]lari tcs(J1.Mol Cell Probes.1991. 5(51:351 1 5 Ewms A G et a1.Preliminary studies()II the dc— analysis of ge1l expressiou(J).NI ̄f,Biot ̄:('11no1. 1 996.14(1 31:1 681—1684 f 张天浩,张春平,张光寅.DNA芯片制作原 sign of alL  extr a ̄corporeal bioartificbfl liver snp— 理及其杂_交信号检测方‘法(J).生物T程进展, 2000.20(2):64 ̄68 8 pm t device with tissue('.itgiiteering tcchnology(A1. Biosensor‘91).1 990.223 Wang_1.Cal X H.Riw ̄s G et a/.Stripping poten— tiomnetric transduction of DNA hybrizatiou pro— 1 6 Tsacoyeanes J G.Microencapsnlated islets£ bioartificiM endocrine palterea ̄s(-1).Proc SPIF,Soc Opt Eng.1 990.1307:30 cess(J1.Aeta.1996.326:141一】44 9 Rodda C E.Furlong D N.Haring V.Fabrlca— tlon of controlled relea.se biodegrad—able foams 1 7 Watts H J.Yeung D.Parkes H.Re,'d—time de<-tlon and quantiicatifon of DNA hybridiza— by phase separationf-11.Scllsors ml r7 A<:tuato1’ 】=i. 1 997.41:189—1 97 10 tiou by a21 optical blosensorfJ1.A1laJ Chell1. 1 995.67:4283—4289 Bier F F.Kleinjang F.Scheller F W.Prcpara— 1 8 Kai E.Sawld,a S.1ke1)ukuro K et,a1.Detec— tloa of’PCR produ(:ts in SO]llt.ion using Hl1r— tlon of poly(glycolie acid)bonded fibre.st,rll(-14lres face using p] ̄LqlttOlt r(! ()lLmL(’(!fJ1,Anal CI)em. for celt attachment and transplantati()Il(J).Sen— sots and ActHittors R.1 997.38:78—82 11 1 999.71 f41:796 ̄799 许丹科.分子自组装核酸传感技术(D).北京:军 事医学科学院,博士后研究工作报告,1 999 Niikm・a K.Matsuiitl H.Okah}扎a Y.Direct illOi[一 itorlng of DNA polymer&se chain reacti(mqnartz crystal ll1icr0ha1an(:cfJ1..1ain 1 998.120:8537~8540 20 庞代文,齐义鹏, 21 赵杰,景宗礼等.DNA的电化学研 究(J).化学研究,1 994.(2):1 阳,韩泾鸿等.SPR生物化学量检 12 ()n a SfJf’. 测系统(-1).仪器仪表与传感器, 1 996.(3):37 22 陈裕泉,李光.现代传感器技术(M).杭州:浙 ,Ⅲ江大学出版社,1 995 作者简介 刘 超 (1 976~),男,武汉理工大学通信学院在读硕士生,主要的研究方向为光纤通信。 用雪芳 (1 976),女,武汉理工大学通信学院硕士牛,主要的研究力 向为光纤通信及光纤传感器。 ★ 信 I口 ,D~ ★ 自 液态介质成为光学二极管 印度RAMAN研究所的科学家们采用在胶态悬浮物 中的荧光染料设计出r一种光学元件,它可在一个方向上 传输某一波长的光并阻止光线在反方向上传输,因而形同 一着将它水平放置并由一个线聚焦的、倍频脉冲Nd:YAG激 光器。尽管染料从毛细管的A、B两端(A端有低的染 料浓度)的两个方向发射光,但是A端只发射峰值为588 11111.的黄色波长光,而B端只发射峰值为608 11111的红色 波长光。因此,该器件形如一个二极管,改变微粒的浓度 就可调谐,并且可提供一个制造固态的、具有很多实际应 用的指数梯度增益介质的方法。 (匡 梅) 个光学二极管。该器件由10 c1n长、直径1 00 U,m的玻 璃毛细管构成,其中充满_r酒精和聚苯乙烯微粒的胶态悬 浮物(折射率为1.59,直径为0.21 ll,m)。一滴染料分子 从毛细管的一端注入以产生沿毛细管长度的浓度梯度,接 

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