中国医药生物技术２０１７年６月第１２卷第３期 ＣｈｉｎＭｅｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，Ｊｕｎｅ ２０１７，Ｖｏ１．１２ Ｎｏ．３ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—７１３Ｘ．２０１７．０３ ００８ ・论著・ 一种糖类抗原２４２全自动管式 化学发光定量免疫检测试剂的建立 杨红宾，刘江武，翁祖星，黄刘女，徐飞海，孙旭东 【摘要】 目的建立一种全自动测定血清糖类抗原２４２（ＣＡ２４２）的 管式化学发光定量免疫检测试剂。 方法采用均相磁微粒标记技术与高灵敏的吖啶酯化学发 光技术，依据双抗体夹心原理，以４株单克隆抗体为原料 进行配对单抗筛选，从而建立ＣＡ２４２化学发光磁微粒测定 试剂，并在全自动管式化学发光仪上对其灵敏度、精密度、 回收率与相关性等进行初步评价。 结果筛选的最优单抗配对７Ｃ１０（包被）．３Ｈ１（标记）的 反应活性最高，且ＣＡ１９．９和ＣＡ５０对ＣＡ２４２检测的干 扰很小。该试剂的分析灵敏度为０．６９ Ｕ／ｍｌ，高浓度样本精 密度为３．０％，低浓度样本精密度为５．７％，回收率为 １０１．５％。与当前主流的商品化试剂的定量相关性良好（ｙ＝ １．０２７ｘ一０．２９９１，ｒ：０．９９ｌ１，Ｐ＜０．０５）。 结论利用抗ＣＡ２４２单抗为原料建立ＣＡ２４２全自动管 式化学发光定量免疫检测试剂，该试剂性能良好，所有检测 操作均由仪器自动完成，可满足目前临床医学的高通量检测 需求。 【关键词】糖类抗原２４２； 双抗体夹心法； 化学发 光 ｗｗｗ．ｃｍｂｐ ｎｅｔ Ｃｎ 中再医药ｉ物技术 ２０１７ １２《３１．＇２３８．２４１ 胰腺癌是人类死亡率最高的恶性肿瘤之一，根 据资料显示，胰腺癌５年生存率仅为５％，是目前 临床诊治最为困难的实体肿瘤…。因此，对胰腺癌 的早期发现、早期诊断及早期治疗被认为是改善患 者预后的唯一途径。ＣＡ１９ ９是目前临床证实并广 泛应用的胰腺癌标志物 ２ｒ】，但在其他胃肠道恶性肿 瘤（如胆囊癌）以及慢性胰腺炎、肝炎、胆道梗阻 等良性疾病中ＣＡ１９ ９也升高 Ｊ，而ＣＡ２４２水平 却很少或轻微升高。目前普遍认为，ＣＡ２４２在胰腺 癌的鉴别诊断中有着更高的特异性Ｌ４Ｊ。有研究表明， 将ＣＡ２４２与ＣＡ１９—９联合诊断胰腺癌，灵敏度虽 无明显提高（６８．５％～７８．１％），特异度却显著增加 （９０．４％～９６．６％）［５】０ ＣＡ２４２是一种唾液酸化的黏蛋白型糖链抗原， 先由Ｃｏｌｏ２０５单克隆抗体免疫小鼠得到系列抗 体，再经单克隆抗体筛选得到ＣＡ２４２，它的抗原决 定簇为糖链结构，出现于黏蛋白表面ｃ６。 。ＣＡ２４２与 ＣＡ１９．９、ＣＡ５０一样都是Ｌｅｗｉｓ ａ血型上的抗原决 定簇，但ＣＡ２４２的抗原决定簇与ＣＡ１９．９和 ＣＡ５０不同，它不能与唾液酸化的半乳糖苷反应【８Ｊｏ 健康者血清ＣＡ２４２含量小于２０ Ｕ／ｍｌ［９ｊ，临床上 在不同良恶性疾病时，ＣＡ２４２、ＣＡｌ９－９和ＣＡ５０ 的抗原决定簇出现的机会和程度并不相同。恶性肿 瘤发生时，三种抗原决定簇的出现均较正常时明显 增多【ｌ…，但ＣＡ２４２对恶性肿瘤的诊断比ＣＡ１９—９ 和ＣＡ５０更加特异…Ｊ。因此糖类抗原ＣＡ２４２作为 一种较晚发现的肿瘤标志物，具有较优诊断价值。 目前国内ＣＡ２４２检测试剂质量参差不齐，临床上 广泛使用的是瑞典ＣａｎＡｇ公司生产的酶联免疫吸 附分析法（ＥＬＩＳＡ）ＣＡ２４２检测试剂ｕ引，但由于是 半定量、自动化程度低，操作繁重且耗时较长（４ ｈ） 的分析方法，不能很好地满足临床需要。为此，我 们利用国产ＣＡＲＩＳ２００全自动化学发光免疫分析 仪和磁微粒子技术结合超敏感的吖啶酯化学发光 体系［”］，进行全自动化、高通量、操作简单方便 的ＣＡ２４２管式化学发光磁微粒法（ＣＭＩＡ）试剂 的研制。 １材料与方法 １．１样本与材料 １．１．１ 临床样本与ＣＡ２４２校准品 ２０６例临床 血清样本均由厦门大学提供，包括胰腺癌患者血清 样本４７例，胰腺炎、胆道梗阻等良性疾病患者血 清样本９０例，以及６９例健康体检者血清，均保 存于 ０℃。浓度分别为０．４、２、１０、５０、２５０、 作者单位：１０００５０北京，首都医科大学附属北京天坛医院离退休办公 室（杨红宾）；３６１０２２厦门万泰凯瑞生物技术有限公司（刘江武、翁祖 星、黄刘女、徐飞海、孙旭东） 通信作者：孙旭东，Ｅｍａｉｈ ｘｕｄｏｎｇ．ｓｕｎ＠ｉｎｎｏｄｘ．ｃｏｒｎ 收稿日期：２０１７．０４－０５ 中国医药生物技术２０１７年６月第１２卷第３期 ＣｈｉｎＭｅｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，Ｊｕｎｅ ２０１７，Ｖｏ１．１２，Ｎｏ．３ １２５０ Ｕ／ｍｌ的６份ＣＡ２４２校准品由本公司进行 配制。 １．１．