维普资讯 http://www.cqvip.com ＩＳＳＮｌ００７—８７３８ ０４，２０（６ 志（Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏ１）２０６９９ 论著· 文章编号：１００７—８７３８（２００４）０６—０６９９一Ｏ３ 抗ＨＩＶ．１核心抗原ｐ２４单克隆抗体的制备及特性的初步鉴定 侯俊，胡 燕，朱雷，沈宏辉，杨健洋，洪世雯，貌盼勇 （第３０２医院传染病研究所病毒研究室，北京１０００３９） ＳＡ法及Ｄｏｔ ｂｌｏｔ对其进行筛选和 Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ 进行克隆化后，用间接ＥＬＩｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ ＨＩＶ－１ ｐ２４ 特性鉴定。结果：筛选到２株可分泌抗ＨＩＶ一１ ｐ２４ ｍＡｂ的杂 ａｎｔｉｇｅｎ ＨＯＵ Ｊｕｎ，ＨＵ Ｙａｎ，ＺＨＵ Ｌｅｉ，ＳＨＥＮ Ｈｏｎｇ—ｈｕｉ，ＹＡＮＧ Ｊｉａｎ—ｙａｎｇ，ＨＯＮＧ Ｓｈｉ—ｗｅｎ，ＭＡＯ Ｐａｎ—ｙｏｎｇ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，３０２ｔｈ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ＰＬＡ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００３９，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ ＡＩＭ：Ｔｏ ｓｅｔ ｕｐ ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉ— ｂｏｄｉｅｓ（ｍＡｂｓ）ａｇａｉｎｓｔ ＨＩＶ－１ ｐ２４ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅ ｔｈｅｉｒ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ：ＢＡＬＢ／ｃ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｐ２４ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｍｉｃｅ’ｓ ｓｐｌｅｎｏｃ￣ｅｓ ｗｅｒｅ ｆｕｓｅｄ ｗｉｔｈ Ｓｐ２／０ ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｈｙｂｒｉ— ｄｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ Ｉｉｍ ｎｇ ｄｉｌｕｔｉｏｎ，ＨＡＴ ａｎｄ ＨＴ·ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｍＡｂｓ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ Ｄｏｔ ｂｌｏｔ ａｎｄ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡ．ＲＥＳＵＬＴＳ：Ｗｅ ｈａｄ ｅｓｔａｂ－ ｌｉｓｈｅｄ ｔｗｏ ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ｍＡｂｓ ａｇａｉｎｓｔ ＨＩＶ－１ ｐ２４ ａｎｔｉｇｅｎ．Ｔｈｅ ｔｉｔｅｒｓ ｏｆ ｔｗｏ ｍＡｂｓ ｉｎ ａｓｃｉｔｉｃ ｆｌｕｉｄ ｗｅｒｅ １ ｘ １０一ａｎｄ １．７ ｘ １０ 一１．８ ｘ １０ ｍｏｌ／Ｌ．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｂｏｔｈ ｍＡｂｓ ｂｅｌｏｎｇｅｄ ｔｏ ＩｇＧ １．Ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｄｅｍｏｎ— ｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｂｏｔｈ ｍＡｂｓ ｈａｄ ｎｏ ｃｒｏｓｓ—ｒｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｖｉｒａｌ ａｎｔｉｇｅｎｓ，ｓｕｃｈ ａｓ ＨＢｃＡｇ，ＨＣＶ ＲＮＡ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｅｒａ ａｎｄ ＨｌＶｇｐ４１．