胶原诱导性关节炎病证模型大鼠血清细胞因子表达谱的初步研究

2019年4月

CHINESEJOURNALOFCOMPARATIVEMEDICINE

中国比较医学杂志

Vol.29　No.4

April,2019

2019,29(4):28-33.

丁子桐,熊海霞,高琴琴,等.胶原诱导性关节炎病/证模型大鼠血清细胞因子表达谱的初步研究[J].中国比较医学杂志,DingZT,XiongHX,GaoQQ,etal.Preliminarystudyonserumcytokineexpressionprofilesinratswithcollagen-inducedarthritis,cold-damparthralgia,ordamp-heatarthralgia[J].ChinJCompMed,2019,29(4):28-33.doi:10.3969/j.issn.1671-7856.2019.04.005

胶原诱导性关节炎病/证模型大鼠血清细胞因子

表达谱的初步研究

丁子桐1#,熊海霞1#,高琴琴1,靖卫霞2,袁芳2,侯秀娟2,朱跃兰2,孙文燕1∗

(1.北京中医药大学中药学院,北京　102488;2.北京中医药大学东方医院,北京　100078)

　　【摘要】　目的　研究胶原诱导性类风湿关节炎、寒湿痹和湿热痹病/证模型大鼠血清细胞因子的表达。方法

采用牛Ⅱ型胶原与弗氏完全佐剂复制类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)模型,在此基础上复加寒湿、湿热刺激建立寒湿痹及湿热痹病证结合模型,用微阵列抗体芯片检测血清细胞因子的表达。结果　与正常组比较,RA组activinA、CNTF、IFN-γ、TNF-α上调,MIP-3α、MMP-8下调;寒湿痹组CINC-2α、GM-CSF、IFN-γ上调,MIP-3α下调;湿热痹组ICAM-1上调,IFN-γ、MIP-3α、RAGE下调。与RA组比较,寒湿痹组β-NGF、CINC-2α、MMP-8、PDGF-AA上调,activin、TNF-α下调;湿热痹组MMP-8上调,activin、CNTF、IFN-γ、IL-1α、IL-6、MIP-3α、RAGE、TNF-α下调。寒湿痹组较与RA热痹湿热痹组比较,CINC-2α、IFN-γ、IL-1α、MIP-3α、PDGF-AA、RAGE均上调。与正常组比较,RA组及寒湿痹组IFN-γ/IL-4比值升高,湿热痹组比值明显降低;与RA组比较,寒湿痹组比值升高,湿热痹组比值明显下降。结论　病/证因素对大鼠血清细胞因子表达谱有明显影响,且各模型间存在明显差异。

【关键词】　类风湿关节炎;病证结合动物模型;寒湿痹;湿热痹;微阵列抗体芯片;细胞因子;大鼠【中图分类号】R-33　　【文献标识码】A　　【文章编号】1671-7856(2019)04-0028-06

Preliminarystudyonserumcytokineexpressionprofilesinratswithcollagen-inducedarthritis,cold-damparthralgiaordamp-heatarthralgia

DINGZitong1#,XIONGHaixia1#,GAOQinqin1,JINGWeixia2,YUANFang2,HOUXiujuan2,ZHUYuelan2,SUNWenyan1∗

(1.SchoolofChineseMateriaMedica,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing102488,China.

2.DongfangHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100078)

　　【Abstract】　

rats,cold-damparthralgiarats,anddamp-heatarthralgiaratsbyusingantibodyarrays.Methods　ArheumatoidarthritismodelwasestablishedbyintracutaneousinjectionoftypeIIcollagenandcompleteFreund’sadjuvant(CFA).Onthisbasis,cold-dampordamp-heatstimulationwasappliedtotheRAratsinordertoreplicatecold-damparthralgiaordamp-heatdamp-heatarthralgia.Serumcytokinelevelsintheratsweredeterminedusingantibodyarrays.Results　Comparedwiththenormalgroup,theactivin,CNTF,IFN-γ,andTNF-αlevelswereupregulated,whileMIP-3αandMMP-8weredownregulatedintheRAgroup.TheCINC-2α,GM-CSF,andIFN-γlevelswereupregulatedandMIP-3αwas

