宁夏医学杂志２０１６年１１月第３８卷第１１期Ｎｉｎｇｘｉａ Ｍｅｄ Ｊ，Ｎｏｖ．２０１６，Ｖｏｌ ３８，Ｎｏ．１１ Ｄｏｉ：１０．１３６２１／ｊ．１００１—５９４９．２０１６．１１．０９７７ ・论 著・ 耳聋基因检测在诊断迟发型 遗传性耳聋中的临床应用 李莉，黄春艳，康银兰，马晓曼 ［摘要］ 目的 利用基因检测技术筛查迟发型遗传性耳聋患者，给予指导、干预以提高后期生活质量。 方法对健康体检儿童采集外周血血片，采用四引物扩增受阻突变体系ＰＣＲ（ＡＲＭＡ—ＰＣＲ）的方法，检测中国人群 高突变频率耳聋基因位点，根据检测结果给予遗传咨询和预后、干预指导。结果检测出ＧＪＢ２基因２３５ ｄｅｃＣ携带 者８例；ＳＬＣ２６Ａ４基因ＩＶＳ７—２ Ａ＞Ｇ携带者７例；线粒体１２ｓ ｒＲＮＡ １５５５ Ａ＞Ｇ纯合突变１例。结论耳聋基因检 测可应用于听力筛查，弥补传统听力筛查的漏洞，检出携带耳聋突变基因的高危人群，给予合理指导及干预。 ［关键词］ 基因；迟发型耳聋；遗传性耳聋；非综合征性耳聋 ［中图分类号］Ｒ７６４．４３ ［文献标识码］Ａ Ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅａｆｎｅｓｓ ｇｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｔｅ ｏｎｓｅｔ ｔｙｐｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｅａｆｎｅｓｓ Ｌ／，ＨＵＡＮＧ Ｃｈｕｎｙａｎ，ＫＡＮＧ Ｙｉｎｌａｎ，ＭＡ Ｘｉａｏｍａｎ．Ｙｉｎｃｈｕａｎ Ｍａｔｅｒｎａｆ ａｎｄ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｒｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｙｉｎｃｈｕａｎ ７５０００１，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｓｃｒｅｅｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｌａｔｅ ｏｎｓｅｔ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｄｅａｆｎｅｓｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇＵｓｅ ｔｈｅｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｅｓｔ，ａｎｄ ｔｏ ｍａｋｅ ｇｕｉｄａｎｃｅ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｌａｔｅ ｌｉｆｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｈｅａｌｔｈｙ ｃｈｅｃｋ—ｕｐ ｃｈｉｌ・ ｄｒｅｎ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ，ｕｓｉｎｇ ｆｏｕｒ ｐｒｉｍｅｒｓ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂｌｏｃｋｅｄ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（ＡＲＭＡ—ＰＣＲ）ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｌｏｃｕｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｐｅｏｐｌｅ ｈｉｇｈ ｍｕｔａｔｉｏｎ￣ｅｑｕｅｎｃｙ ｄｅａｆｎｅｓｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｐｅｏｐｌｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ８ ｃａｓｅｓ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｉｅｄ ＧＪＢ２ ｇｅｎｅ ２３５ ｄｅｃＣ，７ ｃａｓｅｓ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｉｅｄ ＳＬＣ２６Ａ４ ｇｅｎｅ ＩＶＳ７—２ Ａ＞Ｇ，ｏｎｅ ｃａｓｅ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ １２ｓ ｒＲＮＡ １５５５ Ａ＞Ｇ ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ ｍｕｔａ－ ｔｉｏｎｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｄｅａｆｎｅｓｓ ｇｅｎｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｈｅａｒｉｎｇ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ｉｔ ｍａｋｅｓ ｕｐ ｆｏｒ ｔｈｅ ｌｏｏｐｈｏｌｅｓ ｉｎ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｈｅａｒｉｎｇ ｓｃｒｅｅｎ・ ｉｎｇ，ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｒｉｓｋ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄｅａｆｎｅｓｓ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｇｅｎｅ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ，ａｎｄ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ ｇｕｉｄａｎｃｅ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ Ｇｅｎｅ；Ｄｅｌａｙｅｄ ｔｙｐｅ ｄｅａｆｎｅｓｓ；Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｈｅａｒｉｎｇ ｌｏｓｓ；Ｎｏｎ—ｓｙｎｄｒｏｍｉｃ ｈｅａｒｉｎｇ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ 耳聋是全球重大的公共卫生问题，中重度以上 １资料与方法 听力损失人群达７亿以上，其中耳聋患者近３．６ １．１ 一般资料：２０１５年６月一２０１６年３月在银川 亿…。据统计，在我国听力残疾人群约为２ ７８０万，７ 市妇幼保健院健康体检的０～１０岁儿童。结合新生 岁以下聋儿达８０万；每年约有２ ０００万新生儿出生， 儿听力筛查及影像学检查结果，排除外耳、中耳畸形 其中耳聋患者约２．３万，发病率约为１％ｏ ｊ。耳聋患 及其他影响听力的疾病。 者约一半与遗传因素有关 Ｉ６ Ｊ。耳聋的发生受环境 １．２ 方法 和遗传因素的影响，据２００５年ＷＨＯ数据显示，环境 １．２．１ 血样采集：采集末梢血制成干血片，采用人 因素占４０％，遗传因素占６０％，遗传性耳聋包括综 基因组提取试剂盒提取基因组ＤＮＡ。 合征性耳聋和非综合征性耳聋（ＮＳＨＩ）。非综合征 １．２．２目的ＤＮＡ片段扩增：采用北京中生北控生 性耳聋多为中重度、甚至极重度感音神经性聋，耳聋 物有限公司的四引物特异性扩增方法扩增目的ＤＮＡ 是其唯一症状，占遗传性耳聋的７０％【卜副；遗传方式 片段（ＡＲＭＡ—ＰＣＲ）。电泳分离目的ＤＮＡ片段。凝 多样，其中常染色体隐性遗传占７７％，常染色体显性 胶成像仪读取基因型。 遗传占２２％，Ｘ连锁遗传占１％，线粒体遗传＜ １．２．３测序验证：ＡＲＭＡ—ＰＣＲ扩增电泳分型，发 １％ Ｊ。本研究旨在对新生儿听力筛查结果“通过” 现耳聋突变基因均送至上海生工生物工程技术服务 的健康儿童进行耳聋基因的检测，由此发现超出常 有限公司进行测序，见图１一图３（目录后）。 规筛查模式的耳聋高危人群，并进行遗传咨询和干 ２结果 预指导。 共检测２３８例，其中ＧＪＢ２基因２３５ ｄｅｃＣ杂合突 ［作者单位］宁夏银川市妇幼保健院，宁夏银川７５０００１ 变８例，其中一个为ＧＪＢ２基因２３５ ｄｅｃＣ突变家系； ［作者简介］李莉（１９６８一），女，宁夏籍，主任医师，大学本科，主要从 ＳＬＣ２６Ａ４基因ＩＶＳ７—２ Ａ＞Ｇ杂合突变７例；线粒体 事产前诊断、遗传咨询与细胞及分子遗传学研究方向。 ［网络出版地址】ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６４．１０１３８．Ｒ．２０１６１１１４． １２ｓ ｒＲＮＡ １５５５ Ａ＞Ｇ纯合突变１例，见表１。 １７１２．００４．ｈｔｍｌ 宁夏医学杂志２０１６年１１月第３８卷第１１期Ｎｉｎｇｘｉａ Ｍ ！．２０ 鱼 ： 表１ 耳聋基因４个位点各基因型分析结果 ＡＲＭＡ—ＰＣＲ方法检测耳聋基因位点较少，不 能满足临床更多的需求，随着越来越多耳聋基因被 发现以及分子检测新技术的涌现，大规模的耳聋基 因筛查将成为可能。通过耳聋基因的检测成功筛查 出携带有耳聋突变基因的高危人群，明确了其分子 病因，为临床诊断提供了有力的分子学依据。通过 ３讨论 后续的遗传指导和必要的干预，最终达到防止聋儿 后代出生、减少耳聋发病率，有效提高国民人口素 质，减轻社会负担。 ［参考文献】 ［１］ Ｍａｒａｚｉｔａｍｌ Ｌ，Ｐｌｏｕｇｈｍａｎ ＬＭ，Ｒａｗｌｉｎｇｓ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｐｉｄｅｍｉｏ— ｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｅａｒｌｙ—ｏｎｓｅｔ ｄｅａｆｎｅｓｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｕ．Ｓ．