应用尖孢镰刀菌培养滤液室内鉴定香石竹品种抗病性初探

应用尖孢镰刀菌培养滤液室内鉴定香石竹品种抗病性初探

彭绿春,杨秀梅,苏艳,瞿素萍

1

1

1

1*

,王丽花,陆琳

12

(1.云南省农业科学院花卉研究所、农业部花卉产品质量监督检验测试中心,云南昆明650205;2.云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所,云南昆明650223)

摘要:采用香石竹尖孢镰刀菌培养滤液,在瓶内对8个香石竹品种的组培苗进行了镰刀菌枯萎病抗性鉴定,结果鉴定

出高抗品种1个,中抗品种4个,中感品种2个,高感品种1个;初步建立起香石竹品种对镰刀菌枯萎病抗性的室内鉴定方法。

关键词:尖孢镰刀菌;香石竹品种;室内抗病性鉴定

中图分类号:S861.5文献标识码:A文章编号:1001-8581(2011)01-0106-02

APreliminaryStudyonAsepticIdentificationofResistanceofCarnationVarietiesto

ToxinFiltratefromFusariumoxysporumf.sp.diathi

PENGLu-chun1,YANGXiu-me1i,SUYan1,QUSu-ping1*,WANGLi-hua1,LULin2

(1.FlowerResearchInstitute,YunnanAcademyofAgriculturalSciences;SupervisionandTestingCentreforFlowers,MinistryofAgriculture,Kunming650205,China;2.InstituteofQualityStandardandTestingTechnology,YunnanAcademyofAgriculturalSciences,Kunming650223,China)

Abstract:TheresistanceofeightcarnationvarietiestothetoxinfiltratefromFusariumoxysporum.fsp.diathiwasdeterminedwithasepticseedlingsforthefirsttime.Theresultshowedtherewereonehighlyresistantvariety,fourmoderatelyresistantvarieties,twomoderatelysusceptiblevarieties,andonehighlysusceptiblevariety.Inaddition,weestablishedamethodtoidentifytheresistanceofcarnationvarietytotoxinfiltratefromF.oxysporum.fsp.diathiwithasepticseedling.

Keywords:F.oxysporum;Carnationvariety;Resistanceidentificationwithasepticseedling

香石竹镰刀菌枯萎病是由尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum.fsp.diathi)侵染所致的土传病害,在全世界所有香石竹生产区均有分布。该病在我国各香石竹生产区普遍发生,危害较重,防治困难,造成了严重的经济损失。应用抗病品种和选育抗病品种是控制香石竹镰刀菌枯萎病的首选措施,但常规的抗性鉴定费时费工,易受环境条件的影响。在前人研究尖孢镰刀菌产毒条件

[1]

每瓶接8片,置于摇床上,在光照、室温下振荡培养26~29d。培养滤液先用4层纱布过滤,再用两层滤纸过滤,滤液以3000r/min的转速离心30min;弃去沉淀,上清液煮沸15min后,作为毒素原液保存于4待用

[3][1]

冰箱中

。

分别配制毒素浓度(毒素原液

1.2.2鉴定浓度的筛选

的基础

与培养基体积比)为0%、20%、40%、60%的香石竹繁殖培养基:MS+BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L,pH5.8,高压灭菌15min;以香石竹品种Master!和红云2号!为材料,将其切至1~1.5cm高,接入培养基中,每瓶接15棵,每个浓度5瓶。1.2.3不同品种的抗性鉴定

配制适宜毒素浓度的香

上,笔者首次应用尖孢镰刀菌培养滤液,对8个香石竹品种的组培苗进行了瓶内抗病性鉴定,旨在探索出一套快速、简便鉴定抗性的方法,以缩短选育抗病品种的周期。

1材料与方法

1.1试验材料

供试的8个香石竹品种来自云南省农

业科学院花卉所质检中心组培室,为生长正常、长势一致、无污染的组培瓶苗。

病原菌为从香石竹枯萎病株上分离得到的尖孢镰刀菌致病菌株,并用王继华等1.2试验方法

1.2.1毒素滤液的制备上,于25

菌株移接在PSA平板培养基

下培养1周,沿菌落边缘打出直径为8mm的

[2]

石竹繁殖培养基,将8个香石竹品种的组培苗切至1~1.5cm高,接入培养基中,每瓶接15棵,每个品种5瓶。每个品种设1瓶对照,对照培养基里不添加毒素滤液。1.2.4

病情调查及抗性分级标准

接种后,观察记录

(病级苗数

的方法经PCR鉴定和常

发病情况,并于1周后统计。病情分级标准见表1。病情指数的计算公式为:病情指数(%)=[病级)/(苗数总和

发病最重级)]

100。抗性等级按

规培养技术鉴定,于马铃薯(PSA)培养基上保存待用。

样本的平均病情指数进行划分,划分标准为:高抗(HR)#40,中抗(MR)40.1~60.0,中感(MS)60.1~80.0,高感(HS)

80.0。

菌饼,接入装有200mL查氏培养液的500mL三角瓶内,

收稿日期:2010-11-10作者简介:彭绿春(1981

),女,硕士,主要从事花卉质量控制与植物繁育技术研究。*通讯作者:瞿素萍。

1期彭绿春等:应用尖孢镰刀菌培养滤液室内鉴定香石竹品种抗病性初探

表1病情分级标准

107

养滤液在室内鉴定香石竹品种对枯萎病的抗性是可行的。鉴于本试验只处于初探阶段,以后还应增加供试品种,并结合田间鉴定,来优化完善室内鉴定技术体系。

表2

品种Dallas小白菜YellowLiberty210162红云2号

等级012345

不发病(与对照相同)。

发病情况

基部切口到第1轮叶片下枯黄。

基部切口到第1轮叶片枯黄,叶片病部不超过1/4。基部切口到第1轮叶片枯黄,叶片病部超过1/4。

基部切口到第2轮叶片枯黄,第2轮叶片病部不超过1/4。基部切口到第2轮叶片枯黄,叶片病部超过1/4。

8个香石竹品种对镰刀菌枯萎病抗性鉴定结果

病情指数37444753576871抗性HRMRMRMRMRMSMS2结果与分析

2.1香石竹组培苗室内抗性鉴定的适宜毒素浓度

接

种1周后,2个香石竹品种组培苗在不同毒素浓度处理RedcorseMaster-07的培养基中,均表现出从茎基部切口处向上枯萎、叶片枯萎白化等损伤,株高明显低于对照,并随着毒素浓度提高,损伤加重。在毒素浓度为60%的培养基中,苗完全受损,枯萎和白化从苗基部蔓延至中上部;当毒素浓度为40%时,苗受损程度和数量约为50%;当毒素浓度为20%时,苗受损程度和数量少于20%。借鉴辐射诱变育种和抗性筛选中的半致死剂量和浓度的原则[4,5]

,可见

40%为香石竹组培苗室内抗性鉴定的适宜毒素浓度。

2.2

8个香石竹品种对镰刀菌毒素的抗性

接种2d后

可见香石竹组培苗插于培养基内的茎基部出现干瘪枯萎,随培养天数增加,枯萎向上蔓延至茎中上部及叶片,不同品种表现出了不同的受伤程度。接种1周后统计发病情况,抗性鉴定结果(见表2)表明:Dallas!的病情指数是37,为高抗品种。小白菜!、YellowLiberty!、210162!和红云2号!的病情指数在40~60之间,为中抗品种。RedCorse!和Master-07!的病情指数在60~80之间,为中感品种。Master!的病情指数为81,为高感品种。

3结论与讨论

在本试验中,同一品种在不同毒素浓度的培养基中,受损程度不同,随毒素浓度提高,受损加重;不同品种在同一毒素浓度的培养基中受损程度也不同,其中,Dallas、YellowLiberty、Redcorse、Master的鉴定结果与王继华等

[5]

进行的田间鉴定结果一致,初步说明用镰刀菌培

(上接第105页)

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[9]PurcellMF,VanNieuwenhovenA,BatchelorMA.Bionomicsof

Tetrastichusgiffardianus(Hymenoptera:Eulophidae):anen

Master

81

HS

此前国内外关于此方面的研究,大多是先提取镰刀菌粗毒素,再用固体粗毒素配制一定浓度的毒素溶液进行抗性鉴定。由于提取粗毒素比较费时,且产量低,每次提取需要的培养滤液量大,因此本研究对前人的方法稍作改进,省去了镰刀菌粗毒素的提取这一步,首次直接用培养滤液作为毒素原液进行鉴定。当然,两种方法各有优势,粗毒素法虽然比较费时,工作量大,但固体粗毒素能保存的时间长,稳定,体积小,易保存;培养滤液法省时、省力,但保存时间短。我们可以根据实际需要来选择不同的方法。参考文献:

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