[基金项目]科学技术部国家重点基础研究发展计划(973计划)课题(2009CB522803)。

[作者简介]丁子桐(1994—),女,硕士研究生,研究方向:中药抗炎与免疫药理,E-mail:1881082156@163.com。

熊海霞(1990—),女,硕士,研究方向:中药抗炎与免疫药理,E-mail:hx0841@163.com。#共同第一作者

[通信作者]孙文燕(1970—),男,副教授,博士,研究方向:中药抗炎与免疫药理,E-mail:sunwy@bucm.edu.cn

Objective　Todeterminetheserumcytokinelevelsincollagen-inducedrheumatoidarthritis(RA)

downregulatedinthecold-damparthralgiagroup.ICAM-1wasupregulated,whileIFN-γ,MIP-3α,andRAGEwere

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downregulatedinthedamp-heatarthralgiagroup.ComparedwiththoseintheRAgroup,β-NGF,CINC-2α,MMP-8,andPDGF-AAwereupregulated,whileactivinAandTNF-αweredownregulatedinthecold-damparthralgiagroup.MMP-8wasupregulated,andactivinA,CNTF,IFN-γ,IL-1α,IL-6,MIP-3α,RAGE,andTNF-αweredownregulatedinthedamp-heatarthralgiagroup.Comparedwiththedamp-heatarthralgiagroup,CINC-2α,IFN-γ,IL-1α,MIP-3α,PDGF-AA,andwasincreasedintheRAgroupandcold-damparthralgiagroup,butwasdecreasedsignificantlyinthedamp-heatarthralgiasignificantlyinthedamp-heatarthralgiagroup.Conclusions　Diseases(RA)andsyndromes(cold-dampordamp-heat)models.

haveasignificantinfluenceonserumcytokineexpressionprofilesinrats,andtherearecleardifferencesamongdifferent

【Keywords】　rheumatoidarthritis;animalmodelofcombinationofdiseasesandsyndromes;cold-damparthralgia;

damp-heatarthralgia;microarrayantibodychip;cytokine;rat

group.ComparedwiththatintheRAgroup,theratioincreasedinthecold-damparthralgiagroup,anddecreasedRAGEwereupregulatedinthecold-damparthralgiagroup.Comparedwiththatinthenormalgroup,theratioofIFN-γ/IL-4

　　类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)是一种慢性自身免疫性疾病,常表现为持久反复的关节滑膜炎症,导致软骨及骨质破坏,最终造成关节畸形和功能障碍[1]。该病在世界范围普遍存在,严重危害人们的健康,而女性的发病率约为男性的2.5倍。RA的病因及发病机制尚未完全明确,目前尚无根治药物。大量研究证实,RA是一种主要由细胞因子参与介导的慢性炎性疾病。以炎性细胞因子为靶标的生物治疗方法已成为RA研究中的热点。RA属中医“痹证”范畴。痹证病因多为风、寒、湿、热之邪外袭,以致诸邪夹杂痹阻为患[2],寒湿痹、湿热痹是其主要证候类型。抗体芯片技术是通过阵列上的抗体识别样品中的蛋白和其他分子,可以在微小样品中筛查多项指标,具有高度特异性及多样本平行性检测等优势,在疾病诊断和个性化医疗方面已成为可靠的研究手段[3]。本研究应用微阵列血清相关炎性细胞因子,分析其细胞因子表达谱的差异。

1　材料和方法

1.1　实验动物

SPF级Wistar大鼠60只,体重160~180g,左

体芯片,美国RayBiotech公司。

器厂;S10手提式高速分散器,宁波新芝生物科技股份有限公司;Labofuge400R低温离心机,德国1.3　实验方法

Heraeus公司;电子分析天平,美国Ohaus公司。

SHH-500ZSD动物实验箱,重庆市永生实验仪

1.3.1　RA病/证模型的复制

动物随机分为4组,即正常组、RA组、寒湿痹

组、湿热痹组,每组15只。将牛Ⅱ型胶原(typeIIcollagen,CⅡ)与等体积的弗氏完全佐剂(completeFreund’sadjuvant,CFA)充分乳化,制成含CⅡ1

mg/mL的乳剂。除正常组外,各组大鼠在无菌条件下,每只左后足底皮内注射100μL乳剂,7d后以同种乳剂尾根部100μL再次免疫,正常组注射生理盐水。

首次免疫第二天,将寒湿痹组和湿热痹组大鼠置于动物实验箱中。其中寒湿痹组设定温度5℃,湿度95%,模拟寒湿外邪;湿热痹组设定温度35℃,湿度80%,模拟湿热外邪。两组均每天刺激4~6h,连续42d。