２主要试剂及耗材混匀，３７℃孵育１０ｍｉｎ；②加入吖啶酯试剂：取 ５０ ＬＬｌ抗ＣＡ２４２抗体．吖啶酯标记物试剂，加入孵 想 ∞ 磁微粒ＥＭ１ １００／４０为 育杯内，３７℃孵育２０ｍｉｎ；③洗涤：用专用洗涤 ∞ 液洗涤２遍；④发光：加入５０ ｕ１激发液，混匀； Ｏ ∞ 德国Ｍｅｒｃｋ公司的产品；ＥＣＤ为美国Ｓｉｇｍａ公 司的产品；吖啶酯和发光激发液均由本公司提供； ４株ＣＡ２４２单抗（３Ｈ１、７Ｂ３、７Ｃ１０、１２Ｆ１）均 由厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术 研究中心提供；各种常规化学试剂为国产分析纯。 １．１．３仪器ＣＡＲＩＳ系列化学发光仪为厦门优 迈科医学仪器有限公司的产品；Ｓｕｎｒｉｓ２酶标仪购 白瑞士Ｔｅｃａｎ公司；ＣＡ２４２ ＥＬＩＳＡ检测试剂盒（含 标准品和质控品）为瑞典ＣａｎＡｇ公司产品。 １．２方法 １．２．１ 吖啶酯的标记 将吖啶酯加入抗体溶液 ⑤读值：测定样本的相对发光强度，根据校准曲线， 计算出样本中ＣＡ２４２的浓度。 ２结果 ２．１ 单抗最优配对组合的获得 为了排除人血清中内源性ＣＡ１９－９或ＣＡ５０ 的干扰，对阳性与阴性对照样本进行内源性ＣＡ１９—９ 或ＣＡ５０确认。根据ＣＡ２４２、ＣＡ１９．９和ＣＡ５０的 浓度挑选出三组样本作为ＣＡ２４２的阳性对照 （ＣＡ２４２为１ １３．３５ Ｕ／ｍｌ、ＣＡ１９—９为３０４．０４ Ｕ／ｍ１、 ＣＡ５０为７４．７３ Ｕ／ｍ１）、假阳性对照（ＣＡ２４２为 中，混匀，避光孵育。以甘氨酸溶液终止反应，将 得到的产物全部透析至２０ ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液 ｐＨ ７．４中，于－２０℃避光保存。 １．２．２磁微粒包被抗体取磁微粒用ＥＤＣ溶液 ３．９１ Ｕ／ｍｌ、ＣＡ１ ９—９为６３．５４ Ｕ／ｍｌ、ＣＡ５０为 ３７．８２ Ｕ／ｍ１）、阴性对照（ＣＡ２４２为３．８４ Ｕ／ｍｌ、 ＣＡ１９—９为ｌ３．１７ Ｕ／ｍｌ、ＣＡ５０为４．５６ Ｕ／ｍ１）。基 活化后，加入抗体进行分子偶联；再用含牛血清白 蛋白的２０ ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液ｐＨ７．４进行封 于双抗体夹心法原理进行抗体配对筛选，将４株 单抗（３Ｈ１、７Ｂ３、７Ｃ１０、１２Ｆ１）进行１２组交叉 闭；将封闭后的磁微粒置于２～８℃保存备用。 １．２．３参比试剂盒的检测 按照ＣＡ２４２ ＥＬＩＳＡ 检测试剂盒说明书进行操作。 １．２．４ ＣＡ２４２管式化学发光磁微粒法首先将标 记后的吖啶酯稀释２００倍，将包被后的磁微粒稀 释５倍，均保存于４℃备用。依据双抗体夹心法 配对组合，检测三份样本（阳性对照、假阳性对照、 阴性对照），根据检测的相对发光强度（ ｕｓ），筛 选特异性强、信噪比好的抗体配对。结果（图１） 显示，７Ｃ１０（包被）一３Ｈ１（标记）抗体组合的试剂 阳性对照的反应活性最高，虽然阴性样本本底偏 高，但假阳性对照与阴性对照的相对发光强度一 原理，检测步骤为：①加样：分别取５０ ｕｌ检测样 本（校准品和血清）和５０ ｕｌ磁微粒于孵育杯内 致，表明该抗体配对检测ＣＡ２４２受ＣＡ１９．９和 ＣＡ５０的干扰小。 阳性对照 Ｐｏｓｉｔｉｖｅ 假阳性对照 Ｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ 阴性对照 Ｎｅｇａｔｉｖｅ ∞ｅ－－ ｎ ０ 罱 盅 ５ 暑 兽 一 ５ 蛊 量 重 蚤 重 量 量 单抗配对组合 Ｍｏｎｏｃｌｏａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐａｉｒｓ 图１ 单抗配对组合的筛选结果 Ｆｉｇｕｒｅ １ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐａｉｒｓ 中国医药生物技术２０１７年６月第１２卷第３期 ＣｈｉｎＭｅｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，Ｊｕｎｅ ２０１７，Ｖｏ１．１２，Ｎｏ．３ ２．２ ＣＡ２４２ ＣＭＩＡ方法的标准曲线绘制 采用ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５．０软件进行四参数 （４ＰＬＣ）拟合，以ＣＡ２４２校准品的浓度为Ｘ轴， 检测的发光信号值为Ｙ轴，绘制剂量反应曲线 （图２），校准品浓度与信号强度呈良好相关性（ｒ＝ ０．９９９９）。 ＣＡ２４２浓度（Ｕ／ｍ１） Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＡ２４２（Ｕ／ｍ１） 图２ ＣＡ２４２ＣＭＩＡ标准曲线 Ｆｉｇｕｒｅ ２ ＣＡ２４２ ＣＭＩＡ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ ２．