酒石酸亚铁法测定茶多酚

方法一：酒石酸亚铁法测定茶多酚

1.适用范围：茶叶、茶粉及其制品，茶饮料等。

2.原理：

在茶叶水浸出物中与亚铁离子产生络合反应的酚性化合物，均称茶多酚。茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物，可用分光光度法测定其含量。

3.试剂：

所用试剂应为分析纯，水为蒸馏水或去离子水。

3.1酒石酸亚铁溶液：称取1g（准确至0.0001）硫酸亚铁，5g酒石酸钾钠（准确至0.0001），用水溶解并定容至1L（低温保存，有效期10天）。

3.2 PH7.5磷酸缓冲溶液：

3.2.1 1/15M磷酸氢二钠：称取23.9g十二水磷酸氢二钠，加水溶解后定容至1L。

3.2.2 1/15M磷酸氢钾：称取经110℃烘干2小时的磷酸二氢钾9.08g，加水溶解后定容至1L。

取上述1/15M的磷酸氢二钠溶液85ml和1/15M的磷酸二氢钾15ml混合均匀。

4.仪器及用具：

4.1分光光度计

4.2磨碎机：由不吸收水分的材料制成；死角尽可能小，易于清扫；使磨碎样品能完全通过孔径600~1000um的筛子。

5.操作步骤：

5.1茶叶：

5.1.1试样的制备：（紧压茶以外的各类茶）先用磨碎机将少量试样磨碎，弃去，再磨碎其余部分。如果水分含量太高，不能磨到2.2所规定的细度，必须将样品预先干燥（烘箱不超过100℃为宜）。待试样冷却后（置干燥器内），再进行磨碎。

5.1.2试液的制备：

（1）称取3g（准确至0.001g）磨碎试样于500ml锥形瓶中。

（2）加沸蒸馏水450ml，立即移入沸水浴中，浸提45min。若水浴无振动装置则每隔10min摇动一次。

（3）浸提完毕后，冷却后（自然冷却或于自来水流下冷却）将样液转移到500ml容量瓶内，并定容至刻度。

（4）定容后立即常压过滤，弃去初滤液（5ml以上），收集滤液备用。（所用滤纸为杭州新华纸业有限公司，双圈牌，定量，慢速滤纸）。

5.2茶粉：茶粉试液的制备：称取一定量的样品，用沸蒸馏水450ml冲泡，冷却后用蒸馏水稀释定容至500ml。

5.3茶饮料、茶汁：

5.3.1较透明的样液，如果味茶饮料：将样液充分摇匀后，备用。

5.3.2较浑浊的样液，如果汁茶饮料：称取充分混匀的样液25ml于50ml容量瓶中，加入95%乙醇（C2H2OH）15ml，充分摇匀，放置15min后，用水定容至刻度。用慢速定量滤纸过滤，滤液备用。

5.3.3含碳酸气的样液：量取充分混匀的样液100ml于250ml烧杯中，称取其总质量，然后置于电炉上加热至沸腾，在微沸状态下加热10min，将二氧化碳气排除。冷却后，用水补足原来的质量。摇匀后，备用。

5.4测定：

5.4.1用20ml移液管精确量取20ml待测样品至100ml定量瓶中，加入蒸馏水（或RO水）稀释定容至100ml，充分振荡混匀。

5.4.2于25ml容量瓶内吸取5ml稀释液。对于5ml移液操作，请使用5ml定量加样器（即移液）进行精确操作；若没有定量加样器方采用5ml移液管进行精确操作。

5.4.3 加酒石酸亚铁溶液5ml，充分混合，再加PH7.5缓冲液至刻度，摇匀。

5.4.4用10mm比色杯，在波长0nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A1）。

（试剂空白溶液为：5ml蒸馏水（或RO）水+5ml酒石酸亚铁溶液+磷酸缓冲液定容至25ml）

5.4.5同时移取等量的试液于25ml容量瓶中，用PH7.5磷酸缓冲液定容至刻度，测定其吸光度（A2）。

（试剂空白溶液为：5ml蒸馏水（或RO）水+磷酸缓冲液定容至25ml）

6.结果计算：

6.1茶叶及茶粉中茶多酚的含量，以干态质量百分率表示，按下式计算：

式中：A1—试液显色后的吸光度；

L1—试液的总量， ml ；

L2—测定时的用液量， ml ；

M—试样的质量，g；

m—试样干物质含量百分率，%；

1.957—用1cm比色杯，当吸光度等于0.5时，每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。

6.2饮料中茶多酚含量按下式计算：

式中：A1—试液显色后的吸光度；

A2—试液底色的吸光度；

K—稀释倍数；

L—测定时吸取试液的体积， ml ；

1.957—用1cm比色杯，当吸光度等于0.5时，每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。

7.重复性：

7.1茶叶等同一样品的两次测定值之差，每100g试样不得超过0.5g。

7.2茶饮料等同一样品的两次测定值之差，不得超过平均值的5.0%。

8.备注：

8.1酒石酸亚铁溶液应妥善保存，若有沉淀或颜色发生变化等，应重新配制。

8.2 1.957是一个经验值，故各个操作步骤应严格要求。

8.3整个实验过程控制在3小时之内。

9.参考资料：

GB/T 8302-2002《茶 取样》

GB/T 8303-2002《茶 磨碎试样的制备及其干物质含量的测定》

GB/T 8313-2002《茶 茶多酚测定》

GB 2499—200《茶饮料行业标准》