首次免疫后16d,除正常组外,各组大鼠进行关节炎指数(arthritisindex,AI)评分:0分,正常;1分,踝关节出现红斑和轻微肿胀;2分,踝关节到跖关节或掌关节出现红斑和和轻微肿胀;3分,踝关节到跖到趾关节出现红斑和重度肿胀[4]。每鼠最大评分16分,大于4分者为模型复制成功。RA组造模成1.3.2　微阵列抗体芯片检测血清细胞因子表达谱各组造模成功率及AI评分均未见统计学差异。趾关节或掌关节出现红斑和中度肿胀;4分,踝关节

抗体芯片检测RA大鼠、寒湿痹大鼠及湿热痹大鼠

右,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供[SCXK(京)2012-0001]。动物饲养于北京中医药大学屏障环境内[SYXK(京)2016-0038],温度

21℃~23℃,湿度60%~70%。并按实验动物使用的3R原则给予人道的关怀。1.2　主要试剂与仪器

功率约80%,寒湿痹组约73%,湿热痹组约67%。

牛Ⅱ型胶原,美国Chondrex公司,批号130435;弗氏完全佐剂(CFA),美国Sigma公司,批号SLBD8147V;大鼠RayBioAAR-CYT-G2炎症因子抗

正常组大鼠及造模后大鼠于首次免疫后第44

天,禁食不禁水12h,腹主动脉采血,3500r/min离

30

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心10min,分离血清。每只大鼠取血清50μL,组内34个细胞因子,主要步骤:①封闭和孵育:将抗体芯混匀,应用RayBio大鼠炎症细胞因子抗体芯片检测片放入试剂盒提供的反应盒中,在每个芯片孔中加入100μL的1×封闭液,室温孵育30min。去除封闭缓冲液,每个孔中加入相应的样品100μL,4℃过夜孵育;去除过量的样品溶液,用不同的洗膜液分别洗玻片。将生物素标记抗体加入相应孔内,每孔70μL,室温孵育2h,重复洗膜。每孔加入70μL的复洗膜。②荧光检测:待玻璃芯片完全晾干后用激光扫描仪进行扫描,图像以图片文件保存,荧光信号数据储存为MicrosoftExcel文件。芯片膜上细胞因子名称及位置见表1。将各点测得的原始灰度值除以芯片中的6个阳性对照点平均值,得出标准化后的灰度0.66或大于1.5者认为有明显差异。1.4　统计学方法

值,各组间比较,得出表达升高或降低倍数,比值小于

样本的非参数检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。2　结果

2.1　生物学表征观察

正常组大鼠后足踝呈现正常的粉红色,无肿胀,行动自如,舌、耳、尾、爪色泽正常,而单纯RA组大鼠则主要表现为关节红肿,活动受限。除关节肿胀、行走不便外,寒湿痹组大鼠同时有畏寒喜暖,蜷缩少动,大便稀溏,舌、耳、尾、爪黯淡等表现,与中医寒湿痹临床症状相似;湿热痹组大鼠出现躁动,大便粘滞,舌、耳、尾、爪发红等表现,与中医湿湿热2.2　RA病/证大鼠血清细胞因子表达谱2.2.1　RA病/证大鼠与正常组大鼠比较

微阵列抗体芯片扫描结果见图1。痹临床症状相似。

1500倍稀释的荧光剂-链霉亲和素,室温孵育2h,重

由表2可见,与正常组比较,RA病/证组大鼠均出现了细胞因子表达紊乱状态,其中RA组ActivinA、CNTF、IFN-γ、TNF-α上调,MIP-3α、MMP-8下调;寒湿痹组CINC-2α、GM-CSF、IFN-γ上调,3α、RAGE下调。

G

H

造模成功率及AI评分采用SPSS17.0统计软件进行分析。若数据服从正态分布则选用单因素方差分析(One-wayANOVA),方差齐者用LSD检验;数据不符合正态分布及方差不齐者选用两