３分析灵敏度评价 重复测定０ Ｕ／ｍｌ样本２０次，计算其平均相 对发光强度（ｘ）、标准差（ＳＤ），得出ｘ＋２ＳＤ， 然后将ｘ－ｔ－２ＳＤ的ＲＬＵｓ值带入标准曲线方程 中，求出对应的分析灵敏度平均值为０．６９ Ｕ／ｍｌ。 ２．４精密度（ｃＶ）评价 重复测定ＣＡ２４２高、低浓度样本（约１００ Ｕ／ｍｌ 与１０ Ｕ／ｍ１）各１０次，计算测定值的平均值和标 准差（ＳＤ），按照公式ＣＶ：ＳＤ／平均值Ｘ １００％， 计算精密度。本试剂的高浓度样本精密度为３．０％， 低浓度样本精密度为５．７％。 ２．５回收率检测 将ＣＡ２４２高浓度标准血清按１：９的比例加 入３份正常人血清，测定回收率为１０１．５％。 ２．６与ＣａｎＡｇ公司的ＣＡ２４２ ＥＬｌＳＡ试剂的比较 将本试剂与ＣａｎＡｇ公司的ＥＬＩＳＡ试剂平行 检测２０６份临床样本，采用ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５．０软 件进行相关性分析，结果显示两者相关系数，值为 ０．９９１１，斜率为１．０２７，截距为一０．２９９１（图３）， 表明两者的定量相关性良好。 ３讨论 由于ＣＡ２４２与ＣＡ１９—９、ＣＡ５０一样都是 Ｌｅｗｉｓ ａ血型上的抗原决定簇 引，可以捕获ＣＡ２４２ 的抗体，可能也可捕获ＣＡ１９．９与ＣＡ５０。因此在 ＣａｎＡｇ ＥＬＩＳＡ 图３ ＣＭＩＡ法与ＥＬＩＳＡ法的血清ＣＡ２４２定量相关性 Ｆｉｇｕｒｅ ３ Ｔｈｅ ｃｏｒｒｅ１ａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｓｅｒＬｌｍ ＣＡ２４２ ｂｅｔｗｅｅｎ ＣＭＩＡ ａｎｄ ＥＬＩＳＡ 双抗体夹心法检测ＣＡ２４２时，抗体配对的组合尤 为关键，至少要保证其中一株抗体能够特异性地识 别ＣＡ２４２的抗原决定簇。在ＣａｎＡｇ公司的 ＣＡ２４２ ＥＬＩＳＡ法中，捕获抗体ＭＡｂ Ｃ２４２特异性 识别Ｌｅｗｉｓ ａ，测定抗体ＭＡｂ Ｃ２４２特异性地与 ＣＡ２４２抗原决定簇结合。本研究在获得关键的 ４株单克隆抗体原料后，将对ＣＡ２４２呈阳性的这 ４株鼠单抗进行组合配对，为了最大程度的减小临 床样本中内源性ＣＡ１９－９与ＣＡ５０的干扰，本研 究设置了一组假阳性对照，排除了筛选出的捕获和 测定抗体都仅特异性识别Ｌｅｗｉｓ ａ的情况，因此， 对于抗体配对筛选的准确性有明显的促进作用。目 前ＣＡ２４２测定常用的方法有放射免疫分析法 （ＲＩＡ）、ＥＬＩＳＡ和化学发光免疫分析法（ＣＬＩＡ） 等。ＲｌＡ具有受外界因素影响较小，可直接测定、 灵敏、高效的优点，可检测浓度达０．０８ Ｕ／ｍｌ。但 它存在放射性污染、同位素衰变、半衰期短、标准 曲线稳定性差、操作复杂、时间长、重复性欠佳等 问题，临床已很少使用ＲＩＡ分析ＣＡ２４２。ＥＬＩＳＡ 使用最为广泛，但该法的局限性明显，如：①手工 操作，每个工作日一般只能进行一次检测；②操作 步骤和影响因素较多。本研究采用的磁微粒标记工 艺与吖啶酯标记工艺均经过了不断优化，确定了最 佳的标记条件及标记浓度，在检测体系方面，本 ＣＭＩＡ法结合全自动仪器进行了各组分最佳工作 浓度、孵育时间、洗涤次数等一些优化，从而保证 了试剂与仪器较好的配套。本研究建立的ＣＡ２４２ 全自动的ＣＭＩＡ分析法整个检测过程耗时约 ３０ ｍｉｎ，由于管式化学发光全自动化的优势，可保 证每小时检测２００个样本。本试剂检测ＣＡ２４２分 中国医药生物技术２０１７年６月第ｌ２卷第３期 ＣｈｉｎＭｅｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，Ｊｕｎｅ ２０１７，Ｖｏ１．１２，Ｎｏ．３ ２４１ 析灵敏度可达到０．６９ Ｕ／ｍｌ，线性范围可达３个数 量级，明显宽于ＥＬＩＳＡ法。与ＣａｎＡｇ公司的 ［７］Ａｌｂｅ￣ｉ Ｃ Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｄｙｎａｍｉｃ ｂｅｈａｖｉｏｒ：ｑｕｉｃｋ ｅｘｃｕｒｓｕｓ ｆｒｏｍ ｂａｓｉｃ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｔｏ ｓｏｍｅ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｅｕｒ Ｒｅｖ Ｍｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ，２００９，１３（１）：１３— ２１． ＥＬＩＳＡ法进行定量相关性分析，结果表明本试剂测 定血清ＣＡ２４２与市售试剂相关性好，且定量准确， ［８】 Ｚｈａｎｇ ＨＬ，Ｊｉａ ＡＰ，Ｘｉｎｇ Ｌ．