ｓｃｈｏｏｌ—ａｇｅ 本研究仅对听力筛查“通过”的儿童进行耳聋基 因检测，结果发现这２３８例健康体检人群中耳聋突 变基因的携带率达７％，其中确定了一个ＧＪＢ２基因 ２３５ ｄｅｃＣ的突变家系，明确了家族迟发型耳聋的病 因，为家族后代的婚育及优生优育指导提供了有力 的证据。ＧＪＢ２基因突变多为语前致聋，呈对称性中 ｐｏｐｕｌｍｉｏｎ［Ｊ］．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｌａ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９３，４６ （５）：４８６—４９１． 重度或极重度耳聋，从而导致语言学习障碍，甚至影 响智力发育。若早期明确诊断，在学语前植入人工 耳蜗，恢复听力，可防止因聋致哑，有助于语言学习 和智力的开发，提高社会的适应能力¨ ” 。发现了 ［２］李亮，鲁建光，刘颖，等．先天性非综合征性耳聋相关基因检测 及热点突变分析［Ｊ］．中华耳科学杂志，２０１２，１０（２）：２４６—２５１． ｆ ３］ Ｓｔｅｅｌ ＫＰ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ：ｎｅｗ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ ｉｎ ｈｅａｒｉｎｇ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ［Ｊ］．ＢＭＪ，２０００，３２０（７２３５）：６２２—６２５． ［４］刘明，徐志勇，高国风，等．遗传性耳聋家系ＳＬＣ２６Ａ４ ＩＶＳ７—２Ａ＞Ｇ 基因突变分析［Ｊ］．中华耳科学杂志，２００９，７（３）：２３４—２３６． ［５］Ｘｉａｏ ＺＡ，Ｘｉｅ ＤＨ．Ｄｅａｆｎｅｓｓ ｆｏｒ ｎｏｎｓｙｎｄｒｏｍｉｃ ｈｅａｉｔｎｇ ｌｏｓｓ ａｎｄ ｅａｒ－ ｒｅｎｔ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，２００２，１５５（７）： １０７８一ｌＯ８１． 药物敏感性耳聋基因突变２例，临床指导其用药，避 免“一针致聋”。 遗传性耳聋的遗传因素比较隐秘，在临床常规 检查中难以检测到，越来越多的听力下降患者到临 床就诊，传统的听力筛查、影像学检查及生化检查 难以确定病因，给临床指导干预治疗带来了新的挑 战。解放军总医院耳鼻喉研究所徐秋菊教授指出， 耳聋基因检测可使新生儿听力缺陷的高危因素发 现率提高２０倍。耳聋基因检测技术从分子水平阐 明遗传性耳聋的病因，早期发现突变的耳聋基因， ［６］戴朴，韩东一，袁慧军，等．基因诊断一耳科诊断领域的重大进 步［Ｊ］．中华耳科学杂志，２００５，ｌ：６６—６８． ［７］ Ｍａｔｓｕｎａｇａ Ｔ．Ｖａｌｕｅ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｅｓｔｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｏｔｏｌｏｇｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒｓｅｎｓｏｒｉｎｅｕｒｌａ ｈｅａｉｔｎｇ ｌｏｓｓ［Ｊ］．Ｔｈｅ Ｋｅｉｏ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ２００９，５８（４）：２１６—２２２． ［８］蒋树娟．遗传性非综合征性耳聋基因诊断的研究进展［Ｊ］．国际 儿科学杂志，２０１１，３８（５）：４２１—４２５． 提供有效的遗传咨询并指导其后期生活，采取有效 的干预措施以降低耳聋的发生率。将耳聋基因检 测提前到产前甚至是婚前¨ ，形成一套耳聋基因 筛查的流程体系，通过检测婚检双方的耳聋基因， ［９］ Ｍｏｒｔｏｎ ＣＣ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，ｇｅｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｉｎ ｔｈｅ ａｕｄｉｔｏｒｙ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００２，１ｌ（１Ｏ）：１２２９ —１２４０． ［１０］孙莉莉，张丽，柳爱华．耳聋基因诊断及其在遗传性耳聋预防 来预测子代携带耳聋基因的风险值和耳聋发生的 概率，从而指导生育。若夫妻双方均为携带者或者 是其中一方为携带者，孕期必须要进行产前诊断从 和阻断中的应用研究［Ｊ］．中国产前诊断杂志（电子版）， ２０１１，３（２）：３２—３６． ［１１］张小芳．非综合征性耳聋的研究进展［Ｊ］．医学综述，２０１３，１９ （１）：１２０—１２３． 而评估胎儿预后，指导优生优育。将耳聋基因的检 测应用到产前筛查当中可以有效地阻断遗传性耳 ［１２］ 戴朴，韩明昱．耳聋基因诊断在耳聋预防与出生缺陷干预中的 应用［Ｊ］．中国听力语言康复科学杂志，２０１１，６：８—１０． 聋在家族中的传递，降低新生聋儿的发生率，减少 出生缺陷。 ［收稿日期］２０１６—０８—１２ ［责任编辑］李洁