APOS1阳性对照1

BPOS2阳性对照2POS2Fractalkine神经元趋化因子FractalkineLeptin瘦素

CPOS3阳性对照3POS3

DNEG阴性对照NEGICAM-1细胞间黏附分子-1ICAM-1

E

F

MIP-3α下调;湿热痹组ICAM-1上调,IFN-γ、MIP-

表1　大鼠细胞因子抗体芯片

Table1　Theratcytokineantibodyarrays

IJCINC-2α细胞因子诱导中性粒细胞趋化因子-2αCINC-2αIL-4白介素-4IL-4

1

Activin-A激活素-AActivin-AIFN-γ干扰素-γIFN-γ

Agrin人聚集蛋白Agrin

CINC-1

B7-2/CD86β-NGF

细胞因子诱

可溶性白β神经

导中性粒

细胞分化生长因子

细胞趋化

抗原

因子-1B7-2/CD86

β-NGF

CINC-1

CINC-3细胞因子诱导中性粒细胞趋化因子-3CINC-3

KLCNTF睫状神经营养因子CNTF

234

POS1Fasligand自杀相关因子配体FasligandIL-13白介素-13

GM-CSF粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF

IL-1αIL-1βIL-1R6IL-2白介素-1α白介素-1β白介素-1R6白介素-2IL-1α

IL-1β

IL-1R6

IL-2

IL-6IL-10白介素-6白介素-10IL-6

IL-10

5678

LIX脂多糖MCP-1单核MIP-3α

L-Selectin

诱导的CXC细胞趋化巨噬细胞

L选择素

型趋化蛋白1炎症蛋白因子

LIXNEG阴性对照NEG

L-SelectinNEG阴性对照NEG

MCP-1NEG阴性对照NEG

MIP-3αNEG阴性对照NEG

MMP-8PDGF-AA

ProlactinR

基质金属血小板衍

泌乳素受体

蛋白酶-8生生长因子MMP-8NEG阴性对照NEG

PDGF-AAProlactinRNEG阴性对照NEG

NEG阴性对照NEG

RAGEThymusTIMP-1晚期糖Chemokine-1金属蛋白基化终胸腺趋化酶组织产物受体因子1抑制剂1RAGENEG阴性对照NEG

Thymus

TIMP-1

Chemokine-1

TNF-α肿瘤坏死因子αTNF-α

IL-13

VEGF血管内皮生长因子VEGF

Leptin

NEGPOS1阴性对照阳性对照NEG

POS1

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31

图1　各组抗体芯片扫描结果

Figure1　Resultsofantibodychipscanningofeachgroup

2.2.2　由表RA3病可见/证大鼠各组间比较

CINC-2α、MMP-8、,PDGF-AA与RA组比较上调,,寒湿痹组ActivinA、β-NGF、

下调IL-1α、IL-6、MIP-3α、RAGE、TNF-α;湿热痹组MMP-8上调,Activin与湿下调A、CNTF、IFN-γ、TNF-α

。寒湿痹组2.PDGF-AA、RAGE热痹组比较3　RA病/证大鼠血清蛋白均上调,CINC-2α、IFN-γ/,IFN-γ、无明显下调蛋白IL-1α、MIP-3α、IL-4比值变化

。

与正常组相比,RA组及寒湿痹组的IFN-γ/IL-4比值升高,湿热痹组比值明显降低;与RA组比较,寒湿痹组比值升高,湿热痹组比值明显下降。见图2。

表Table2　RARA2　modelDifferentially病/证大鼠与正常组大鼠的差异表达蛋白expressedproteinsbetweenthe

syndromesratsofcombinationsand寒湿痹normalgroupofdiseasesrats

and

细胞因子CytokineRARA//Normal正常Cold-damp/正常湿热痹arthralgiaDamp-heat/正常ActivinANormal

/arthralgia1.Normal

/CINC-2β-NGF

2.0.3961.3471.CNTFα1.8391.3410.207GM-CSF1.1081.6801.7370.9971.4631.971IL-1IFN-γα1.4361.5311.5761.0ICAM-11.6140.080IL-61.4841.4582741.4300.5151.734MIP-3α0.1.4580.50.4580.1340.763PDGF-AAMMP-8

0.4910.4590.2821.8201.8090.9671.0324

1.2500.243937

0.828注0.4747

Note.:FoldTNF-αRAGEchange阈值大于1.5,小于0.66者为差异表达蛋白。

differentiallyFoldchangeexpressedofgreaterprotein.

than1.5orlessthan0.66representsaTablemodels3　Differentially表3　RA病ofcombinationexpressed/证组间差异表达蛋白

ofdiseasesproteinsandbetweensyndromes

theRA

寒湿痹寒湿痹细胞因子CytokineCold-damp/RA湿热痹arthralgiaDamp-heat/RACold-damp/湿热痹

/RAarthralgia/RAarthralgiaDamp-heat/Activinarthralgia

β-NGF

A0.1.5620.1.CINC-2α1.5991.5041.1171.345GM-CSFCNTF0.5670.11.788IFN-γ1.8710.8761.0970.6271.3883.459ICAM-1IL-1α0.00.7521.90.3371.1320.949MIP-3IL-6α0.0001.4951.00.0601.9441.485PDGF-AAMMP-81.0030.5991.81.6150.6291.837TNF-αRAGE1.5251.9700.205607