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｖａｒｉｏｕｓ ｔｕｍｏｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｄｒａｉｎａｇｅ ｌｕｉｆｄ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｅｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｉｎｔ 可满足目前现代临床医学检测需求。 参考文献 ［１］ Ｒｏｙ Ｎ，Ｍａｌｉｋ Ｓ，Ｖｉｌｌａｎｕｅｖａ ＫＥ，ｅｔ ａ１．Ｂｒｇ１ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｂｏｔｈ ｔｕｍｏｒ－ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ａｎｄ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｔ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｓｔａｇｅｓ ｏｆ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，２０１４，３５（１）：１０５－１０６．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） 张海林，贾爱萍，邢丽．多种肿瘤标志物在结直肠癌患者术后腹腔 引流液中水平的表达与疾病的相关性研究．国际检验医学杂志， ２０１４，３５（１）：１０５—１０６． ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ，２０１５，２９（６）：６５８—６７１． ［２］Ｌｉ ＦＭ．Ｔｈｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆＣＥＡ，ＣＡ１９・９ ａｎｄ ＣＡ２４２ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃ．Ｊ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１０，２３（４）：４４８－４４９．（ｈａ Ｃｈｉｎｅｓｅ） 【９】Ｐａｌｍｑｖｉｓｔ Ｒ，Ｅｎｇａｒｈｓ Ｂ，Ｌｉｎｄｍａｒｋ Ｇ ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ＣＡ ２４２ ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｍａｔｃｈｅｄ ｃａｓｅ－ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｕｄｙ．Ｄｉｓ Ｃｏｌｏｎ Ｒｅｃｔｕｍ，２００３，４６（１１）：１５３８－１５４４． 李凤妹．ＣＥＡ、ＣＡ１９—９及ＣＡ２４２联检在胰腺癌诊断中的意义．放 射免疫学杂志，２０１０，２３（４）：４４８—４４９． ｆ３】Ｈｕａｎｇ ＺＢ，Ｚｈｏｕ Ｘ，Ｘｕ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｓｅｒｕｍ ｕｍｏｒｔ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ．ｗｏｒ１ｄ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ，２０１４，５（２）： １７０－１７６． ［１０］Ｈａｇｌｕｎｄ Ｃ，Ｌｕｎｄｉｎ Ｊ，Ｋｕｕｓｅｌａ ｅｔ ａ１．ＣＡ ２４２，ａ ｎｅｗ ｔｕｍｏｕｒ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ＣＡ１９・９，ＣＡ５０ ｎｄ ａＣＥＡ．Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，１９９４，７０（３）：４８７－４９２． ［１ １］Ｚｈａｎｇ ＬＺ，Ｇｏｎｇ ＹＦ，Ｔｕ ＺＸ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＣＡ２４２ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｈ ｔｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｔｓ ｓｉｎｉｇｉｃａｎｃｅ．ｆ ［４］ Ｋｉｍ Ｊ，Ｌｅｅ ＹＳ，Ｈｗａｎｇ ＩＫ，ｅｔ ａ１．Ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｎｔａｉｇｅｎ ａｓ ａ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｔｕｍｏｒ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ １９—９ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｄｕｃｔａｌ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｊ Ｋｏｒｅａｎ Ｍｅｄ Ｓｃｉ，２０１５， Ｃｈｉｎ Ｊ Ｐａｎｃｒｅａｔｏｌ，２００２，２０（１）：２０—２１．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） 张乐之，龚燕芳，屠振兴．胰腺癌患者血清ＣＡ２４２定量测定及其 意义．胰腺病学，２００２，２０（１）：２０—２１． ［１２］Ｅｎｇａｒｈｓ Ｂ．Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｃｕｔｏｆｆ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ＣＡ ２４２ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｈ ｔｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ． ３０（３）：２５９—２６３． ［５］Ｈａｒｓｈａ ＨＣ，Ｋａｎｄａｓａｍｙ Ｋ，Ｒａｎｇａｎａｔｈａｎ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ａ ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ．ＰＬｏＳ Ｍｅｄ，２００９，６（４）： ｌ００００４６． Ｄｉｓ Ｃｏｌｏｎ Ｒｅｃｔｕｍ，２００３，４６（３）：３ １３—３２１． ［１３】Ｇｆｉｍｉｚ—Ｇｒａｃｉａ Ｌ，Ｇａｒｃｉａ—Ｃａｍｐａｆｉａ ＡＭ，Ｓｏｔｏ－Ｃｈｉｎｃｈｉｌｌａ ＪＪ，ｅｔ ａ１． Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ ｂｙ ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｑｕｉｄ ［６１ Ｗａｎｇ Ｓ，Ｙｉｎ Ｊ，Ｌｉ ｅｔ ａ１．Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｍｉＲ一１５０ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ ｃｈｏｌｎｇｉａｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｏｎｃｏｌ ｐｈａｓｅ．ＴｒＡＣ Ｔｒｅｎｄｓ Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ，２００５，２４（１ １）：９２７—９４２． Ｒｅｐ，２０１５，３３（２）：８１９－８２５． Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｔｅｓｔ ｋｉｔ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ ２４２ ＹＡＮＧ Ｈｏｎｇ—ｂｉｎ，ＬＩＵ Ｊｉａｎｇ一、ｖｕ，ＷＥＮＧ Ｚｕ—ｘｉｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｌｉｕ－ｎｖ，ＸＵ Ｆｅｉ－ｈａｉ，ＳＵＮ Ｘｕ—ｄｏｎｇ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａ ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（ＣＭＩＡ）ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｓｅｒｔｌｌＴｌ ｈｕｍａｎ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ ２４２（ＣＡ２４２）ｌｅｖｅ１． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｄｏｕｂｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓａｎｄｗｉｃｈ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ，ｗｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｔｈｅ ｐａｉｒｅｄ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｆｏｕｒ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ＣＡ２４２ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ｒａｔｅ ｏｆ ｒｅｃｏｖｅｒｙ，ａｎｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｗｅｒｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ａｓｓａｙ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｖｉｙ ｏｆ ｔ７Ｃ１０（ｃｏａｔｅｄ）一３Ｈ１（１ａｂｅｌｅｄ）ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｎｄ ＣＡ１９－９ ｎｄ ａＣＡ５０ ｄｏ ｎｏｔ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＡ２４２．Ｔｈｅ ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ ｆｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｓｓａｙ ｗａｓ ３．０％ａｎｄ ５．７％．Ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｙ ｗａｓ ０．ｔ６９ Ｕ／ｍｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ １０１．５％．Ｔｈｅ ａｓｓａｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｅｌｌ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｕｒｒｅｎｔ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｋｉｔ（ｙ：１．０２７ｘ一０．２９９１，ｒ＝０．９９１１，Ｐ＜０．０５）． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ａｓｓａｙ ｐｅｒｆｏｒｍｓ ｗｅｌｌ ａｎｄ ａｌｌ ｔｈｅ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｐｅｒａｔｉｏｎｓ ａｒｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅｄ ａｕｔｏｍａｔｉｃａｌｌｙ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ ２４２；Ｄｏｕｂｌｅ－ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓａｎｄｗｉｃｈ ｍｅｔｈｏｄ；Ｃｈｅｍｉｌｍｉｕｎｅｓｃｅｎｃｅ Ａｕｔｈｏｒ Ａｆｉｌｆｉａｔｉｏｎｓ：Ｏｆｉｃｅ ｆｏｆ Ｒｅｔｉｒｅｍｅｎｔ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｔｉａｎｔａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃａｐｉｔａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｙ，Ｂｅｉｔｊｉｎｇ １０００５０，Ｃｈｉｎａ （ＹＡＮＧ Ｈｏｎｇ—ｂｉｎ）；Ｘｉａｍｅｎ Ｉｎｎｏｄｘ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．Ｌｔｄ．，３６１０２２ Ｃｈｉｎａ（Ｌ１Ｕ Ｊｉａｎｇ—ｗｕ，ＷＥＮＧ Ｚｕ—ｘｉｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｌｉｕ－ｎｖ，ＸＵ Ｆｅｉ．ｈａｉ， ＳＵＮ Ｘｕ－ｄｏｎｇ） Ｃ０ｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ Ａｕｔｈｏｒ：ＳＵＮ Ｘｕ—ｄｏｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｄｏｎｇ．ｓｕｎ＠ｉｎｎｏｄｘ．ｃｏｍ Ｉ￣，ｖｗ．ｃｍｂｐ ｎｅｔ．ｃｎ Ｃｈｉｎ ＭｅｄＢｉｏｔｅｅｈｎｏｌ２０１７，１２ Ｊ．＇２３８－２４１ ，