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｔｗｏ ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｓｅｃｒｅ— ｔｉｎｇ ｍＡｂｓ ａｇａｉｎｓｔ ＨＩＶ－１ ｐ２４ ａｎｔｉｇｅｎ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ，ｗｈｉｃｈ ｌａｙｓ ｔｈｅ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ Ｈ ＩＶ一１ ｐ２４ ａｎｔｉｇｅｎ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＨＩＶ－１；ｐ２４ ａｎｔｉｇｅｎ；ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ；ｈｙｂｒｉ－ ｄｏｍａｓ 摘要 目的：建立分泌抗Ｈ１Ｖ一１ ｐ２４单克隆抗体（ｍＡｂ）的杂交瘤细 胞株，并对其特性进行初步鉴定。方法：以纯化的基因工程 制备的ｐ２４抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与 Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，经ＨＡＴ、ＨＴ选择培养及有限稀释法 收稿日期：２００４—０２—２７；修回日期：２００４—０７—０１ 基金项目：“十五”项目基金资助（Ｎｏ．叭ＭＢＩ３６；叭Ｑ１３７） 作者简介：侯俊（１９７３一），女，重庆人，主管技师，硕士． Ｔｅｌ：（０１０）６６９３３３１６；Ｅｍａｉｌ：ｌｂａ＠２６３．ｎｅｔ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ，Ｅｍａｉｌ：ｍａｏｐｙ３０２＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｎ．１３ｉｉ 交瘤细胞，其腹水效价为１ ｘ １０～，亲和力为１．７ ｘ １０ ～ １．８ ｘ１０ ｍｏｌ／Ｌ，ｍＡｂ的Ｉｇ亚类均为ＩｇＧｌ。两株ｍＡｂ与 ＨＢｃＡｇ、ＨＣＶ ＲＮＡ阳性血清及ＨＩＶｇｐ４１等均无交叉反应，只 与ＨＩＶ—ｌ ｐ２４抗原阳性血清产生特异反应。结论：成功地建立 了２株可分泌抗ＨＩＶ一１ ｐ２４ ｍＡｂ的杂交瘤细胞，为进一步研 制ＨＩＶ一１ ｐ２４抗原的ＥＬＩＳＡ检测试剂盒奠定了基础。 关键词：ＨＩＶ一１；ｐ２４抗原；单克隆抗体；杂交瘤 中图分类号：Ｒ３９２、１１ 文献标识码：Ｂ Ｈ１Ｖ一１ ｐ２４抗原在ＨＩＶ急性感染期和ＡＩＤＳ病程 后期均可出现，因此，检测ＨＩＶ一１ ｐ２４抗原不仅有助 于ＨＩＶ感染的早期诊断，而且可作为爱滋病病情、 病程监测、预后判断和评价抗病毒治疗效果的重要 指标。‘。 。 我们以基因工程表达并纯化的ＨＩＶ一１ ｐ２４抗原 作为免疫原 Ｊ，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过细胞融合和 有限稀释法，成功地建立了两株可分泌抗ＨＩＶ一１ ｐ２４ 单克隆抗体（ｍＡｂ）的杂交瘤细胞，为进一步研制 ＨＩＶ一１ ｐ２４抗原检测的ＥＬＩＳＡ试剂盒奠定了基础。 １材料和方法 １．１材料ＨＩＶ一１ ｐ２４抗原由本室克隆表达并纯化。 纯系ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，由本院实验动物中心提供。小鼠 骨髓瘤细胞系（Ｓｐ２／０细胞），由本室保存。ＲＰ． ＭＩ１６４０、胎牛血清及ＨＡＴ等试剂，均购自Ｇｉｂｃｏ公 司。聚乙二醇（ＰＥＧ １０００）为Ｍｅｒｃｋ公司产品。ＨＲＰ． 羊抗鼠ＩｇＧ及兔抗ｐ２４ ＩｇＧ—ＨＲＰ均由本室制备。 ＨＲＰ－鼠抗人ＩｇＧ，购自中国医科大学免疫学教研室。 １．２方法 １．２．１ ＨＩＶ一１ ｐ２４抗原的制备及纯化鉴定 根据 Ｔｒｉｑｕｅｓ所报道的ＨＩＶ一１全基因序列中ｇａｇ基因的序 列，设计合成了一对引物（含ＢａｍＨ Ｉ和Ｈｉｎｄ ＩＩＩ两 个酶切位点），用ＰＣＲ扩增ＨＩＶ一１ ｐ２４抗原全基因序 列（约６９０ ｂｐ），将其插入表达载体ｐＲＳＥＴ，构建了 重组载体ｐＲＳＥＴ—ｐ２４。以其转化大肠杆菌（Ｂｋ２１）诱 维普资讯 http://www.cqvip.com ７【）（１ 竖！ （１ ｃ）７＝ ！ 犯 Ｊ叠兰鱼 羹 椠志ｌ ｔ Ｉ＝ｔ’ｌ ｌｌ ｌｌ１『『－－ －－ｌ】 ‘ ４ｌ ｃ￣ ｌＨ）∥ｌ ｎ０ ｌ ｌ清封 川Ｉ Ｉ］Ｓ—Ｔ ｉ ３遍 导表丛Ｉ １４生ｒｌ 丧逃产物¨ｊＩ习扣化 属离了 也杠乏，３Ｉ 状 １八ｆ寺幢 刚 Ｈｌｈ Ａ ．Ｉｔ（ 、Ｉ｛ ＾ １ Ｈ－ｌｉｌｌ 技 ｃ － ）配体泶啊１层折进行纯化ｊ 是达驶纯化产物 ｆ采Ｅ闩Ｗ ｎ｝·ｌＩ）１法鉴定活 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