0.0110.624484

1.509注Note.:FoldconsideredThechangefoldasdifferentiallychange阈值大于threshold1.5和小于expressedgreater0.protein.

than66者为差异表达蛋白1.9312

1.5orlessthan。

0.66is注:各组IFN-γ/IL-4比值为标准化后灰度值的比值。

图2　RA病/证大鼠IFN-γ/IL-4比值的变化

Note.normalizedTheratioofIFN-γ/IL-4ofeachgroupistheratiooftheFiguregray2　value.

ChangesintheIFN-γ/IL-4ratios

oftheratsineachgroup

323　讨论

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造模无显著性差异[9]。细胞因子是引起类风湿关节炎炎症及关节损伤的重要介质,故本研究从细胞因子表达谱着手,观察寒湿痹、湿热痹及单纯RA大鼠相关细胞因子表达的情况,对上述模型的特征进行初步探索。结果显示,RA病/证各组大鼠均出现了血清细胞因子表达谱紊乱状态。与正常组比较,RA组及寒湿痹组多数细胞因子上调,如促炎因子IFN-γ、MIP-3α、RAGE下调。GM-CSF可刺激活化IL-6、IFN-γ及GM-CSF等;湿热痹组ICAM-1上调,

抗体芯片是蛋白质芯片的一种,其技术原理是有序的将各种抗体固定在滤膜、载玻片等载体上,利用抗原-抗体特异性结合反应来捕捉样本中待检测的抗原,然后用标记的有特定荧光物质的抗体与芯片上对应的蛋白质结合,抗体上的荧光将指示对应蛋白质的表达情况。该技术利用少量样本可筛选多项指标,具有高灵敏性、高特异性、高通量性的优点,临床上在疾病诊断、发现疾病标志物和评价治疗效果等多方面有着广泛的应用(AA)ⅡCIA是型胶原诱导性关节炎目前最常用的类风(CIA)湿关和佐剂性关节炎

。

节炎动物的相似性建立较早,是目前比较公认的研究,也较为成熟,且与人类RARA的理想模具有很多模型。型[5]“的风寒湿和风湿热环境因素并不能引起风寒湿三气杂至。单纯的CIA,模型证候特征不明确合而为痹”的证候特点,难以模拟RA,而单纯的病理学改变。然而,CIA动物模型在某些证候干预因素作用下,具备证候的潜质,随复加于CIA大鼠干预措施的不同,可将单纯CIA模型转化为肾虚、风寒湿、风湿热等多种证候[6]胶原与弗氏完全佐剂皮内注射复制大鼠类风湿关。因此本实验采用牛Ⅱ型节炎模型,在RA模型基础上采用条件可控的动物实验箱模拟寒湿、湿热环境因素,建立寒湿痹、湿热痹病证结合模型。

目前,有关(风)寒湿痹、(风)湿热痹病证模型的特异性评价指标尚处于探索阶段,缺乏公认的评价标准。有研究发现,单纯Ⅱ型胶原注射或Ⅱ型胶原加风寒湿环境刺激大鼠血清LDH含量较正常组大鼠明显升高,而Ⅱ型胶原加风湿热组低于正常组和Ⅱ型胶原加风寒湿组;Ⅱ型胶原注射加风寒湿环境刺激组血清IgG含量高于正常组,而单纯Ⅱ型胶原注射或。CFAⅡ型胶原加风湿热组与正常组无明显差异[7](CCP)于正复加风寒湿刺激大鼠踝关节常组大鼠[8],CFA及环瓜PGE氨酸2含量明显高多肽湿因子足跖注射复加寒湿CCP(RF)、anti-CCP滴度明显高于单纯、湿热环境大鼠血清类风CFA及学差异足跖注射大鼠;单纯造模或造模复加寒湿或湿热环境均能,但湿热与寒湿之间比较无统计使大(APF)鼠血清抗角蛋白抗体(AKA)、境的阳性率最高阳性率高于正常对照组抗核周因子,造模加寒湿环境次之,其中造模加湿热环,但与单纯

巨噬细胞分泌多种促炎性细胞因子如IL-6、TNF-性等,能促进炎症的发展,加速细胞外基质降解和细胞凋亡,并调节Th1型免疫应答。CINC及MIP-3α为趋化因子,是可诱导的、分泌型的前炎症细胞因子[10]细胞在炎症部位聚集,其中CINC与人、IL-8活化以及组织损伤有着类似的功能;,但介导RA病/证模型与正常组相比,MIP-3α蛋白表达均下调,与文献存在不一致性,有待进一步研究。CNTF能够微弱抑制外周单核细胞产生IL-8和前列素E在急性炎症反应中诱导肝细胞表达急性期反应蛋2,可白;ICAM-1对炎性反应的发生起到一定作用,二者皆可反映炎症情况NGF。与RA发生过程中的重要因子表达上调。有研究表明组比较,寒湿刺激后β-,在创伤和炎症部位其表达β-NGF被认为是疼痛增加,提示寒湿是刺Ⅱ激型胶原降解的关键酶可增强RA模型的炎症反应[11]。MMP-8[12]生理状态下分泌很少,当受到炎性因子刺激后会大,其在量产生,最终导致炎症反应。本研究显示,在RA基础上复加寒湿及湿热刺激均可增强该酶的活性Activin。制M2型巨噬细胞分泌促炎因子A可活化炎性细胞释放促炎性因子PDGF[13],还可抑也发现RA复加寒湿模型中activinA和PDGF。本研究表达呈负相关HMGB1下调,具体环节还需进一步探究/NF-κB。RAGE的关键蛋白作为炎症因子重要信号通路[14],。

在湿热刺激下表达类风湿关节炎的病因和发病机制尚未完全明确,但T细胞功能紊乱,尤其是辅助性CD4+异常活化,是RA发病过程中的重要机制[15]同的特异性转录因子下,辅助性T细胞(。T细胞Th)在不分化为不同的细胞亚群,Th1/Th2两种细胞亚群之间存在动态平衡及交互抑制,这种动态平衡一旦被打破Th2,机体则处于属Th1失衡状态型疾病,Th1占优势或Th2占优势的Th1/,Th1并由此而发病/Th2细胞失衡与。许多研究表明RA发病机制

,RA

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33

密切相关。Th1分泌白介素-2(IL-2)、干扰素-γ

(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF-α)等细胞因子。IFN-γ是Th1细胞的特征性细胞因子,具有双向的免疫调节作用,它既是单核巨噬细胞主要活化因子,间接发挥促炎作用,又可抑制滑膜成纤维细胞合成基质金属蛋白酶等减少软骨基质降解发挥保护作用[16]。Th2则分泌白介素-4(IL-4)、IL-6等细胞因子,其中IL-4是Th2细胞分泌的特征抗炎性细胞因子,它有抑制Th1合成炎性细胞因子等功能。[2]　邵淑侠.痹证治验[J].中西医结合与祖国医学,2006,10[3]　张爱英,尹成增,赵元顺,等.蛋白芯片研究进展[J].中国医

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因此,通常用IFN-γ/IL-4的比值来代表Th1和Th2的比例γ组与正常组相比的表达上调。本研究中,但湿热痹组表达下调RA组及寒湿痹组促炎因子IFN-γ/IL-4比值均出现明显变化;RA病/证模型IFN-RA,

热痹组大鼠该比值则明显降低组、寒湿痹组大鼠IFN-γ/IL-4比值明显升高,湿Th2段呈现不同的变化规律细胞及细胞因子在类风湿关节炎不同的发展阶。有研究证实,Th1/,在发病早期阶段Th1细胞高于正常水平,Th2细胞随着Th1细胞的升高而升高,随着病程发展Th1细胞逐渐下降。本研,Th2究初细胞反而升高从CIA大鼠寒湿刺激而抑制病情6的周后发展

[17]

Th1/Th2失衡加剧步提示

刺激6周则可逆转此失衡并向Th2型转变。导致该,湿热变化的确切机制以及造模不同阶段Th1/Th2变化规律尚需探究。

综上,本研究应用微阵列抗体芯片技术检测了胶原诱导性关节炎病/证模型大鼠血清细胞因子表达谱的变化,结果提示病/证因素可影响相关细胞因子的表达,可为深入探讨RA病/证特点及干预靶标提供一定参考,而细胞因子表达谱的动态变化规律尚需进一步研究。

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T细胞免疫应

〔收稿日期〕2018-09-14